HBVx基因在肝癌细胞中的表达及其对肝癌细胞凋亡的影响

目的：研究乙型肝炎病毒 Ｘ 基因在肝癌细胞中的表达及其对肝癌细胞凋亡的影响。方法：用分子生物学的方法构建 Ｈ Ｂ Ｖｘ 基因真核表达载体ｐ Ｃ Ｄ Ｎ Ａ３１ Ｈ Ｂ Ｘ，用脂质体将真核表达载体ｐ Ｃ Ｄ Ｎ Ａ３１ Ｈ Ｂ Ｘ转染入肝癌细胞 Ｈ Ｃ Ｃ９２０４ ， Ｇ４１８ ５００ ｍｇ· Ｌ－ １ 筛选，获得稳定表达 Ｈ Ｂｘ 蛋白的细胞，阿霉素２０ μｍｏｌ· Ｌ－ １ 诱导细胞凋亡。电镜、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测凋亡细胞。结果：２０ μｍｏｌ· Ｌ－ １ 阿霉素可诱导肝癌细胞凋亡，稳定表达 Ｈ Ｂｘ 蛋白的肝癌细胞凋亡率比未进行基因转染的肝癌细胞凋亡率低。结论： Ｈ Ｂｘ 蛋白可抑制阿霉素诱导的肝癌细胞调亡。

原发性肝癌患者HBVX基因与内分泌激素相关性的初步研究

为了解原发性肝癌（HCC）患者的内分泌激素水平与HBVX基因间的相互关系，探讨HBV相关性HCC发生中内分泌激素的作用，用聚合酶链反应技术-限制片段长度多肽性分析法（PCR－RFLP）检测48例原发性肝癌患者血清HBVX基因，并与用放射免疫法（RIA）检测的血清睾酮（T）、雌二醇（E2）、生长激素（HGH）、泌乳素（PRL）、C肽水平进行相关分析。结果表明，HBVX基因阳性原发性肝癌患者血清HGH水平显著高于阴性组（t=3．38，P＜0．01）；T水平显著低于阴性组（t=2.24，P＜0．05）。HBVX基因阳性肝癌患者C肽水平与E2高度正相关（r=0．861，P＜0．01），与T正相关（r=0．380，P＜0．05）；血清HGH水平与E2正相关（r=0．471，P＜0．05）。结果提示：HGH、T、E2水平的改变与HBV相关性HCC发生有关；其中E2、胰岛素和HGH可能有协同作用。

肝硬变患者内分泌激素与HBVX基因相关性的初步探讨

研究表明,HBVX基因在HBV全基因中有三个直接重复顺宇和两个反转重复顺序共五对保守的重复顺序,表明Ⅹ基因在HBV基因中占有很重要的地位;HBVX基因已成为研究的热点。但是,在评价HBVX基因的生物学作用时,应综合考虑机体激素-内分泌网络的整体效应,本文将分析肝硬变患者血清睾酮(T)、雌二醇(E2)、生长激素(HGH)、泌乳素(PRL)及HBVX的相关性,初步探讨肝硬变形成中乙型肝炎病毒感染、内分泌激素的综合作用。

原发性肝癌患者HBVX基因与性激素及C肽水平的相关性实验探讨

乙型肝炎病毒(HBV)的Ⅹ基因与HCC高相关性已引起人们的重视,这主要与HBVX基因能编码具有反式激活作用的Ⅹ蛋白有关。已有研究表明,Ⅹ蛋白在HBV复制。

中国高发区肝细胞癌中HBVx基因的广泛存在及与p53基因249密码子高频率点突变的密切关联

目的乙肝病毒（ＨＢＶ）是肝细胞癌（ＨＣＣ）的主要病因。ＨＢＶ中的ｘ基因被认为是它的癌基因。为确定ｘ基因在肝癌癌变中的重要性，我们主要针对ＨＢｓＡｇ阴性的ＨＣＣ，研究ＨＢＶｘ基因的存在、表达和突变的情况；同时也对ｘ基因与ｐ５３基因２４９密码子热点突变的相关性进行了分析。方法应用ＰＣＲ、ＲＴ－ＰＣＲ、ＰＣＲ－ＲＦＬＰ和ＤＮＡ序列分析方法，重点针对１９９１年～１９９６年在启东和北京手术的、病理确诊为ＨＣＣ的２５个血清ＨＢｓＡｇ阴性病例进行研究。结果ＰＣＲ显示２５个血清ＨＢｓＡｇ阴性和１９个血清ＨＢｓＡｇ阳性的ＨＣＣＤＮＡ中无一例外地存在ＨＢＶｘ基因序列。随机抽取血清阴性标本中的８例，均检出ＨＢＶｘ基因在ＲＮＡ水平上的表达。序列分析ＨＢＶｘ基因显示６例中有４例的ｘ基因在１３０、１３１密码子存在错义点突变。应用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ，确定了启东５７％（１２／２１）的ＨＢ－ｓＡｇ阴性病例的ＨＣＣＤＮＡ中，ｐ５３的２４９密码子也发生了错义点突变，而北京的４例标本中未见上述突变。结论ＨＢＶｘ基因序列广泛存在于启东ＨＢｓＡｇ阳性及阴性的ＨＣＣ标本中，表明它在肝癌发生中必不可缺的地位。启东ＨＣＣ中ＨＢＶｘ基因都与ｐ５３基因热点突变关?

乙肝x基因在原发性肝癌中表达的临床研究

目的 通过对 HBx Ag在 HBs Ag阳性的原发性肝癌中的表达研究 ,进一步了解 HBVx基因在原发性肝癌发生发展与转归中的作用。方法 对 HBx Ag在原发性肝癌及其转移灶组织中的表达进行免疫组化检查 ,同时采用聚合酶链反应法 (PCR)和酶联免疫吸附法 (EL ISA )检测病人血中的 HBVDNA、HBe Ag,了解 HBx Ag在原发性肝癌组织中表达与肝癌分期及 AFP表达的关系 ;并将结果进行统计分析。结果 HBx Ag在肝癌单发灶组 ( 组 )病人阴、阳性表达分别为 8/ 2 8、2 0 / 2 8例 ;在肝癌伴肝内转移灶组 ( 组 )病人阴、阳性表达分别为 6 / 32、2 6 / 32例 ;肝癌病人外周血中的 HBVDNA在 组和 组阳性数分别为 5 / 2 8、7/ 32例 ,HBe Ag在 组和 组阳性数分别为 7/ 2 8、10 / 32例 ;HBx Ag的阳性表达数 ,在临床 、 、 期病人中分别为 1/ 5、19/ 2 2、2 6 / 32 ,在大小肿瘤中阳性表达数分别为 4 2 / 4 8、4 / 12 ,在 AFP阴阳性表达组中阳性表达数分别为 13/ 16、33/ 4 4。结论 乙肝 x基因与原发性肝癌及转移灶中癌的发生发展有一定的关系 ,与病人预后判断也有一定的关系 ,但其表达的高低不能作为肝癌转移倾向的预测指标。

HBV X基因对肝癌细胞生物学行为的影响

目的:构建可表达HBV X基因的重组腺病毒,观察HBV X基因对肝细胞生物学行为的影响。方法:构建可表达HBV X基因的重组腺病毒Ad-X及空病毒Ad0;重组腺病毒感染HepG2细胞,应用MTT、平板克隆形成试验、流式细胞术、TUNEL等方法观察HBV X基因对肝细胞生物学行为的影响。结果:与HepG2组和Ad0组相比,Ad-X组细胞生长速度较快,其克隆形成率高于对照组,流式细胞分析显示Ad-X感染可加快HepG2细胞G1→S期细胞周期进程;Ad-X组细胞凋亡指数低于HepG2组及Ad0组,Ad-X感染HepG2细胞后可诱导c-myc mRNA的表达。结论:Ad-X可促进HepG2细胞的增殖并抑制其凋亡。

HBV X基因突变促进肝癌发生的生物学机制

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)X基因(HBx)羧基末端四个突变位点C1653T、T1753C及A1762T/G1764A致癌的生物学机制。方法利用体外基因合成和定点突变构建野生型和复合突变型HBx重组质粒,转染至人肝癌细胞HepG2筛选稳定表达细胞株。通过绘制细胞生长曲线(CCK8法)、平板克隆形成实验、划痕实验、Transwell侵袭实验比较转染空载体(Vector)、野生型HBx(WT)和突变型HBx(Combo)细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果细胞生长曲线结果显示WT和Combo细胞的生长速率明显快于Vector(P<0.01),但WT和Combo之间差异无统计学意义(P>0.05)。平板克隆形成实验结果提示Combo细胞的克隆形成率显著高于WT(31.90%vs16.00%,P<0.01),而WT略高于Vector(12.46%,P<0.05)。划痕实验结果显示Combo细胞48h迁移距离显著高于WT细胞(P<0.01),而WT细胞显著高于Vector细胞(P<0.01)。Transwell侵袭实验结果显示Combo细胞穿过小室的细胞数最多([227.80±17.85)个],其次为WT细胞([181.75±10.06)个],Vector细胞最少([85.72±3.19)个],三者两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论野生型和突变型HBx均可显著增强HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭能力,且突变型HBx促进细胞恶性生物学行为的能力显著强于野生型HBx,这为明确HBV致癌机制提供了一定的依据。

HBV基因型对α干扰素的治疗反应的影响作用

据医学空间网6月21日报道（原载Gut2005：54：1009-1013），目前α干扰素（IFN）用于慢性B型肝炎的治疗效果十分有限。德国学者AErhardt做了一项关于HBV基因型对于IFN疗效好坏的作用的研究。他们为165名慢性复发性B型肝炎而接受IFN治疗的患者做了HBVX基因的直接测序。

乙型肝炎病毒A1762T/G1764A突变与原发性肝细胞癌的关系

目的:对原发性肝细胞癌(HCC)、慢性乙型病毒性肝炎(CHB)及肝硬化(LV)患者肝组织中乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)X基因基本核心启动子区(BCP)常见变异位点A1762T/G1764A进行检测分析,以探讨HBVX基因A1762T/G1764A变异与HCC发生发展的关系。方法:采用聚合酶链反应(PCR)方法检测67例患者(包括37例HCC,35例非HCC患者)肝组织中HBV X基因,并对PCR产物进行基因测序分析。结果:HCC组患者A1762T/G1764A突变率为85.7%(30/35),非HCC组患者(包括CHB及LV)A1762T/G1764A突变率为40.6%(13/32),HCC组双突变率明显高于非HCC组(P<0.001)。结论:HBVA1762T/G1764A突变在HCC发生发展中可能起重要作用。

C-端截短变异的HBx真核表达质粒的构建及表达

目的构建羧基端缺失30个氨基酸的HBx蛋白的真核表达质粒,并在真核细胞内稳定表达。方法提取HBV-DNA阳性血清总DNA,PCR扩增截短变异的HBx基因(HBx),克隆到真核质粒pEGFP-N3中,酶切及测序鉴定。利用脂质体将重组质粒转染HepG2细胞,通过W estern blot方法检测细胞内截短变异的HBx蛋白的表达。结果构建的重组质粒pEGFP-N3/x经酶切及测序鉴定结果正确。质粒pEGFP-N3/x转染细胞后可检测到目的蛋白。结论成功构建在真核细胞内稳定表达的重组质粒pEGFP-N3/x。

乙型肝炎病毒X区核苷酸序列检测方法的建立

目的 构建一个含有HBVX区核苷酸序列的检测方法 ,以探讨本地区HBVX区片段核苷酸序列的特点。方法 通过PCR法获取目的基因 ,PCR产物直接测序。结果 PCR产物电泳结果和PCR产物测序证实了该方法能检测X区核苷酸序列 ,且本地区HBVX区核苷酸、氨基酸有其独特的特点。结论 建立了HBVX区核苷酸序列检测方法 。

稳定表达乙型肝炎病毒X基因正常肝细胞株的建立

我们通过脂质体介导转染将乙型肝炎病毒X（HBVx）基因导入正常肝细胞系中，建立稳定表达乙型肝炎病毒X基因正常肝细胞株，为研究HBVx基因的生物学行为提供细胞模型。