两种HBsAg ELISA试剂检测关键性能指标回顾性比较分析

目的对血站常规使用的2种乙肝表面抗原(HBsAg)酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂关键性能指标进行回顾性分析,从试剂的实验室使用性能角度为试剂选择提供依据。方法对本中心2016~2019年使用的2种HBsAgELISA试剂的检测结果、初试反应率、复试反应率、复检符合率以及单试剂反应性与核酸检测(NAT)结果的符合性进行统计,比较试剂的检测性能。结果 HBsAg检测总不合格率为0.39%(1 863/480 741);2种试剂的检测不合格率(同复试反应率)分别为0.31%、0.29%,初试反应率分别为0.44%、0.39%,复检符合率分别为70.21%、74.55%;HBsAg单试剂和NAT共同反应性标本有43份。结论 2种试剂检测性能存在一定差异,实验室在选择试剂时要结合各关键性能指标及检测结果等综合考虑,既要避免血液浪费,更要保证血液安全。

献血者HBsAg ELISA检测屏蔽界限值研究

目的建立酶联免疫吸附法(ELISA)对献血者进行乙肝表面抗原(HBsAg)检测的高特异性S/CO屏蔽界限值。方法对783份HBsAg ELISA反应性标本和588份非反应标本,采用HBsAg化学发光法和中和实验确认检测。根据确认检测结果和ELISA检测S/CO值建立受试者工作特征曲线(ROC曲线),确定95%和99%特异度对应的S/CO界限值。另选择124份HBsAg ELISA反应性标本对设定的屏蔽界限值进行验证,同时以乙肝五项化学发光发检测结果作为补充,判断屏蔽界限值的实用性。比较不同实验室采用相同试剂设定的99%特异度对应的HBsAg ELISA检测S/CO界限值。结果该实验室采用的2种ELISA试剂95%特异度对应的S/CO界限值分别为0.24和0.65,99%特异度对应的S/CO界限值分别为3.89和3.62,将99%特异度对应的S/CO界限值设定为该实验室献血者屏蔽界限值。验证实验证实,大于或等于试剂1和试剂2屏蔽界限值的标本均为HBV感染标本。与该实验室采用相同HBsAg ELISA检测试剂的3家实验室,试剂1的99%特异度对应S/CO界限值分别为3.77、3.60、13.42,试剂2分别为27.73、31.75、1.17。结论该研究建立的献血者HBsAg ELISA检测屏蔽界限值可在该实验室有效甄别出真阳性献血者,有助于减少进入归队流程的献血者数量。即使采用相同的ELISA检测试剂,不同实验室也不适用统一的献血者屏蔽界限值。

HBsAg ELISA试剂的振动态孵育观察

目前,酶联免疫吸附实验(ELSIA)是采供血机构筛查血液应用最广的一种方法.在我国,随着ELISA试剂的更新换代和不断发展,其检测的灵敏度和特异性都有了一定程度的提高,但同发达国家相比,还有一定的差距.笔者在实际工作中发现振动态孵育可提高ELISA试剂的灵敏度、增加其稳定性、克服边缘效应等特性.笔者以HBsAg ELISA试剂为例,比较了其分别处于静止态孵育和振动态孵育(抗原-抗体结合)的实验结果.

HBsAg ELISA试剂对亚型检出能力的分析

目的考查HBsAg ELISA试剂对乙型肝炎病毒(HBV)亚型弱阳性标本的检出能力,减少血站HBsAg弱阳性标本的漏检,提高试剂对弱阳性标本检测结果的一致性。方法用国家参考品的HBV亚型定值血清对ELISA试剂进行考核。结果国产和进口试剂对HBV亚型最低检出量的检出能力均符合国家标准,进口试剂对HBV亚型最低检出量的检出能力强、灵敏度高。结论国产与进口HBsAg ELISA试剂的灵敏度存在差距。

HBsAg ELISA试剂动态质量评价

目的建立HBsAg ELISA试剂质量评价方法,控制试剂质量。方法采用国家参考品对HBsAg ELISA试剂进行考核。结果抽检的不同厂家或同一厂家不同批号的国产HBsAg ELISA试剂对弱阳性标本的检出能力存在差异;进口试剂对弱阳性标本的检出能力较稳定;进口试剂的批间差异小于国产试剂。结论建立在选择试剂前进行质量评估并实施进货前抽样检测、定期对试剂进行质量评价的制度是保证试剂检测结果的一致性的必要手段。

我国血液筛查实验室HBsAg ELISA检测系统性能评估与室间质评结果的关联分析

目的评价我国血液筛查实验室所使用的不同HBsAg ELISA检测系统性能。方法由卫生部临床检验中心（临检中心）于2015年组织13家采供血机构血液筛查实验室（a—m）使用7种HBsAg ELISA试剂（A—G）对1 473（人）份标本检测的结果（多中心评估）,与同期临检中心组织的全国第3次采供血机构血液检验室间质量评价计划中的HBsAg项目结果（室间质评）做横向比较和分析。结果 1）13家实验室的7种HBsAg ELISA试剂灵敏度为84.82%（486/573）—95.85%（554/578）,特异性为93.20%（617/662）—99.04%（828/836）,其中6种试剂的准确率〉93%,D试剂相对较差,仅为89.91%（617/693）。2）7种HBsAg ELISA试剂室间质量评价结果均为正确率〉99%,多中心评估中表现良好的A、C、E 3种试剂在室间质评中的正确率也为100%。3）13家实验室所有标本的准确度较好（AUC为0.929—0.997）;而真阳性标本的检出正确率参差不齐：m实验室准确性最低仅为78.53%（450/573）,j实验室自身错误率最低为0.52%（3/572）,E试剂错误率最低为2.60%—3.63%,B、F和G试剂的错误率相对较高,分别为11.11%—13.37%、12.06%—13.11%和13.44%—17.10%。4）c实验室在试剂评估和室间质评中均表现为检测存在假阴性风险,有待进一步提高。结论多中心评估及室间质评结果显示13家实验室HBsAg检测正确率〉87%,7种HBsAg ELISA试剂检测的准确率〉89%;但有1个实验室、3种试剂的检测性能存在一定的问题。

献血者HBsAg ELISA筛查单试剂假阳性的原因分析

目的:探究江苏地区献血者HBsAg ELISA筛查中单试剂假阳性产生原因,为献血者归队提供参考数据。方法:①血清学检测:对本中心2014-2017年期间319444例献血者血液样本进行HBs Ag ELISA双试剂检测,对其中呈单试剂阳性(S/CO≥0.5)样本进行ECLIA确认。②核酸检测:对所有单试剂阳性标本进行6/8人份混样/单样本拆分核酸实验。③试剂评价:以ECLIA或NAT结果为金标准绘制ROCC,评价不同阳性界值(COI)下本实验室HBsAg ELISA试剂A、B诊断性能。结果:319444名献血者标本经初筛共检出HBsAg单试剂阳性227例(0.71‰),经确认,其中HBsAg真阳性39例(17.2%),HBV DNA阳性12例(5.3%)。最大YI下,试剂A、B使用厂商推荐的1.0 COI时对于单阳标本的诊断能力均优于应用实验室的0.5 COI,且试剂A诊断能力优于试剂B(AUC:0.661 vs 0.632;Youden:0.329 vs 0.297),但兼顾灵敏度下两种试剂诊断特异度均有限(<60%)。最大YI下,试剂A/B的最佳临界值分别为2.4/1.4 COI,与厂商临界值相比,试剂A灵敏度下降33%,假阳性率降低60%;试剂B灵敏度提高140%,假阳性率上升36%。结论:ELISA试剂有限的诊断特异性及COI的设置,是导致HBsAg ELISA单试剂假阳性的主要原因,参考ROCC最大YI法,本实验室2种筛查试剂A和B的阳性临界值范围可设定为2.4 COI和0.5-1.4 COI以降低单试剂假阳性率。

血液保养液与肝素抗凝剂对HBsAg ELISA检测结果的影响

目的对无偿献血者血标本进行HBsAg检测时,分析血液保养液(CPD)与肝素抗凝剂对结果的影响。方法取4IU/mlHBsAg质控品,分别制备成不同的待检样本,即肝素抗凝剂组(对照组)和CPD保养液组(实验组);应用ELISA试剂盒检测两组样本HBsAg,将所得S/CO值进行配对t检验。结果对照组S/CO值为8.81,实验组S/CO值为7.60,差异有统计学意义(t=5.67,P<0.05)。结论采用ELISA法检测HBsAg时,含CPD保养液的样本比肝素抗凝剂样本结果的S/CO值低,应引起采供血机构的重视。

ELISA技术检测中草药抗HBsAg的实验研究

本文为作者使用ELISA技术对250种中草药水提物进行抗HBsAg的实验研究,共筛出有效药物10种(占总数的4.0%)。若按不同剂量(0.3、0.6、1.2、2.5、5.0mg/100μl)的药物、2种不同浓度(10.92、14.26P/N比值)的HBsAg与3种不同接触时间(立即、1h、2h)的10项P/N比值的均数来综合评价药效指数时,10种有效药物的次序为山渣叶(1.34)、辣蓼(1.37)、贯众(1.64)、橄榄(2.20)、苧麻根(2.49)、马齿苋(2.50)、苦荞头(2.69)、石吊兰(2.73)、赶山鞭(3.45)与木通(3.51)。

温育条件对ELISA定性测定HBsAg结果的影响

目的 确定定性酶联免疫吸附试验 (ELISA)测定中温育温度、时间和方式对测定结果的影响程度。方法 温育温度分别设为 3 7℃、43℃和室温 ,温育时间分别为 45分钟、60分钟、75分钟、90分钟和 2小时。其中室温温育又分别采用振荡和静置两种条件 ,温育时间分别为 45分钟、1小时、2小时和 4小时。检测阴性血清和 0 .2、0 .5、1、2、5ng/mlHBsAg系列定值血清 ,观察这些条件下标本测定S/CO比值的差异。结果 在同一温育温度下 ,所有血清的S/CO比值均随着测定温育时间的延长而增大 ,浓度越低表现越为明显 ,从 0 .2ng/ml到 5ng/ml的样本 ,温育 2小时的S/CO比值与温育 1小时相比 ,均有明显的增加 ,0 .2ng/ml的样本由按CUT OFF值判断为阴性而转为阳性。而同时阴性血清的S/CO比值则变化不大。在振动状态下反应较之静止状态下的反应 ,S/CO比值均有明显增加。结论 温育条件对ELISA测定结果有很大影响 ,尤其是弱阳性标本。

ELISA试剂检测HBsAg不合格标本的假阳性率调查

目的了解酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂检测乙型肝炎表面抗原（HBsAg）假阳性的情况。方法收集2015年4—9月来自全国16家采供血单位双试剂ELISA筛查HBsAg不合格标本888例,采用罗氏和雅培双试剂化学发光进行检测,2种化学发光试剂均为反应性判为阳性,均为非反应性判为阴性,两者结果不统一时采用中和试验进行确认;多家采供血单位采用多种ELISA试剂对这批标本进行检测,本研究对其中6家实验室,每1种试剂对应3家实验室,3种试剂（试剂1、2、3）的数据进行分析。结果 888例ELISA筛查HBsAg不合格标本中罗氏和雅培双试剂化学发光均为非反应性的标本为301例,占33.9%;3种ELISA试剂在相应被用于检测的3家实验室之间的假阳性率均无明显差异（P〉0.05）;同一实验室同时使用2种ELISA试剂有3家,其中2家实验室使用试剂1和试剂2的假阳性率有明显差异（P〈0.05）;每种ELISA试剂在3家实验室检测同一标本,可能是1家、2家或3家同时出现假阳性,计算每1种的频率,其中3种试剂3家实验室同时出现假阳性的频率无明显差异（P〉0.05）,1家或2家实验室出现假阳性的频率有明显差异（P〈0.05）;分析3种试剂所对应实验室检测结果同时为假阳性时的S/Co分布,其中位数及内四分位间距存在差异。结论不同ELISA试剂检测HBsAg不合格标本的假阳性率存在差异,其假阳性检测结果的S/Co值分布不同,此数据可为献血者归队策略提供参考。

ELISA法检测HBsAg影响结果的重要因素的分析

目的确定温育温度、时间和条件对定性酶联免疫吸附试验(ELISA)测定结果的影响,为临床检验提供最佳方案。方法温育温度分别设为37℃组和室温组。37℃组温育时间分别为45分钟、60分钟、75分钟、90分钟和120分钟。其中室温组温育中又分别采用振荡和静置两种条件,温育时间分别为45分钟、1小时、2小时和4小时。检测阴性血清和0.2、0.5、1、2、5 ng/ml HBsAg系列定值血清,观察这些条件下标本测定S/CO比值的差异。结果在同一温育温度下,所有被检血清的S/CO比值均随着测定温育时间的延长而增大,浓度越低表现越为明显,以0.2 ng/ml的样本,温育2小时的S/CO比值与温育1小时相比,均有明显的增加,0.2 ng/ml的样本由按CUT-OFF值判断为阴性而转为阳性。对照组阴性血清的S/CO比值在温育各时间则变化不大。室温组在振动状态下反应较之静止状态下的反应,S/CO比值均有明显增加。结论温育条件对ELISA测定结果有很大影响,尤其是弱阳性标本,由于温育条件不当会造成假阴性,增加传染机率。

HBsAgELISA定性检测S／CO值与TRFIA定量检测关系

目的探讨乙型肝炎病毒（HBV）感染者血清乙型肝炎病毒表面抗原（HBSAg）酶联免疫吸附试验（ELISA）定性检测s／CO值与时间分辨荧光免疫分析技术（TRFIA）定量检测的关系。方法分别采用ELISA定性和TRFIA定量测定325例HBV感染者血清HBsAg。结果325例患者HBsAgELISA定性检测S／CO值与TRFIA定量检测分别为22．37±6．66，151．00±94．14mg／ml，两者间具有显著相关性（r=0．139，P〈0．05）；不同批次、不同HBV标志物模式、不同DNA含量其相关性不尽相同。结论HBsAgELISA定性检测S／CO值与其TRFIA定量检测闷相关性良好。

抗HBsAg表位单克隆抗体的制备及HBV血清型夹心ELISA的建立

目的制备抗乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原(HBsAg)表位单克隆抗体(mAb),建立HBV血清型夹心ELISA检测方法。方法将HBsAg亚型蛋白分别免疫小鼠,通过细胞融合、高通量筛选ELISA(HTS-ELISA)筛选后得到杂交瘤细胞株并在无血清培养基中扩大培养。采用蛋白A对抗体进行纯化并测定抗体亲和力、亚型、特异性,最后建立双抗体夹心ELISA。结果HBsAg的亚型蛋白ad、adr及ayw分别免疫小鼠后,其血清效价达到1∶105。细胞融合及HTS-ELISA筛选后获得4株杂交瘤细胞株。经过纯化后得到的mAb分别命名为#2-4,#18-3,#7-7,#56-5,亲和力都在1×109L/mol以上。间接ELISA结果显示,#2-4,#18-3,#7-7,#56-5分别特异性地与HBsAg的"d,y,r,w"表位结合。用抗HBsAg"a"表位的mAb#3-11分别与这4株抗体组合,进行夹心ELISA检测。结果显示,不同的ELISA组合能特异性地检测HBsAg的"d,y,r,w"表位。结论成功制备了亲和力高、特异性好的抗HBsAg 4个表位的mAb,建立了检测HBV血清型的双抗体夹心ELISA。

探讨ELISA方法中HBsAg弱阳性标本复查方式及其意义

目的探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)方法中乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)弱阳性标本复查方式,确保结果的准确可靠。方法用ELISA法筛查出144例如下的标本:①S/CO值0.8～0.99,14例;②S/CO值在1.0～1.99,60例;③S/CO值在2.0～4.99,38例;④S/CO值在5.0～15,32例,以上标本均进行Elecsys HBsAg定量试验和HBsAg确证试验,对结果进一步确证。结果 144例标本中,三种方法都阳性的标本有62例,Elecsys HBsAg定量试验阳性62例,HBsAg确证试验阳性64例,ELISA与Elecsys HBsAg定量试验,ELISA与HBsAg确证试验比较,均有显著性差异(P<0.05),Elecsys HBsAg定量试验与HBsAg确证试验比较,结果没有显著性差异(P>0.05)。结论 ELISA试验做为临床乙肝的筛查方法容易出现假阳性,弱阳性标本可以用Elecsys HBsAg定量试验进行快速复查。

洗板机参数设定和测定时间不同对ELISA检测HbsAg的影响

[目的]探讨自动洗板机参数以及测定时间对酶联免疫(ELISA)夹心法测定乙肝表面抗原(HbsAg)结果的影响。[方法]用ELISA的夹心法检测乙肝表面抗原。[结果]不同冲洗次数、不同测定时间的结果统计差异有统计学意义(χ2﹥χ20.05,P﹤0.05)。而不同型酶标仪器之间差异无统计学意义(χ2﹤χ20.05,P﹥0.05)。[结论]在ELISA检测中,冲洗的次数和测定时间对结果是有影响,国产酶标仪与进口酶标仪结果基本一致。

血站HBsAg反应性样本的ELISA与PCR法检测结果的相关性

目的探讨无偿献血者ELISA法检测HBs Ag反应性样本与PCR检测HBV DNA结果的符合程度,为献血者提供更为准确的检测结果;并探讨新模式下,两种检测方法的结果报告及血源的召回制度。方法对无偿献血者ELISA法检测HBs Ag反应性样本,采用PCR检测,并进行结果比较。结果 122 657份献血者样本中,2种ELISA试剂共检测出反应性样本698例,其中2种ELISA试剂检测均为阳性样本382份,PCR检测为阳性者203份,占29.08%;阴性179份,占25.64%;ELISA单试剂检测阳性样本204份,PCR检测为阳性者8份,占1.15%;阴性196份,占28.08%;ELISA双试剂检测灰区样本5份,PCR检测为阳性者0份;阴性5份,占0.72%;ELISA单试剂检测灰区样本107份,PCR检测为阳性者5份,占0.72%;阴性102份,占14.61%。结论不同ELISA试剂在血液HBs Ag筛查中,表现出不同的灵敏度和特异性,双试剂阳性反应结果与HBV DNA结果符合程度高,灰区样本也存在一定的符合性,需随访观察其HBV DNA变化。

ELISA技术筛选200种中草药抗HBsAg的实验研究

使用ＥＬＩＳＡ技术对２００种中草药水提取物进行抗ＨＢｓＡｇ的实验研究，共筛出有效药物７种（占总数的３．５％）。若按５种不同剂量（０．３、０．６、１．２、２．５、５．０ｍｇ／１００μｌ）的药物、２种不同浓度的ＨＢｓＡｇ（１０．９２、１４．２６Ｐ／Ｎ值）与３种不同接触时间（立即、１ｈ、２ｈ）的１０项Ｐ／Ｎ值均数来综合评价药效指数时，７种有效药物的次序为青蒿（１．６７Ｐ／Ｎ值）、大蒜（２．１９Ｐ／Ｎ值）、红孩儿（２．３１Ｐ／Ｎ值）、仙鹤草（２．３１）、魔芋（２．３２Ｐ／Ｎ值）、冬瓜皮（２．６３Ｐ／Ｎ值）和猕猴桃（２．８９Ｐ／Ｎ值）。

ELISA法检测不同方法浓缩样本HBsAg结果的比较

为提高ELISA法对采样液中HBsAg的检出率 ,将采样液浓缩。结果 ,用聚丙烯酰胺凝胶法浓缩的采样液 ,HBsAg检出率达 8 33%～ 9 17% ,明显高于用离心沉淀法浓缩者 (5 83% )及浓缩前的采样液者 (2 98%～ 3 33% )。

ELISA法检测HBsAg出现假阳性的原因探讨

目的探讨采用ELISA法检测HBsAg出现假阳性的原因。方法采用ELISA法检测的不同年龄段人群乙肝表面抗原阳性率,并与采用胶体金标法检测作比较。结果采用ELISA法检测的乙肝表面抗原阳性率敏感性为92.3%(48/52),明显高于采用胶体金标法检测的乙肝表面抗原阳性率,敏感性为72.7%(48/66),特异性为96.0%(430/448),略低于采用胶体金标法检测的特异性99.1%(430/434)。采用ELISA法检测的乙肝表面抗原的假阳性率为4.02%(18/448),假阴性率为7.69%(4/52),χ2=8.34,P<0.05。结论 ELISA法检测乙肝HBsAg灵敏度高、特异性强,易造成假阳性。