HBVC基因启动子变异患者血清铁蛋白对干扰素治疗的影响

目的 :探讨血清铁蛋白 (SF)水平对有HBVC基因启动子 (BCP)变异的患者干扰素疗效的影响。方法 :采用错配PCR RFLP技术检测HBVC基因启动子 (BCP)变异 ,并检测其血清铁蛋白 (SF)水平。结果 :随着病情的加重SF水平升高 ,且当SF≥ 30 0ng/ml时 ,可明显降低干扰素的疗效 (P <0 0 5 ) ;发生BCP变异的病例 ,在干扰素治疗的过程中 ,SF水平升高的程度明显高于野生株组 (P <0 0 0 1)。结论 :提示SF升高与肝功能损伤有着密切关系 ,SF水平升高可降低干扰素治疗的有效率 ,且有变异的病例可促使SF水平升高。

水动力注射法构建乙型肝炎病毒感染小鼠模型

目的建立尽量接近人类自然条件下发生的急性病毒性肝炎感染动物模型,研究其发病机制和治疗方法。方法选择中国地区高流行的人HBV C基因型具有复制能力的1.2倍HBV基因组为材料,构建可高效表达HBV基因组的重组腺病毒相关病毒载体pZAC2.1-HBV。利用尾静脉水动力注射法将pZAC2.1-HBV注入小鼠。结果瞬间转染人肝癌细胞系HepG2细胞后,在细胞上清和裂解液中检测到HBsAg。ELISA方法检测小鼠血清中HBsAg和HBeAg的水平可持续表达14天,随后抗-HBs、抗-HBe出现。同时在14天之内可检测到血清中HBV-DNA特异片段。结论采用水动力注射法成功建立HBV感染急性小鼠模型。

干扰素作用下乙型肝炎病毒的变异机制

目的:体外研究干扰素-α2b(IFN-α2b)作用下乙肝病毒(HBV)突变机制. 方法:以不同浓度IFN-α2b反复作用于HBV分泌型HepG2.2.15细胞,Western blot方法检测培养细胞上清中AFP,提取培养细胞上清中HBV基因组DNA,以聚合酶联反应扩增HBV C基因,克隆入pGEM-T easy 载体,鉴定后行测序分析. 结果:Western blot方法检测各组培养细胞上清中AFP, 实验组AFP未见明显减少;序列分析表明,对照组前C/ C基因克隆有两种类型,同源性93%,有10个氨基酸的差别,其中6个氨基酸相比,氨基酸的性质相同; 实验组同样具有这两种克隆,其中优势株所占比例分别为12/15、14/14和9/15,高剂量组与对照组相比优势株所占比例差异有统计学意义(P<0.05);实验组高剂量IFN 组出现了四个插入/缺失突变克隆,造成前C/C基因移框突变,其中C31-2插入突变发生在前C区,另外3个突变均发生在C区,与优势株相比平均同源性97%以上. 结论:在rhIFN-α高剂量条件选择下,能检测到HepG2. 2.15HBV前C/C基因插入或缺失突变株,突变株与优势株相比基因序列同源性平均在97%以上.