用于无偿献血初筛的最佳HBsAg/TP联合检测金标试纸条的筛选及意义

目的筛选最佳的乙肝表面抗原(HBs Ag)和梅毒螺旋体(TP)金标试纸条对无偿献血者HBs Ag和TP进行初筛,预算如果使用HBs Ag/TP联合金标试纸条作为街头初筛检测项目可能有效降低血液资源浪费和血液成本。方法用三种金标试纸条(双试剂HBs Ag/TP联合检测试纸条、单试剂HBs Ag检测金标试纸条和TP检测金标试纸条)分别检测临床科研血清盘,从中选择最佳金标试纸条,对330例HBV和140例TP酶联免疫法阳性样本检测,通过检测的阳性率,预算可有效节约成本的百分率。结果通过比对验证和分析灵敏度验证选择HBs Ag/TP联合检测金标试纸条为最佳试纸条,对330例HBs Ag酶联免疫法阳性样本检测的阳性率为3.03%~8.2%,对140例TP酶联免疫法阳性样本检测的阳性率为58.6%~68.6%,预算出可有效节约成本0.29%~0.36%。结论 HBs Ag/TP联合检测金标试纸条同时可得到HBs Ag和抗TP 2个结果,操作简便,耗时短,且特异度100%、灵敏度尚可,可避免无效采集带来的血液资源和成本浪费,适合于血站街头初筛检测。

HBsAg/TP联检试纸条用于采血前初筛的效果评价

目的对本血站无偿献血者采血前进行HBsAg／TP胶体金联检试纸条初筛，评价HBsAg／TP联检试纸条用于采血前初筛的效果。方法2012年4～8月无偿献血者采血前进行Hb、ALT和HBsAg胶体金试纸条初筛，合格后采集血液；2013年4～8月无偿献血者采血前进行Hb、ALT和HBsAg／TP胶体金联检试纸条初筛，合格后采集血液。对2年同期抗-TP、HBsAg不合格率进行统计分析。结果2012年4—8月无偿献血者抗-TP不合格率为0．20％，HBsAg不合格率为0．25％；2013年4～8月使用HBsAg／TP胶体金联检试纸条初筛后无偿献血者抗-TP不合格率为0．04％，HBsAg不合格率为0．20％。结论HBsAg／TP胶体金联检试纸条在检测HBsAg和抗-TP方面均优于单检试纸条，降低了血液因抗-TP、HBsAg有反应性造成的报废率。

检测牙龈卟啉单胞菌胶体金试纸条的制备与应用

目的制备简单、快速检测唾液P.gingivalis的胶体金试纸条。方法采用识别P.gingivalis不同表位的单抗E10、G3建立双抗夹心ELISA体系,鉴定双抗夹心ELISA识别P.gingivalis的特异性及敏感性。利用单抗E10、G3制备胶体金试纸条,检测胶体金试纸条识别P.gingivalis的特异性。应用胶体金试纸条与实时定量PCR检测受试者唾液P.gingivalis并比较二者检测P.gingivalis的差异。结果单抗E10、G3建立双抗夹心ELISA体系可特异性识别P.gingivalis,识别敏感性≥5×10^(7)CFU/mL。单抗E10和G3制备的胶体金试纸条特异性识别P.gingivalis。胶体金试纸条与实时定量PCR分别检测受试者唾液P.gingivalis,试纸条与PCR检测对牙周炎的检出效果无统计学差异,检测P.gingivalis的细菌数量无统计学差异。胶体金试纸条检测唾液P.gingivalis,牙周炎组、牙周健康组阳性率分别为40%、10%。结论制备出检测P.gingivalis的胶体金试纸条,可特异性检测P.gingivalis,具有检测唾液中P.gingivalis的潜力。

有机磷农药胶体金免疫层析竞争法快速检测方法的建立

目的建立检测蔬果及饮用水等样本中的氧乐果、辛硫磷、敌百虫、对硫磷等有机磷成分的胶体金免疫层析检测方法并研制检测试纸条。方法N-羟基琥珀酰亚法合成有机磷人工抗原;制备乙酰胆碱酯酶抗原及纯化及其抗血清制备、纯化与标记;优化试纸条工作参数,并进行性能测试。结果抗血清效价在1∶32~1∶64之间,蛋白含量约为2 mg/mL。纯化后的多克隆抗体在相对分子质量(M r)25000和55000处出现目的条带,纯度较好;试纸条反应时间在5~10 min,样本检测限为200 ng/mL,特异性及准确性良好,试纸条有效期为6个月。结论建立了简便快速检测多种有机磷成分的胶体金免疫层析检测方法,适合大量样本的现场初筛。

牛传染性鼻气管炎病毒胶体金检测试纸条的研制和评价

为建立快速检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的病原学检测方法,本试验采用杂交瘤细胞融合技术制备IBRV单克隆抗体,以其作为检测原,优化反应条件并组装IBRV胶体金检测试纸条,验证该试纸条的特异性、灵敏性、敏感性和稳定性,并与实时荧光定量PCR(qPCR)进行比较分析。结果显示,共制备7株针对IBRV的单克隆抗体,其中以胶体金标记的单克隆抗体2B7作为捕获抗体、1B9作为检测抗体,建立的胶体金检测试纸条能够检测样品中的IBRV;该试纸条与病毒性腹泻/黏膜病毒、牛冠状病毒和大肠杆菌无交叉反应,检测限为4.04×10~4TCID50/0.1 mL,敏感性为86.7%;在室温条件下保存12个月仍能够有效检测IBRV,说明该试纸条稳定性良好。与qPCR比较结果显示,2种方法检测结果的符合率为92.85%,说明该胶体金检测试纸条能够用于IBRV的临床诊断。结果表明,本试验利用IBRV的单克隆抗体建立的胶体金检测试纸条灵敏度高且特异性好,为IBRV抗原检测和流行病学调查提供技术支持。

碳青霉烯类和喹诺酮类双重耐药核酸胶体金试纸条快速检测方法的建立及试剂盒研制

目的:建立双重核酸胶体金试纸条快速检测鲍曼不动杆菌(Ab)OXA和par C耐药基因的方法并研制试剂盒。方法:采用加热煮沸法提取Ab的DNA,根据NCBI选择Ab的OXA和par C基因序列作为靶基因片段,设计引物并分别用6-FAM、地高辛和生物素进行标记,研发耐药基因检测试剂,采用双重核酸胶体金试纸条实现快速、可视化检测。采用分子克隆、测序技术克隆阳性对照品评价试剂盒的特异性、灵敏度和稳定性。结果:水煮法提取的Ab DNA浓度和纯度较好。克隆测序后的质粒DNA与GenBank数据库中基因序列的同源性均为100%;试剂盒的特异性良好,仅Ab出现阳性,其他菌属等均为阴性;双重核酸胶体金试纸条中Ab的DNA浓度降到10-3ng/μl时仍出现红色线,与电泳的最低检测限10-2ng/μl相比,灵敏度高出10倍;试剂盒分别在第3、6和9个月进行检测,稳定性较好。结论:本研究建立的Ab双重耐药检测试剂盒可同时检测Ab的OXA和par C耐药基因,具有高灵敏度、强特异性、快速简便等优点,为临床Ab碳青霉烯类和喹诺酮类抗生素耐药检测提供了一种新型快速的检测方法。

猪轮状病毒胶体金检测试纸条的研制及应用

【目的】利用2株猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)单克隆抗体,研制胶体金检测试纸条,用于PoRV的临床快速检测。【方法】制备40 nm粒径的胶体金溶液标记单克隆抗体4G5,将单克隆抗体5G4和羊抗鼠IgG分别包被在硝酸纤维素膜上,作为检测线和质控线。通过优化胶体金溶液最适pH、标记抗体和检测抗体的最佳使用量,制备PoRV胶体金检测试纸条;对试纸条的灵敏度、敏感性、特异性、重复性和稳定性进行评价。通过检测50份猪粪便样品,计算试纸条与RT-PCR方法的符合率,最后采用试纸条进行1249份临床样品的测定。【结果】经优化后试纸条的最佳参数如下:胶体金溶液最佳pH为8.0,标记抗体4G5和检测抗体5G4最佳使用量分别为14.4μg/mL和1 mg/mL。试纸条能检测出1∶2000稀释的PoRV OSU株(G5型)病毒液,灵敏度为104.5TCID50/mL,且检测PoRV G9、G3和G4型毒株均为阳性。检测猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)、猪伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)和猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)均为阴性。批内和批间重复性、稳定性良好。检测50份猪粪便样品,与RT-PCR方法的阳性符合率为97.5%(39/40),阴性符合率为100%(10/10),总体符合率为98%(49/50)。检测2022年在河南、山西省猪场收集的临床样品1249份,阳性检出率为5.2%。【结论】本研究制备的PoRV胶体金检测试纸条具有良好的敏感性、特异性和重复性等优点,与RT-PCR方法的符合率较高,可用于规模化猪场PoRV的快速检测。

恙虫病东方体混合重组抗原应用于胶体金免疫层析试纸条的制备及效价检测

胶体金免疫层析试纸条具有携带方便、操作简单且敏感性、特异性高等特点,近年来开始广泛应用于疾病的诊断。为了实现对恙虫病的快速检测,笔者利用双抗原夹心法,以胶体金标记恙虫病东方体56 kDa混合重组蛋白,56 kDa混合重组蛋白和兔抗恙虫病东方体多克隆抗体分别喷在检测线及质控线上,制备了用于检测恙虫病东方体抗体的胶体金免疫层析试纸条。本研究制备的胶体金试纸条检测限为61 ng/mL,和疟疾、伤寒、血吸虫、出血热以及斑点热等阳性血清无交叉反应,特异性达90%(54/60),检测的敏感性为91.96%(103/112),在4℃下可稳定保存6个月。本试纸条能够应用于人体血清中恙虫病东方体总抗体的检测。

神奇的农残检测试纸条——用于有机磷农药残留检测的核酸适配体侧流层析试纸条

有机磷农药是农业生产中使用最广泛的农药之一,其大量使用造成了农作物表面、水体和土壤等环境中的农药残留,严重破坏生态环境,威胁人体健康。因此,快速、准确地检测环境中的有机磷农药残留对于控制农药使用和污染具有重要意义。传统色谱、光谱检测方法依赖于大型仪器和专业的技术人员,存在检测成本高、耗时长等缺点。因此,本文创新性地制备了一种基于核酸适配体的胶体金侧流层析试纸条,用于果蔬中有机磷农药残留的快速和准确检测。由于该试纸条具有灵敏、便携、易于操作的优点,能现场应用在实际的蔬菜样品检测中,具有很好的科普性和可推广性。另外,本科普实验操作过程逻辑清晰、内容详实,并且针对不同类别的人群,设计多样化的实验过程和实验方案,能够很好地激发大家对化学的兴趣和提升对食品安全的意识。

黄曲霉毒素B_(1)胶体金免疫层析试纸条的制备及性能研究

以黄曲霉毒素B_(1)为研究对象,制作出一种可实现对黄曲霉毒素B_(1)含量快速检测的胶体金试纸条。实验采用竞争抑制法,基于试纸条的层析作用,以胶体金为标记物与黄曲霉毒素B_(1)单抗偶联,将黄曲霉毒素B_(1)抗原和羊抗鼠二抗固定到硝酸纤维膜上作为检测线和质控线,制备出可以快速检测黄曲霉毒素B_(1)的免疫层析试纸条。通过优化,试纸条在37℃条件下,分别在5,10,15,20 d后测试,效果没有明显降低,检测灵敏度为20 ng/mL;与磺胺类药物、“瘦肉精”类药物均无交叉反应。该试纸条具有良好的稳定性和特异性,可实现生物样本中黄曲霉毒素B_(1)的快速大量检测。

检测鸡血清多杀性巴氏杆菌抗体的胶体金试纸条的研制与应用

为建立快速检测鸡血清多杀性巴氏杆菌(Pm)抗体的胶体金免疫层析技术,本研究采用胶体金标记兔抗鸡IgG,制备金标垫,将重组脂蛋白B(rPlpB)和羊抗兔IgG抗体分别包被于硝酸纤维膜作为检测线和质控线,优化条件后组装成胶体金试纸条(CGTS)。结果显示,胶体金标记兔抗鸡IgG的最佳pH为8.5,最佳标记浓度为7μg/mL;rPlpB和羊抗兔IgG抗体的最佳使用浓度均为0.2 mg/mL。利用该方法检测SPF鸡血清,鸡Pm、鸡大肠杆菌、鸡沙门菌、鸡新城疫病毒和鸡传染性支气管炎病毒阳性血清,结果显示仅鸡Pm阳性血清检测为阳性,其他均为阴性,表明CGTS的特异性强。将琼脂扩散(AGP)效价为1∶16的鸡Pm阳性血清2倍倍比稀释后以CGTS检测,结果显示1∶320倍稀释仍检测为阳性,表明CGTS的敏感性较高。检测鸡Pm阳性血清和SPF鸡血清时,同批次不同试纸条之间、不同批次之间均无差异,表明该方法的重复性好。对89份鸡血清采用CGTS和间接ELISA检测,结果显示,二者阳性符合率为91.5%,阴性符合率为100%,总符合率为94.4%。禽霍乱灭活疫苗免疫后14 d,66.7%的鸡采用该方法能够检出抗体阳性,免疫后21 d,所有鸡均检出抗体阳性。本研究首次基于rPlpB建立了检测鸡血清Pm抗体的CGTS方法,该方法操作简单、特异性强、敏感性高、重复性好,适合在基层推广,为评价禽霍乱疫苗的免疫效果提供了可行技术。

鸭多杀性巴氏杆菌抗体检测胶体金试纸条的研制及应用

为建立快速检测鸭血清多杀性巴氏杆菌抗体的方法,将兔抗鸭IgG标记胶体金,喷涂金标垫,用浓度为0.2 mg/mL的荚膜和0.2 mg/mL羊抗兔IgG抗体分别作为检测线和质控线,制备了检测鸭多杀性巴氏杆菌抗体的胶体金试纸条(D-CGTS)。特异性试验显示,仅鸭抗多杀性巴氏杆菌血清检测为阳性,阴性血清、鸭抗大肠埃希氏菌、鸭抗鸭疫里默氏菌、鸭抗沙门氏菌和鸭抗金黄色葡萄球菌血清的检测结果均为阴性,表明D-CGTS的特异性良好。敏感性试验结果显示,对效价1∶16(琼脂扩散试验)的鸭抗多杀性巴氏杆菌血清1∶320倍稀释后采用制备的试纸条检测结果仍为阳性,表明D-CGTS的敏感性较高。重复性试验结果显示,同批次的不同试纸条和不同批次的试纸条,检测阴性血清和鸭抗多杀性巴氏杆菌血清的结果相同,表明D-CGTS的重复性好。对92份鸭血清采用D-CGTS和ELISA进行检测,结果显示,阳性符合率为94.03%,阴性符合率为100%,总符合率为95.65%。结果表明,制备的D-CGTS操作简单,具有较强的特异性、较高的敏感性和较好的重复性,适合在兽医临床推广应用。

金标测试条与EIA检测HBsAg结果比较

目的观察金标测试条检测ＨＢｓＡｇ的效果。方法应用金标测试条和ＥＩＡ同时检测４０８份健康体检血清。结果金标测试条和ＥＩＡ检测血样中ＨＢｓＡｇ的符合率为９９．２６％，金标测试条的特异性和敏感性分别为９９．５０％和９９．０３％。另外检测甲型肝炎血清，没有发现交叉阳性。结论金标测试条快速简便，适用于各级医疗单位，特别是紧急情况及单个样品的使用。

qPCR和胶体金试纸条方法检测猫疱疹病毒感染的比较

本研究比较猫疱疹病毒(FHV-1)2种检测方法荧光探针qPCR和胶体金试纸在检测FHV-1时各自的优劣,并以PCR扩增FHV-1特异基因Glycoprotein B序列并测序的方法作为参比方法。采集107份疑似FHV-1感染样本,分别用3种方法进行检测,qPCR方法采用的是冻干型PCR-荧光探针法,胶体金试纸方法采用的是市场成熟产品,参比方法测序结果与GeneBank数据进行比对,确认样本是否为FHV-1。qPCR检出89例FHV-1阳性,18例FHV-1阴性,胶体金试纸条检出51例FHV-1阳性,56例FHV-1阴性,参比方法检出89例阳性,且基因序列比对确认为FHV-1。通过对比实验结果的分析,qPCR方法灵敏度为100%,胶体金试纸条方法灵敏度为57.3%,qPCR检测灵敏度明显优于胶体金试纸。

牛病毒性腹泻病毒抗原胶体金快速检测试纸条的研制

为建立一种快速准确且便携的检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的方法,本研究将制备的BVDV单克隆抗体(MAb)作为检测线(T线),以纯化的免源多克隆抗体作为金标蛋白,以羊抗兔IgG-HRP作为质控线(C线),组装成双抗体夹心胶体金层析试纸条,并优化各反应条件。结果显示,最适金标蛋白标记量为30μg/mL,BVDV MAb和羊抗兔IgG-HRP最佳浓度均为0.5 mg/mL。利用猪瘟病毒(CSFV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛丘疹性口炎病毒(BPSV)及BVDV临床分离株评估该试纸条的特异性,结果显示,除阳性对照和BVDV临床分离株检测为阳性外,其余病毒均为阴性,表明该试纸条的特异性较强,无交叉反应。将BVDV-NADL株(10^(6.6)ELD_(50)/mL)10倍倍比稀释后,利用该试纸条检测,结果显示其最低检出量为10^(4.6)ELD_(50)/mL。利用同一批次和不同批次制备的试纸条对CSFV、IBRV、BPSV、BVDV临床分离株检测,结果显示检测结果均一致,表明该试纸条的重复性良好。将制备的试纸条应用于检测临床采集的68份牛血清样品,并以RT-PCR方法同时检测,结果显示胶体金试纸条对BVDV的阳性检出率为17.5%(12/68),RT-PCR对BVDV的阳性检出率为26.5%(18/68),两者之间的总符合率为88.24%。本研究于国内首次采用双抗体夹心方式制备了检测BVDV的胶体金免疫层析试纸条,该方法方便快捷,特异性及敏感性均较好,适宜于牛场BVDV的快速筛选,为进一步研制BVDV胶体金检测试剂盒提供了实验依据。

牛赤羽病胶体金抗体检测试纸条的研制

研究旨在制备一种现场快速筛查牛赤羽病的免疫层析试纸条。通过胶体金标记赤羽病病毒N蛋白,将兔抗牛IgG和兔抗N蛋白多克隆抗体分别喷涂于NC膜上作为检测线(T)和质控线(C)。结果显示,牛赤羽病毒阳性抗体血清稀释度为1∶512时,检测线仍显色;且与牛病毒性腹泻病毒、牛结核病、布鲁氏菌病、牛巴氏杆菌病、地方流行性牛白血病毒和蓝舌病毒的阳性血清均无交叉反应;使用试纸条和商品化ELISA试剂盒同时检测40份田间牛血清样品的结果符合率为92.6%。研究表明,试纸条适用于基层养殖户对牛赤羽病的筛查。

呼吸道真菌感染核酸胶体金试纸条快速检测方法的建立和评价

目的:采用聚合酶链式反应(PCR)技术和胶体金技术建立一种呼吸道真菌感染核酸胶体金试纸条检测方法,并对其检测效果进行评价。方法:根据GenBank数据库选择真菌内转录间隔区(ITS)基因片段作为靶基因,应用DNAMAN软件对真菌ITS基因片段进行分析,并分别在真菌通用引物5'端用生物素(Biotin)和异硫氰酸荧光素(FITC)进行修饰标记;建立PCR体系,进行体系的最佳条件优化;确定胶体金免疫层析试纸条标记链霉亲和素的最佳标记量和质控线及检测线最佳包被物浓度,组装核酸胶体金试纸条,对试纸条的特异度、灵敏度、重复性和稳定性进行验证。结果:水煮法提取白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌DNA,浓度为180μg·L^(-1)以上,纯度为1.60~2.10;在pH 7.0条件下,每100μL胶体金溶液中制备胶体金标记链霉亲和素最佳标记量为3.3μg,质控线包被Biotin化牛血清白蛋白(BSA-Biotin)浓度为2.00 g·L^(-1),检测线包被抗FITC抗体浓度为1.00 g·L^(-1)。核酸试纸条的特异度与电泳结果一致,仅白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌出现阳性结果,与金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、乙型溶血性链球菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌和大肠埃希菌等常见呼吸道感染细菌无交叉反应。灵敏度检测,白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌的DNA浓度分别为10-4、10-2和10-3 mg·L^(-1)时核酸试纸条仍可准确检出,而普通PCR电泳结果显示白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌最低检测浓度分别为0.01、1.00和0.10 mg·L^(-1);重复性检测,在不同实验室不同操作人员对核酸试纸条进行验证,结果一致,重复性良好;稳定性检测,核酸试纸条在第6、9和12个月进行检测,结果符合预期,稳定性良好。结论:本研究建立的呼吸道真菌感染核酸胶体金试纸条可以检测白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌等真菌,特异度和灵敏度均较高,操作简便且快速。

基于胶体金侧向层析原理的大米中痕量镉现场快速检测方法

目的:建立一种可实现对大米中镉元素现场快速检测的胶体金试纸条检测方法。方法:基于侧向免疫层析技术,对胶体金试纸条一系列影响检测性能的参数进行系统优化。结果:所制备的胶体金试纸条对大米中镉元素的检测达到了可视化检测限为10 ng/g的水平。在实际应用中,此方法样品前处理过程操作简单,低浓度酸直接提取并稀释后即可用于试纸条检测。结论:胶体金试纸条快速检测方法适用于大米镉的现场快速筛检。

胶体金免疫层析试纸定量检测猪肉中沙丁胺醇的研究

通过便携式免疫层析读条仪,建立猪肉中沙丁胺醇的胶体金免疫层析试纸定量检测方法.沙丁胺醇试纸的定量检测限为5 ng/mL,定量检测范围为5~250 ng/mL,试纸与两种β_(2)-受体激动剂无交叉,添加回收试验的平均回收率为105.76%,对三个不同超市的猪肉样品进行了检测.该法方法灵敏度高、特异性好、精密度和准确性高,而且方便快捷.

大肠杆菌O157:H7胶体金免疫层析快速检测试纸条的研制

本文采用柠檬酸三钠还原法制备的胶体金溶液标记大肠杆菌O157:H7抗体(6C1E5),然后将其包被于金标垫上,再将大肠杆菌O157:H7抗体(10G1A2)和兔抗鼠IgG分别包被于硝酸纤维素膜作为检测线和质控线,研制出的大肠杆菌O157:H7胶体金免疫层析快速检测试纸检测灵敏度达104 CFU/mL,并与鼠寒沙门氏菌、蜡样芽孢杆菌等8种菌株无交叉反应,显示出较强的特异性。