基于羧基磁珠EDC、sulfo-NHS两步法偶联HBV-PreS1单克隆抗体制备免疫磁珠

为提高免疫磁珠工艺的稳定性和工艺可控性,可通过优化羧基磁珠EDC、sulfo-NHS两步法偶联HBV-PreS1单克隆抗体工艺中磁珠活化时间及抗体偶联pH条件。方法:采用全柱成像毛细管等电聚焦电泳技术检验HBV-PreS1单克隆抗体的等电点情况。活化后磁珠偶联氨基化生物素,与HRP标记亲和素酶,反应信号值与活化效率呈正比,检验活化效率。采用双抗体两步夹心法检测前S1抗原阳性低中高样本,检测信号值与免疫磁珠偶联的抗体量呈正比,检验抗体偶联效率及偶联工艺重复性。结果:HBV-PreS1单克隆抗体等电点PI为7.4,EDC、sulfo-NHS在pH 6.0的MES缓冲液中,30min时,信号值最高。HBV-PreS1单克隆抗体偶联磁珠时,在pH 6.0的MES缓冲液中,检验信号值最高。羧基磁珠EDC、sulfo-NHS两步法偶联HBV-PreS1单克隆抗体最佳活化时间为30min,最佳偶联缓冲液为pH 6.0的MES缓冲液,此时偶联效果最佳,工艺重复性最好。

HBeAg阴性乙型肝炎患者HBV-PreS1及HBV-DNA检测分析

目的分析HBeAg阴性的乙型肝炎患者血清HBV-PreS1及HBV-DNA检测的价值。方法收集114份HBeAg阴性的乙型肝炎患者血清标本,分别采用实时荧光定量PCR检测HBV-DNA、ELISA法检测HBV-PreS1抗原。结果 114例乙型肝炎患者血清中,HBV-DNA阳性69例,总检出率为60.5%,PreSl抗原阳性77例,总检出率为67.5%,HBV-DNA与PreSl抗原具有较好的相关性,HBeAg阴性的乙型肝炎患者血清HBV-DNA、HBV-PreS1阳性率差异无统计学意义;HBV-DNA复制拷贝数从<103～>107拷贝/ml,HBV-PreSl抗原检出率随HBV-DNA含量的增加逐渐上升。结论 HBeAg阴性的乙型肝炎患者血清中HBV-Pre-Sl抗原检测可以作为HBV-DNA检测的有效补充。

探讨HBV感染者血清HBV-PreS 1抗原检测与病毒复制的关系

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)前S1抗原与HBV复制的关系。方法采用ELISA法检测HBV血清标志物和HBV-PreSl抗原;采用荧光定量PCR方法检测HBV—DNA,对检测结果作分析。结果在e抗原(HBeAg)阳性的标本组中与在e抗原(HBeAg)阴性标本组中相比,阳性组HBV-PreS1抗原和HBV-DNA的检出率明显高于阴性组(P<0.01);HBVPreS1抗原和HBV-DNA有较高相关性(r=0.8760,P<0.01)。结论 HBV-PreS1与(HBeAg和HBV-DNA)有良好的相关性在病毒复制方面,HBV-PreS1抗原的检测结果也能比较准确地反映乙肝病毒复制情况。

前S1抗原与HBV血清标志物及HBV-DNA相关性的探讨

目的探讨前S1抗原(PreS1)与HBV血清标志物及HBV-DNA相关性。方法对102例慢性乙型肝炎患者和73例健康人采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HBV血清标志物和PreS1及聚合酶链反应(PCR)方法检测HBV-DNA。结果102例慢性乙型肝炎患者中,PreS1和HBeAg与HBV-DNA的总符合率分别为70.6%和75.5%;PreS1的敏感性高于HBeAg,但特异性则相反;HBeAg阴性患者部分仍存在着病毒复制;随着HBV-DNA拷贝数的升高,PreS1和HBeAg的阳性率亦随之升高;在HBV-DNA低拷贝数时PreS1的阳性率明显高于HBeAg。结论PreS1的检测可以较好地反映HBV存在和复制的情况,PreS1作为辅助或补充指标联合HBV血清标志物与HBV-DNA同步动态监测,具有重要的临床应用价值。

乙型肝炎病毒前S1抗原与HBV DNA和HBV-M及肝功能的相关性探讨

目的探讨兰州地区乙型肝炎病毒(HBV)感染者血清中前S1抗原(Pre-S1Ag)与HBV DNA、HBV-M及肝功能之间的相关性。方法对905例HBV感染者(HBV感染组)及100例健康体检者(健康对照组)进行Pre-S1Ag、HBV-M、HBV DNA和肝功能检测。结果 905例标本中,Pre-S1Ag和HBV DNA阳性率分别为68.51%(620/905)和67.96%(615/905),差异均无统计学意义(χ2=30.064,P>0.05);570例HBeAg阳性组中,HBV Pre-S1阳性率为85.08%(485/570),显著高于HBeAg阴性组的Pre-SAg1阳性率40.30%(135/335),差异有统计学意义(χ2=108.881,P<0.01)。Pre-S1Ag阳性组与阴性组ALT、AST异常率分别为53.22%、25.96%和51.29%、32.98%,差异有统计学意义(χ2ALT=53.148,P<0.001,χ2AST=66.635,P<0.001)。结论 Pre-S1Ag是乙肝病毒感染与复制的可靠指标,与HBV-DNA阳性相关度高,是对HBeAg的重要补充和加强,可为指导临床治疗提供更及时可靠的实验依据。

PreS1抗原与HBeAg联合检测用于预测HBV-DNA的水平

目的:联合检测慢性乙型肝炎病毒(HBV)携带者的血清前S1(PreS1)抗原和乙肝e抗原(HBeAg)两项指标,判断其与HBV-DNA定量的相互关系。方法:采用双抗体夹心酶联免疫吸附分析(ELISA)法(两步法)检测PreS1抗原,双抗体夹心ELISA法(一步法)检测HBeAg,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测HBV-DNA。结果:在335例慢性HBV携带者患者中,PreS1抗原阳性率为42.7%,HBeAg阳性率为36.4%,HBV-DNA阳性率为53.4%。在179例HBV-DNA阳性患者中,HBeAg阳性109例(60.9%);156例HBV-DNA阴性患者中,HBeAg阴性143例(91.7%)。在179例HBV-DNA阳性患者中,PreS1抗原阳性89例(49.7%);在156例HBV-DNA阴性患者中,PreS1抗原阴性102例(65.4%)。PreS1和HBeAg双阳性的感染者HBV-DNA阳性率为93.8%(45/48);在PreS1和HBeAg双阴性的感染者中,HBV-DNA阳性率仅为22.0%(26/118)。结论:HBeAg与HBV-DNA的相关性比PreS1抗原与HBV-DNA的相关性高。PreS1和HBeAg双阳性的感染者HBV的复制程度高,而双阴性的感染者复制程度较低。因此,PreS1抗原与HBeAg联合检测可用于预测HBV-DNA的水平。

HBV-DNA与HBV PreS1 Ag、HBeAg应用价值的探讨

目的探讨HBV-DNA、HBV PreS1 Ag和HBeAg3指标在提示乙型肝炎病毒复制、病情转归以及疗效观察等方面的作用。方法采用荧光定量PCR法检测HBV-DNA,以<5.0×102拷贝/mL为阴性。采用ELISA法检测"乙肝两对半"和HBV PreS1 Ag。结果151例乙肝病人中有58例HBeAg阳性标本,HBV-DNA与HBeAg、HBV PreS1 Ag阳性符合率分别为96.6%、87.9%。71例接受抗病毒治疗和80例未接受抗病毒治疗病人HBV-DNA与HBV PreS1 Ag阳性一致率分别为84.5%和46.6%,差异有统计学意义(χ2=20.944,P<0.01)。结论HBeAg阳性仍是现阶段乙型肝炎病毒复制监测的理想指标,HBV PreS1 Ag可作为HBV感染及既往或现症病毒复制的支持性指标,但不适于作为抗病毒治疗监测指标。

乙肝病毒PreS1抗原的临床应用

目的:评价检测乙肝病毒PreS1抗原的临床应用价值.方法:将临床送检的1000份乙肝病毒表面抗原(HBsAg阳性的血清标本进行PreS1抗原检测,同时用FQ-PCR进行HBV-DNA测定.结果:PreS1总阳性率为52.0%,HBV-DNA阳性率为50.8%,HBeAg阳性率为21.0%.PreS1总阳性率明显高于HBeAg阳性率.PreS1与HBV-DNA的总符合率为94.4%.结论:PreS1抗原作为乙肝感染和复制的血清学指标敏感性高于HBeAg,对提示乙肝患者的病情发展和转归有重要临床意义.PreS1可以作为一项新的乙肝病毒复制的传染性指标.

乙肝患者血清标志物与前S1抗原及HBV-DNA相关性分析

目的探讨乙肝患者血清标志物(HBV-M)与前S1抗原(PreS1)及HBV-DNA之间的相关性。方法采用实时荧光定量PCR对225例HBV感染者血清中HBV-DNA含量进行检测,同时运用ELISA方法检测HBV血清标志物和PreS1,按照不同HBV-M模式对PreS1和HBV-DNA进行分析。结果在受检的225例标本中,大三阳组中HBV-DNA阳性率95%,PreS1阳性率96.66%,HBV-DNA和PreS1阳性率接近,组间比较差异无统计学意义(χ2=0.00,P>0.05);小三阳组中HBV-DNA阳性率50.86%,PreS1阳性率93.10%,PreS1阳性率明显高于HBV-DNA阳性率,组间比较差异有统计学意义(χ2=51.32,P<0.01);在HBsAg阳性中HBV-DNA阳性率66.32%(126/190),PreS1阳性率94.74%(180/190),高于HBV-DNA阳性率,组间比较差异有统计学意义(χ2=48.93,P<0.01);在HBeAg阳性中HBV-DNA阳性率为93.55%(58/62),PreS1阳性率为95.16%(59/62),二者差异无统计学意义(χ2=0.00,P>0.05);在HBeAg阴性中HBV-DNA阳性率为42.33%(69/163),PreS1阳性率为76.07%(124/163),高于HBV-DNA阳性率,组间比较差异有统计学意义(χ2=38.42,P<0.01)。结论在HBeAg阳性中,HBV-DNA和PreS1有较高相关性,三者联合检测有利于全面监测乙肝病情和提高乙肝疗效。

不同血清学标志物与HBV-DNA含量及Pre-S1在诊断乙肝病毒复制中的价值

目的了解乙型肝炎血清学不同标志物模式(HBV-M)与乙肝病毒DNA含量及乙肝病毒前S1蛋白的关系,为预测乙型肝炎病毒的传染程度与乙肝的预防、诊断及治疗提供实验室依据。方法采用美国ABBOTT公司生产的AXSYM全自动免疫分析仪和微粒子酶免检测试剂盒对530例携带不同血清学标志物的乙肝患者进行乙肝五项指标检测,并用聚合酶链反应定量检测血清HBV-DNA含量,同时,用ELS IA法检测乙肝病毒前S1抗原。结果五种HBV免疫模式中HB sA g,HB eA g和HB cA b同时阳性,其HBV-DNA定量阳性和HBV-P reS1的检出率分别为94.1%和92.8%;HB sA g,HB eA b和HB cA b阳性组的检出率分别为53.5%和40.1%;其它不同血清学模式组也有不同的阳性率。结论P re-S1可敏感反映乙型肝炎病毒的复制情况,尤其可反映HB eA g阴性的乙肝患者仍存在病毒复制。HBV-DNA含量与P re-S1呈正相关,HBV-DNA、乙肝病毒五项标志和前S1蛋白联合检测,对更好地早期诊断HBV感染,了解病毒的复制情况,疗效观察和预后判断均具有重要意义。

HBV-DNA含量及Pre-S1检测在诊断乙肝病毒复制中的临床意义

目的了解乙肝患者不同血清学标志物模式(HBV-M)与乙肝病毒DNA含量及乙肝病毒前S1蛋白的关系,为预测乙型肝炎病毒的传染程度、乙肝的预防、诊断及治疗提供实验室依据。方法采用美国ABBOTT公司生产的AXSYM全自动免疫分析仪和微粒子酶免检测试剂盒对456例携带不同血清学标志物的乙肝患者进行乙肝五项指标检测,并用聚合酶链反应定量检测血清HBV-DNA含量,同时,用ELISA法检测乙肝病毒前S1抗原。结果五种HBV免疫模式中HBsAg、HBeAg和HBcAb同时阳性,其HBV-DNA定量阳性和HBV-PreS1的检出率分别为94.1%和81.2%;HBsAg、HBeAb和HBcAb阳性组的检出率分别为53.4%和43.7%;其他不同血清学模式组也有不同的阳性率。结论Pre-S1可敏感反映乙型肝炎病毒的复制情况,尤其可反映HBeAg阴性的乙肝患者仍存在病毒复制。HBV-DNA、乙肝病毒五项标志和前S1蛋白联合检测,对更好地早期诊断HBV感染,了解病毒的复制情况,疗效观察和预后判断均具有重要意义。

ASGPR与HBV preS1蛋白之间相互作用的验证

目的验证去唾液酸糖蛋白受体(asialoglycoprotein receptor,ASGPR)与乙肝病毒前S1蛋白(HBV preS1蛋白)之间的相互作用,确认ASGPR作为乙肝病毒肝细胞膜受体在介导乙肝病毒感染的分子机制中的作用。方法分别用哺乳动物双杂交及体外免疫共沉淀技术验证ASGPR与HBV preS1蛋白之间的相互作用,操作方法参照试剂盒说明书进行。结果哺乳动物双杂交实验结果提示,ASGPR与HBV preS1蛋白在细胞环境中具有相互作用;免疫共沉淀实验结果提示,ASGPR与HBV preS1蛋白在非细胞环境中具有相互作用。结论 ASGPR可能是介导HBV入侵的肝细胞膜受体之一。

荧光定量PCR检测HBV DNA与血清HBV标志物和preS1相互关系研究

目的探讨荧光定量PCR法检测乙型肝炎病毒(HBV)DNA与HBV血清免疫学标志(HBVM)模式,preS1之间的相互关系及临床意义。方法采用实时荧光定量PCR法(FQ-PCR)检测801例血清的HBVDNA,用ELISA方法对其免疫学标志,preS1同时进行检测。结果HBVDNA的总检出率为67·0%,preS1的总检出率为74·9%。其中,在模式HBsAg(+),HBeAg(+),HBcAb(+)中血清HBVDNA含量明显高于HBsAg(+),HBeAb(+),HcAb(+)及HBsAg(+),HBcAb(+)组。在HBsAg(-)模式中HBVDNA亦有检出。在HBsAg(+),HBeAb(+),HcAb(+)组,HBVDNA的检出率为55·8%,而preS1的检出率为69·8%,两者有显著差异(P<0·01),其余HBVM模式,无显著差异(P>0·05)。结论HBVM和preS1提供了HBV感染的间接证据,荧光定量PCR法检测HBVDNA准确灵敏,是HBV感染及复制的直接证据,HBVM,preS1和HBVDNA的检测各有其独特的临床检测意义,在乙型肝炎的诊断治疗中均具有重要的临床指导价值。

不同HBV基因型慢性乙型肝炎患者的血清HBV DNA、PreS1、HBeAg检测结果分析

目的调查安徽安庆地区慢性乙型病毒性肝炎患者所感染的乙型肝炎病毒(HBV)的基因型构成,并探讨不同HBV基因型患者的血清HBV DNA、PreS1、HBeAg检测结果及临床价值,为乙型病毒性肝炎患者的个体化医疗提供依据。方法选取慢性乙肝患者共226例,采用巢式PCR技术对其进行基因分型检测,采用实时荧光定量聚合酶链反应法(RT PCR)检测患者血清HBV DNA,用酶联免疫吸附分析法(ELISA)检测血清PreSl抗原与HBeAg。结果在调查的乙型病毒性肝炎患者中,以B基因型(占58.0%)与C基因型(占41.1%)HBV感染为主。B基因型患者血液中HBV DNA阳性率(57.2%)与C型患者(63.4%)没有统计学差异;B基因型患者血液中PreS1抗原阳性率(48.1%)与C型患者(48.4%)也没有明显差异;C基因型HBV感染的患者血液HBeAg阳性率(46.2%)高于B基因型患者(32.1%)。结论安徽安庆地区在慢性乙肝的卫生防治策略上,应重点关注B、C型基因型HBV感染的防治。而C基因型HBV感染患者具有高HBeAg阳性率,应采取更积极、有效干预措施。

对乙型肝炎患者检测乙肝表面抗原大蛋白和前S1抗原的区别和临床意义

[目的]检测乙肝患者血清中乙肝表面抗原大蛋白（Hepatitis B Virus Large Surface Protein,LHBs）、乙肝前S1、HBV DNA,探讨LHBs用于乙肝患者临床诊断的意义。[方法]采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测LHBs以及乙肝前S1,采用化学发光方法检测乙肝两对半,采用荧光定量PCR方法对患者HBV DNA进行检测。[结果]（1）相同乙肝模式患者血清LHBs与HBV DNA检出率比较差异无显著性意义（P〉0.05）;（2）HBeAg阳性患者血清中LHBs与HBV DNA阳性率均明显高于HBeAg阴性患者,差异有显著性意义（P〈0.05）;（3）相同乙肝模式患者血清乙肝前S1的检出低于HBV DNA的检出,两者相比较差异有显著性意义（P〈0.05）。[结论]LHBs可以弥补由于乙肝病毒变异引起的HBeAg检测的不足,LHBs可以反映病毒复制。

对乙型肝炎患者检测乙肝表面抗原大蛋白和前S_1抗原的区别和临床意义

目的检测乙型肝炎(下称乙肝)患者血清中乙肝表面抗原大蛋白(LHBs)、乙肝前S1、HBV-DNA,探讨LHBs用于乙肝患者临床诊断的意义。方法采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测LHBs以及乙肝前S1,采用化学发光方法检测乙肝两对半,采用荧光定量PCR方法对患者HBV-DNA进行检测。结果 (1)相同乙肝模式患者血清LHBs与HBV-DNA检出率差异无统计学意义(P>0.05);(2)HBeAg阳性患者血清中LHBs与HBV-DNA阳性率均明显高于HBeAg阴性患者,差异有统计学意义(P<0.05);(3)相同乙肝模式患者血清乙肝前S1的检出低于HBV-DNA的检出,两者差异有统计学意义(P<0.05)。结论 LHBs可以弥补由于乙肝病毒变异引起的HBeAg检测的不足,并在一定程度上反映了乙肝患者肝功能状况。

HBVPreS1抗原和HBV DNA的监测及临床评价

目的研究HBV前S1抗原检测的临床价值,即HBVPreS1抗原与具有病毒活动性复制意义的指标HBeAg和HBV-DNA之间的相关性其与肝功能指标ALT之间的关系。方法HBV前S1抗原和血清标志物(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb-IgG、HBcAb-IgM)采用ELISA法检测;肝功能(ALT)用酶学速率法检测;HBV DNA用荧光定量PCR法检测。结果①HBeAg阳性组其HBV PreS1抗原检出率高。②HBV PreS1抗原与具有病毒活动性复制意义的指标HBV-DNA有良好的一致性。③慢性活动性肝炎肝功能指标ALT>40 u/l组其HBV PreS1抗原检出率高。结论HBVPreS1抗原和HBV DNA的检测结果可以较好地反映HBV的复制及慢性肝炎的活动情况。PreS1抗原可以作为HBeAg和HBV-DNA的补充,也可作为判断慢性乙型肝炎患者病情活动性的一项指标。对乙肝的诊断、疗效判断与观察具有较高的价值。

乙肝病毒血清标志物、PreS1抗原检测与肝癌诊断的关系

目的探索研究前S1抗原(PreS1-Ag)与原发性肝癌(PHC)发生的关系。方法对200例已确诊的肝癌患者及200例已确诊的非肝癌就诊者用ELISA法进行乙肝五项血清学标志物及PreS1-Ag检测。结果肝癌患者血清中HBsAg/AntiHBe(+/+)的百分率远大于HBsAg/HBeAg(+/+)的百分率,亦远大于PreS1-Ag(+)百分率;而非肝癌就诊者血清HBsAg/AntiHBe(+/+)的百分率也远小于肝癌患者。结论HBsAg/AntiHBe(+/+)能反映肝脏发生癌变的危险性增加。而血清PreS1-Ag在一定程度上反映病毒的活动性复制,可弥补HBV血清标志物在肝癌检测中的不足。

HBV感染者血清表面抗原大蛋白,DANE颗粒,HBV-DNA与PreS1蛋白检测分析

目的 检测HBV感染者血清中乙肝表面抗原大蛋白（LHBS）,DANE颗粒,HBV-DNA和PreS1蛋白,探讨LHBS在临床诊治中的价值.方法 对1 042例HBV感染者采用酶联免疫吸附试验检测乙肝病毒HBeAg,LHBS,DANE颗粒和PreS1蛋白,并采用定性PCR检测HBV-DNA.结果 245例HBeAg（＋）的HBV感染者中,LHBS阳性率（96.33%）,DANE颗粒阳性率（90.20%）,分别与HBV-DNA阳性率（92.65%）比较,差异无统计学显著性意义（P＞0.05）,三者均明显高于PreS1阳性率（66.53%）,差异均有统计学显著性意义（P＜0.01）;797例HBeAg（-）的HBV感染者中,LHBS阳性率（78.17%）高于DANE颗粒阳性率（56.46%）,HBV-DNA阳性率（33.12%）和PreS1阳性率（17.44%）,依次比较差异均有统计学显著性意义（P＜0.01）.结论 LHBS是判断HBV感染者体内病毒复制程度的可靠指标,在HBeAg（-）的HBV感染者中,LHBS有指导治疗、预后判断的作用;DANE颗粒亦是判断病毒复制程度的可靠的新指标.LHBS和DANE可用于暂无条件开展PCR实验的的基层医疗单位,代替HBV-DNA检测.

乙型肝炎患者血清HBV-DNA载量与前S1抗原和e抗原关系探讨

目的探讨乙型肝炎患者血清病毒DNA（HBV—DNA）载量与前S1抗原（PreS1）、e抗原（HBeAg）的关系；评价PreS1的临床检测意义。方法30例健康对照者血清和272例未经抗病毒治疗的乙型肝炎患者血清，同时采用实时荧光定量PCR法测定HBV-DNA载量、ELISA法检测PreS1和HBeAg。结果健康对照HBV—DNA载量、PreS1和HBeAg均阴性。乙肝患者血清HBV—DNA〈10^3copies／ml150例，其中PreS1阳性81例（54．00％），HBeAg阳性10例（6．67％）；10^3～1065 copies／ml44例，其中PreS1阳性22例（50．00％），HBeAg阳性16例（36．36%）；10^5～10^8 copies／ml 68例，其中PreS1阳性59例（86．76％）．HBeAg阳性43例（63．24％）；〉10^8 copies／ml 10例，其PreS1和HBeAg均为阳性。以HBV—DNA载量10^3copies／ml为切割值，则PreS1和HBeAg的敏感性分别为74．59％．56．56％，特异性分别为46．00％、93．33％，阳性预测值分别为52．91％、87．34％，阴性预测值分别为69．00％、72．54％，准确率分别为58．82％、76．84％。结论随着HBV—DNA载量的升高，PreS1和HBeAg的检出率大幅提高；虽然PreS1判断HBV复制的敏感性高于HBeAg，但其特异性、阳性预测值、阴性预测值、准确率均低于HBeAg。