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HBcAg基因在甲醇型酵母中的表达、产物纯化及其性质的初步研究
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作者 陈恒 黄亚红 +1 位作者 梁婉琪 张惟杰 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2003年第9期85-90,共6页
为研究乙肝核心抗原蛋白 (HBcAg)在甲醇型酵母 (PichiaPastoris)中的表达和性质 ,用PCR方法将HBcAg基因 (L)克隆到P .Pastoris胞内表达载体pPIC3k中 ,并利用电击和同源重组法 ,将重组质粒pPIC3k L转化感受态的甲醇型GS1 1 5酵母菌株。... 为研究乙肝核心抗原蛋白 (HBcAg)在甲醇型酵母 (PichiaPastoris)中的表达和性质 ,用PCR方法将HBcAg基因 (L)克隆到P .Pastoris胞内表达载体pPIC3k中 ,并利用电击和同源重组法 ,将重组质粒pPIC3k L转化感受态的甲醇型GS1 1 5酵母菌株。经过筛选得到阳性P .Pastoris重组子。重组菌株经甲醇诱导培养 ,表达产物的Western印迹结果表明 ,HBcAg蛋白能在甲醇型酵母(PichiaPastoris)中诱导表达 ,产物为一 2 1 5kDa的蛋白。经蔗糖密度梯度超离心和CsCl密度梯度超离心纯化后 ,ELISA和密度测定结果表明重组HBcAg蛋白主要分布在密度为 1 2 5 76g ml和1 30 1 3g ml的 2个峰值处。电镜观察表明 ,该重组HBcAg蛋白能自主装配成大小不同的 2种颗粒 (即核心颗粒 ) ,大颗粒直径约 34nm左右 ,小颗粒直径约 30nm左右。同时 ,我们还观察到 ,该核心蛋白颗粒在体外可发生集聚现象。 展开更多
关键词 乙肝病毒 hbcag基因 甲醇型酵母 表达 产物纯化 核心颗粒 抗原性
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THE COEXPRESSION OF THE preS1(1-42) AND THE CORE(1-144)ANTIGEN OF HBV IN E.coli 被引量:1
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作者 赵阳青 詹美云 《Chinese Medical Sciences Journal》 CAS CSCD 2002年第2期68-72,共5页
Objective.To study the therapeutic T cell vaccine for the treatment of chronic hepatitis B by improving the cellular immunization of HBsAg vaccine with the coexpression of the preS1(1-42)and the Core(1-144)anti-gen of... Objective.To study the therapeutic T cell vaccine for the treatment of chronic hepatitis B by improving the cellular immunization of HBsAg vaccine with the coexpression of the preS1(1-42)and the Core(1-144)anti-gen of HBV in E.coli.Methods.The genes of HBcAg (1-144)and preS1(1-42)were amplified and fused by PCR.This fused gene was inserted in the prokaryotic expression vector pET-11d and expre ssed in E.coli.Results.It was showed by SDS-PAGE that the pr otein molecular weight of the coexpr ession product was about 20kD,20%of all bacteria prote in.The monoclonal antibodies again st core and preS1antibody could re-act with this fused protein by Western-blot technique respectively.The fused gene was verified by sequencin g.Under the immune electron microscop y,this fused protein is typical particles of HBcAg but in an aggregated form.Conclusion.The results might aid for studying T c ell immunotherapeutic vaccine for c hronic hepatitis B. 展开更多
关键词 HBV preS1antigen hbcag coexpression of fused gene
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