整合型HBV DNA前C区突变和p53基因突变与肝细胞癌发生的关系

背景与目的:乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus,HBV)的慢性感染是肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)发生的主要危险因素,但其确切的作用机理还不清楚。本研究拟探讨整合型HBV前C区突变、p53基因突变与HCC发生的关系,以期更好地了解HCC发生的分子机理。方法:应用聚合酶链反应技术(PCR)和聚合酶链反应-单链构象多态(singlestrandconformationpolymorphismanalysisofpolymerasechainreactionproducts,PCR-SSCP)技术对28例肝癌组织、25例癌旁肝硬化组织、12例肝硬化组织和15例正常肝组织标本内的整合型HBVDNA及其前C区基因突变和肝细胞p53基因突变进行检测分析。结果:(1)正常肝组织、肝硬化组织、癌旁肝硬变组织和肝癌组织中整合HBVDNA阳性率分别为6.66%、66.67%、96.43%和96.43%,正常肝组织与其它三组间阳性率差异有非常显著性(P<0.005);(2)4组整合型HBVDNA前C区突变率分别为0%、25.00%、48.15%和70.37%,4组间的突变率差异有显著性(P<0.05);(3)肝癌组织的p53基因突变率(57.14%)明显高于肝硬化组(16.67%)(P<0.05);(4)不同肝组织中p53基因突变率与整合HBVDNA阳性率、HBV前C区基因突变率呈正相关。结论:在肝细胞癌的发生、发展中整合HBVDNA及其前C区基因突变和p53基因突变可能起协同作用。

乙型肝炎病毒前-C区1896和基本C区启动子区1762、1764双突变及YMDD变异对拉米呋啶治疗的影响

目的 :研究乙型肝炎病毒前 - C区 G1896 A突变和基本 C区启动子区 A176 2 T、 G176 4 A双突变对拉米呋啶治疗的影响。方法 :采用直接测序法对服药前、中、后的血清标本的逆转录多聚酶区及前 - C、基本 C区启动子区进行检测。结果 :1前 - C区 G1896 A和基本 C区启动子区 A176 2 T、G176 4 A双突变在出现治疗中病毒学反弹与未出现治疗中病毒学反弹患者间及发生血清学转移与未发生血清学转换患者间差异无显著性 (P>0 .0 5 ) ;2 G1896 A突变在发生 YMDD变异和未发生 YMDD变异的患者间差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ,发生 YMDD变异的患者很少伴有 G1896 A突变率低 (9% ) ;3出现治疗中病毒学反弹的患者 YMDD变异增加 ,与未出现治疗中病毒学反弹的患者比较差异有显著性 (P<0 .0 5 )。结论 :前 - C区 G1896 A和基本 C区启动子区 A176 2 T、 G176 4 A双突变对拉米呋啶治疗后出现的治疗中病毒学反弹和血清学转换没有影响 ;在 G1896 A突变株 YMDD变异减少 ;YMDD变异株的出现对治疗后出现的治疗中病毒学反弹有影响 ;YMDD变异可能是加剧肝细胞损伤引起治疗中病毒学反弹的因素之一。

234例慢性乙型肝炎患者HBV前C/BCP区突变分析

目的调查慢性乙型肝炎患者血清HBV前C/基本核心启动子(BCP)区的突变情况,分析各种突变对HBeAg表达的影响。方法抽提患者血清DNA,采用改进的巢式PCR技术,扩增HBV前C/BCP区基因,对PCR产物进行DNA测序。用NTI软件比对结果,根据文献报道,选取1753、1762、1764、1862、1896和1899共6个位点进行突变分析,并重点分析不同突变对患者血清HBeAg阳性率和病情的影响。结果在234例中6个位点均无突变者为74例(31.6%),其血清HBeAg阳性率为74.3%(55/74)。在234例中6个位点检出至少1种突变的病例为160例(68.4%),突变形式包括4种单一位点突变和21种组合形式的突变;检出G1896A突变73例(31.2%),其中36例检出有共存未突变序列,37例仅检出突变序列,后者血清HBeAg的阳性率为18.9%(7/37)。检出G1896A以外其他形式突变的有87例,HBeAg阳性率为63.2%(55/87);其中以A1762T+G1764A最为常见,HBeAg阳性率为69.4%(34/49)。在1753、1862位点上检出4种特殊碱基突变,前C区有基因片段插入或缺失的有2例。结论多数慢性乙型肝炎患者在HBV前C/BCP区可检出突变,突变形式多样,其中G1896A突变样本血清HBeAg阳性率显著下降,而其他突变对其影响较小。应用DNA序列测定法分析HBV前C/BCP区基因突变,获得的信息全面,对临床评估病情进展和实施抗病毒治疗有参考价值。

基因芯片检测HBV基因突变的临床意义——81例慢性乙型肝炎患者HBV前C区和BCP区突变的临床资料分析

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)基因组前C区变异和基本核心区启动子(basiccorepromoter.BCP)变异的临床意义以及基因芯片在慢性乙型肝炎(慢乙肝)临床检测中的应用。方法:用基因芯片法检测HBVDNA阳性慢乙肝患者的血清标本,根据HBV血清标志物的实验结果将受试者分为HBeAg(+)组和HBeAg(-)组,比较分析两组患者的临床资料,并根据变异在不同类型慢乙肝患者中的检出状况,以评定HBV前C区和BCP区变异的临床意义。结果:81例血清HBVDNA阳性患者中检出前C区变异51例,突变检出率为63.0%,检出BCP区变异60例,突变检出率为74.1%,其中HBeAg(-)者变异的检出率均明显高于HBeAg(+)者,突变株的检出以慢性重型肝炎最高,其次是慢乙肝重度、中度患者,慢乙肝轻度患者最低,表明HBV前C区突变与病情轻重及e系统血清标志有关,而与性别、年龄无关。结论:基因芯片定量检测HBV基因突变高效可靠,对于判断慢乙肝患者病情轻重、预后好坏和指导用药,具有一定临床参考价值。

应用基因芯片技术检测乙型肝炎病毒前-C区/BCP区基因突变的研究

目的 探讨利用基因芯片技术检测乙型肝炎病毒 (HBV)前 C区 /BCP区基因突变方法的临床价值及前 C区 /BCP区基因突变的临床意义。方法 应用基因芯片技术检测 4 6例急慢性肝病的HBV前 C区A1896 (nt1896G→A)、A1899(nt1899G→A)及HBVC基因启动子 (BCP)T176 2A176 4 (nt176 2A→T、nt176 4G→A)四位点突变 ,并探讨该技术的临床应用价值。结果 用基因芯片法测定HBV基因特定变异位点特异性强 ,阳性率为 87 0 %。A1896突变 18例 (4 5 0 % ) ,A1899突变 10例 (2 5 0 % ) ,T176 2A176 4联合突变 30例(75 0 % ) ,多位点突变 14例(35 0 % )。各变异组与未变异组比较 ,肝功损害均有显著性差异 (P <0 0 5～ 0 0 1)。前 C区 /BCP区基因突变在乙型肝炎肝硬化及慢性乙型肝炎中较为常见 ,在急性乙型肝炎中未检出。结论 应用基因芯片法测定HBV特定变异位点特异性强 ,可一次同时检测多个突变位点 ,具有一定的临床应用价值。

乙型肝炎病毒前C区1896点突变及临床意义

为了解兰州地区HBV前c区1896位点突变的存在及临床意义，我们对86例乙肝抗体阳性而抗原阴性慢乙肝患者进行了错配PCR限制片段长度多态性分析（ｍｐ－ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）。结果显示ＨＢＶ ＤＮＡ阳性２４．４２％（２１／８６），变异者１９．０５％（４／2１）。说明体内ＨＢＶ并未完全清除，兰州地区存在ＨＢＶ前ｃ区1896位点突变且与病情似有一定关系。

乙型肝炎病毒前C区1896位点突变的PCR分析法

目的分析乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）前Ｃ区突变与ＨＢＶ感染患者肝脏病变的关系，建立ＨＢＶ前Ｃ区１８９６位点突变的ＰＣＲ分析方法。方法根据ＨＢＶ前Ｃ区ＤＮＡ序列，采用３′－碱基特异性聚合酶链反应分析ＨＢＶ第１８９６位核苷酸的突变，并检测了１２６例临床血清标本。结果成功分析了ＨＢＶ前Ｃ区１８９６位点突变，１２６例临床标本突变株检出率为４７．２％。结论本法操作简单，重复性好。

我国常见乙型肝炎病毒基因型与基本核心启动子及前C区突变关系的初步研究

收集81份HBV DNA阳性血清标本,经PCR扩增和序列测定确定其中有50份属于基因型C,31份属于基因型B;C基因型的基本核心启动子BCP T1762/A1764的突变率(38%)明显高于B基因型(12.9%,P<0.05);前C区A1896的突变在B、C两基因型间无显著性差异,B基因型为9.7%,C基因型为12%,P>0.05;HBeAg的表达与否与BCP双突变或前C区A1896突变均无明显相关性。经定量PCR检测证明,HBeAg阳性组中的HBV DNA含量明显高于抗-HBe阳性组,P<0.05。组内BCP双突变株和野生株及前C1896突变株和野生株的HBV DNA含量无显著性差异。

原发性肝癌患者血清及肝癌组织中HBV前C区1896位突变株的研究

为了解HBV前C区1896位G→A突变株和原发性肝细胞癌（HCC）的关系，采用错配引物PCR（m少PCR）扩增结合限制性片段长度多态性分析（RFLP），检测了83例HBsAg阳性HCC患者血清样本中的HBV前C区突变株，并与66份HBsAg（＋）的慢性乙型肝炎患者的血清标本对照。结果发现：HCC组有47例检出HBV前C区基因（56．6％），其中16例存在HBV前C区突变株（34．0％）；慢性乙肝组有33例检出HBV前C区基因（50．0％），其中仅4例存在HBV前C区突变株（12．1％），两组HBV前C区突变株检出率有显著差异（P＜0．05）。为进一步研究HBV前C区突变株在HCC患者中的状况，同步检测了8例HBsAg阳性HCC患者肝癌组织和血清中HBV前C区突变株，发现在HBV前C区基因阳性的肝癌组织、癌周组织和血清中HBV前C区突变株分别为3／8（37．5％）、3／7（42.9％）和1／5（20．0％），均比慢性肝炎组高，提示HBV前C区1896位G→A突变珠在原发性肝癌的发生中可能有一定作用。

慢性乙型肝炎患者HBe系统与HBV DNA前C区基因突变的分析

研究HBV DNA前C区基因突变与HBe系统的关系。方法:对88例慢性乙型肝炎患者进行HBVDNA基因检测(PCR法)、分子克隆及序列分析。结果:88例患者中,血清HBV DNA阴性22例,阳性66例。从阳性患者中检出野生株感染22例,占33.3%;突变株感染44例,占66.7%。44例突变株感染者中38例属1898位点及/或1901位点突变,占86.4%;其他形式突变6例,占13.6%;66例血清HBV DNA阳性中,CHB 49例,LC 17例,突变株感染检出率分别为69.3%、58.8%,两者经统计学处理无显著性差异(P>0.05)。在HBe系统中,HBV DNA阳性患者属HBeAg(+)者44例,其中突变株检出率为75.0%(33/44),属抗HBe(+)者20例,其中突变株检出率为50.0%(10/20),两者经统计学处理有显著性差异(P<0.05)。结论:①在HBe系统中,HBeAg(+)患者的突变株检出率高于抗HBe(+)患者(p<0.05),提示其位点突变株在HBeAg(+)中占优势,与以往文献报道中关于1896位点突变株主要存在于抗-HBe(+)患者中的结论不尽相同。因此,应考虑HBeAg(+)患者也存在病毒突变的可能。②HBV慢性感染过程中,CHB患者与LC患者的突变株感染检出率无显著性差异(P>0.05).表明在1898及/或1901位点的突变株感染与肝脏损害程度无平行关系。

无症状HBV感染者病理与前C区突变关系研究

目的 研究慢性无症状HBV感染者HBV前C区 1896位G -A突变发生情况及肝组织炎症活动度、纤维化分级 ,探讨其临床意义。方法 采用苏木精依红 (HE)及网状纤维 (Gorden -Sweet法 )和胶原纤维 (GV)法染色研究肝组织炎症活动度、纤维分级 ,采用PCR -RFLP法HBV前C区 1896位G -A突变。结果 2 5例慢性无症状HBV感染者中除 3例 (12 % )无慢性肝炎的病理变化外 ,其余病例均有慢性肝炎的病理变化 ,其中 3例已出现明显的汇管区周围纤维化 ,纤维间隔形成 ;与 2 4例慢性乙型肝炎患者进行临床病理对照研究发现 ,慢性无症状HBV感染者的肝组织炎症活动度及纤维化分级均低于慢性肝炎病人 ,且随着病人临床表现的加重 ,病人肝组织的炎症活动度及纤维化分级也增加。HBV前C区 1896位G -A突变在慢性无症状HBV感染者和慢性乙型肝炎患者中均存在。 2 5例慢性无症状HBV感染者有 2例为HBV前C区突变株感染 ,突变发生率为 8%。 2 4例慢性乙型肝炎患者有 4例为HBV前C区1896位G -A突变株感染 ,突变发生率为 16 7%。两者无显著性差异。结论 慢性无症状HBV感染者中多数病人肝组织存在慢性肝炎的病理损害 ,为慢性肝炎病人。其炎症活动度及纤维化分级均低于慢性肝炎病人 ;HBV前C区1896位G

慢性HBV感染者HBV前C区/基本核心启动子区基因突变与临床应用

目的:探讨2010年10月至2013年6月来我院门诊及住院慢性HBV感染者中HBV前C(Pre C)区/基本核心启动子(BCP)区基因突变与其病程进展的相关性。方法:165例慢性HBV感染者血清生化指标检测,血清HBV DNA含量和HBe Ag定性检测,HBV Pre C区/BCP区突变率比较,分析Pre C区l896、BCP区1762/1764变异在HBV携带者(As C)、慢性乙型肝炎(CHB)和慢性乙型肝炎肝硬化(CHB-LC)患者中的分布。结果:血清生化指标在慢性HBV感染者病程发展中呈现相关性。与As C组比较:CHB组、CHB-LC组患者血清ALT、AST、AFP、TBA水平升高,差异有显著性意义(p<0.01),呈显著正相关,而TP、Alb、A/G水平降低,差异有显著性意义(p<0.05),呈负相关。HBe Ag(+)、HBe Ag(-)的标本中,BCP的突变率高于前C区突变率,差异有非常显著性意义。BCP区1762/1764双突变的突变率高于Pre C1896突变率。As C、CHB、CHB-LC 3组患者Pre C A1896、BCP区1762/1764变异率依次升高,与As C组比较,CHB组差异有显著性意义(P<0.05);CHB-LC组差异有非常显著性意义(P<0.01)。结论:对165例慢性HBV感染者观察,HBe Ag(+)/HBe Ag(-)患者及其病程不同发展阶段,Pre C/BCP出现相关联的突变率。特别需要注意的是HBe Ag(-)的慢性HBV感染者BCP区的突变率高于Pre C区的突变率,需要慎防HBV复制的危害性。HBV Pre C区/BCP区突变率可以预测到慢性HBV感染者病情的发展程度,对临床此类患者的研究具有重要意义。

慢性乙型肝炎HBV前C区基因突变的临床研究

采用聚合酶链反应 (PCR)及单链构象多态分析 (SSCP)银染技术检测了 32例HBVDNA阳性慢性乙型肝炎患者及乙肝病毒携带者的前C区基因变异。结果表明有前C区基因突变株感染者 8例 ,突变株感染者检出率为 2 5 .0 % ;突变株的检出率以慢性乙肝重度最高 ,其次是慢性乙肝中度、轻度患者 ,乙肝病毒携带者最低 ;抗 -HBe阳性患者前C区突变株检出率高于HBeAg阳性患者。提示HBV前C区突变与病情轻重及e系统血清标志有关。

海南汉族乙型肝炎病毒基因型与BCP区和前C区基因突变的关系

目的探讨海南汉族乙型肝炎病毒(HBV)基因型与前C区G1896A和BCP区A1762T/G1764A基因突变的关系。方法采用RT-PCR方法检测乙型肝炎患者的HBV基因型,PCR方法扩增包含C启动子和前C区基因核苷酸(nt1643-nt2112),对PCR产物进行DNA测序。结果基因型C的BCP区A1762T/G1764A突变率(58.82%)显著地高于基因型B(10.53%)(P<0.05)。基因型C G1896A突变率为29.41%,基因型B G1896A突变率为47.37%,两者比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论不同基因型HBV致病能力可能与病毒基因组BCP区A1762T/G1764A突变率的不同有关,而与前C区G1896A突变无关。

HBV前C区1896位突变的检测方法及其评价

为建立一种简便可行的检测ＨＢＶ前Ｃ区１８９６位Ｇ→Ａ突变的方法。采用本室自行构建的ＨＢＶ前Ｃ区１８９６位Ｇ→Ａ突变株和野生株克隆作为标准株，对错配引物ＰＣＲ（ｍｐ－ＰＣＲ）结合限制性片段长度多态性分析（ＲＦＬＰ），作为检测ＨＢＶ前Ｃ区１８９６位Ｇ→Ａ突变株的方法进行了评价。结果显示，该方法操作较为简便，特异性和重复性均较满意。

HBsAg和HBsAb双阳患者前C/C区基因突变分析

目的探讨乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎表面抗体(HBsAb)同时阳性(以下简称双阳)患者前C/C区基因突变的特点及其与S区基因突变的关系。方法选取18例双阳患者,对前C/C区及S区基因序列扩增并测序,分析测序结果。结果 18例双阳患者中,检出前C/C区氨基酸突变者7例;前C/C区发生突变与未发生突变者比较,其S区氨基酸的突变次数及突变率明显增加(P<0.05);7例前C/C区氨基酸突变患者中,4例为前C区nt1896突变,其中1例为HBeAg(-),3例为HBeAg(+)。结论双阳患者不仅S区氨基酸突变增多,其前C/C区氨基酸突变也明显增加;双阳患者前C区nt1896突变更常见于HBeAg阳性者,可能与双阳患者病毒株的复杂性有关。

慢性乙型肝炎HBV前C区基因突变研究(摘要)

目的:观察HBV前C区变异与患者病情轻重及血清e系统的关系,探讨改进的聚合酶链反应一单链构象多态性分析（PCR—SSCP）银染技术用于筛选HBV前C区突变的可行性和效果。方法:用酚—氯仿抽提法提取血清HBV DNA,根据adr亚型HBV基因核苷酸序列,选择Pre-C起始密码上游及C区保守序列设计引物P1、P2进行聚合酶链反应（PCR）,使全前C基因区段（876p）增幅。

乙肝病毒基因前C区突变与临床关系的研究

应用巢式ＰＣＲ结合碱性磷酸酶标记的ＡＳＯ探针杂交技术和ＤＮＡ测序技术对１２７例乙肝病毒（ＨＢＶ）感染后的血清标本进行了ＨＢＶ基因前Ｃ区突变的检测。结果发现：５３例为突变株感染，其中３２例为无症状携带者；１５例为慢性肝炎患者；肝硬化和肝癌患者各３例。在１２７例标本中发现４种新生突变：Ｉ１０Ｎ、Ｃ１２Ｗ、Ｃ１４Ｓ和Ｖ１７Ｆ，和４种不同数目核苷酸的插入片段。本研究认为ＨＢＶ基因前Ｃ区突变不一定导致病情加重。碱性磷酸酶标记的ＡＳＯ杂交技术安全可靠，特别适用于临床多样本的突变检测。