血站HBsAg酶联免疫检测的HOOK效应及对策分析

目的观察分析血站HBsAg酶联免疫检测的HOOK效应及对策,总结其临床意义。方法选取我站2011年1—5月3414例自愿献血者(包括初筛HBsAg阳性),分别根据HOOK效应将血液标本分出HBsAg阳性的高值标本23例,低值标本45例,再分别采取ELISA双抗体夹心一步法和ELISA双抗体夹心二步法检测,观察比较其检测结果。结果检测20次后,两种方法检测的OD平均值、SD值比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在进行HBsAg试剂盒时,应选择ELISA双抗体夹心二步法进行检测,对避免发生漏检、保障献血有效性具有重要的临床意义。

HBsAg和抗-HCV酶联免疫检测与血液病毒核酸筛查技术之间的相关性分析

目的探讨HBsAg和抗-HCV酶联免疫检测方法与血液病毒核酸筛查技术之间的相关性。方法对我院血液科2011年12月到2013年12月血样标本12 300个,首先进行HBsAg和抗-HCV ELISA检测,再利用中和试验和重组免疫印迹试验(RIBA)进行确认检测,并对确认检测阳性和阴性样本行血液病毒核酸筛查,分析ELISA检测与血液病毒核酸筛查之间的相关性。结果经过HBsAg ELISA国产试剂和进口试剂检测血样标本12 300个,221个为阳性,占1.80%,国产和进口试剂检测一致率为99.72%,经过配对卡方检验,两种试剂间差异无统计学意义(P>0.05);抗-HCV ELISA检测阳性112个,占0.91%,国产和进口试剂检测一致率为99.60%,两种试剂间差异无统计学意义(P>0.05);HBsAg经过再次确认检测其中阳性201个,阴性20个,再次确认检测与国产和进口试剂检测一致率为90.95%;抗-HCV再次确认检测其中阳性55个、阴性43个、可疑14个,再次确认检测与国产和进口试剂检测一致率为61.61%;经过核酸检测技术(NAT)检测HBV DNA阳性和阴性分别为203个、18个,HCV RNA阳性和阴性分别为70个、42个。将两种因素合并计算,ELISA检测联合再次确认检测灵敏度为97.44%、特异度93.33%。结论 HBsAg和抗-HCV ELISA检测具有较高的灵敏度和特异度,但是由于使用ELISA试剂盒不同,常存在误检,而血液病毒核酸筛查技术可以减少这种误检,再次提高检出率。

血站HBsAg酶联免疫检测的HOOK效应与对策

以往血站对献血者血液样本中乙肝病毒的检测多采用酶联免疫吸附法,该方法的灵敏性、特异性都比较高,再加上单克隆抗体技术、自动化设备的支持,检测过程快捷、安全,获得了采血机构的青睐。检测乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的主要方法为酶联免疫双抗体夹心法,依据实验步骤又可分为双抗体夹心一步法、双抗体夹心二步法。

酶联免疫检测与核酸检测对输血相关传染性疾病的效果研究

探讨酶联免疫检测与核酸检测对输血相关传染性疾病的效果研究。方法 选取2022年5月-2023年5月我院500份无偿献血样本作为研究对象,所有样本均进行酶联免疫检测以及联合核酸检测,对检验结果进行分析。结果 500份血液样本中,经酶联免疫检测出98份阳性,核酸检测出128份阳性,其中核酸检测出含有乙肝表面抗原(HBsAg)108份,含有丙型肝炎病毒( HCV)样本15份,含有人类免疫缺陷病毒( HIV) 样本5份,与酶联免疫检测差异有统计学意义(P<0.05);联合检测出阳性145份,高于两种单独检测的阳性率(P<0.05)。结论 在输血传播疾病的筛查中使用核酸检测具有较高的检测价值,提高对血液传播性疾病的筛查,联合酶联免疫检测具有更高的阳性检测率。

血站酶联免疫检测技术与核酸检测技术在乙肝病毒筛查中的应用比较

探讨血站酶联免疫吸附检测技术与核酸检测技术在乙肝病毒筛查中的应用效果差异。方法 本研究选取的研究中心为呼伦贝尔中心血站,选取的对象为在血站进行乙肝病毒筛查的献血者100例,收集的周期为一年即2022年6月份至2023年的6月份。所有献血者收集基本信息后进行血液采集,分别采取酶联免疫吸附法和核酸检测法进行乙肝病毒的筛查,所有献血者筛查结束后进行结果统计分析,本研究采用SPSS23.0数据分析软件对结果进行统计,统计的指标包括不同检测技术在乙肝病毒筛查中的诊断效能,灵敏度、特异度,并分析不同检测技术筛查窗口期、漏诊率等。结果 在100例献血者中,采用酶联免疫吸附法检测的乙肝病毒表面抗原阳性有2份血液样本,而采用核酸技术检测的乙肝病毒表面抗原阳性有6份血液样本,两种检测方法的阳性诊断率分别为2.0%和6.0%;追踪1个月后,采用酶联免疫吸附法检测的诊断灵敏度为68.37%、特异度为75.61%,而核酸检测技术在乙肝病毒中的诊断灵敏度为87.56%、特异度为90.38%;两种检测技术在检测抗原中的窗口期分别为29.67±1.05d和24.52±1.01d,而在检测乙肝病毒中的漏诊率则分别为3.0%和1.0%;与酶联免疫吸附检测技术比较,核酸检测技术在乙肝病毒表面抗原中的阳性诊断率明显更高(P<0.05),诊断灵敏度、特异度明显更短,窗口期和漏诊率均明显更低(P<0.05)。结论 两组目标检测方法在目标病毒中的应用效果存在明显差异,且核酸检测法效果更佳,在目标病毒检测及感染预防中的应用更具有临床推广的价值。

HBsAg和抗-HCV两次酶联免疫检测方法与血液病毒核酸筛查技术的关联

目的采用酶联免疫方法对抗-HCV、HBa Ag进行检测,以此探讨与分析两次酶联免疫检测措施和NAT技术对HCV、HBV检测的相关性。方法根据酶免检测试剂说明书严格操作,通过ELISA方式常规酶联免疫血液筛查门诊血液标本的抗-HCV与HBs Ag。结果50份HBs Ag阳性血清学筛查标本中,HBs Ag进口与国产酶免检测阳性标本26例,进口阳性标本7例,国产阳性标本6例;48份抗-HCV阳性血清学筛查标本中,进口与国产酶免检测阳性标本13例,进口阳性标本2例,国产阳性标本1例。HBs Ag的单一进口与单一国产试剂ELISA阳性率为0.07%、0.04%,进口与国产双试剂ELISA检测阳性率为0.35%;抗-HCV的单一进口与单一国产试剂ELISA阳性率为0.1%、0.06%,进口与国产双试剂ELISA检测阳性率为0.18%。国产与进口联用试剂检测阳性率明显高于其他两组,P<0.05,具有统计学意义。结论进口和国产抗-HCV、Hbs Ag的ELISA试剂阳性差异性不明显,而进口国产双试剂的酶联免疫检测和核酸检测具有较高相符率。

氯霉素酶联免疫检测方法的研究

通过活化琥珀氯霉素的羧基使其与蛋白联结合成了免疫抗原 ,并制备了氯霉素的多克隆抗体 ,建立了氯霉素直接竞争酶联免疫检测方法 ,检测时间在 1h之内。抗体的ELISA效价达 3.2× 10 5以上 ,I50 为 12 .9ng ml,检测范围为 0 .2 4ng ml- 6 78.8ng ml。抗体与琥珀氯霉素的交叉反应率为 174 .5 4 % ,与其它抗生素的交叉反应率均小于 0 .0 1%。牛奶样品中平均添加回收率为10 6 .5 6 %。所建立的氯霉素酶联免疫检测方法达到了我国牛奶氯霉素残留限量 0 .2 5ng ml的要求 。

ISO15189在酶联免疫检测性能验证方法的探讨

目的经血传播疾病的抗原抗体检测采用酶联免疫方法,对这些方法进行性能验证,以符合ISO15189的要求。方法血液筛查检测采用的酶联免疫方法共有8个检测系统,针对这8个检测系统进行重复性、精密度、灵敏度及特异性、符合性、最低检出限、CUTOFF值的验证。结果 7个方面的性能验证数据与相应的标准进行比较,8个检测系统所有的性能验证结果都符合相应标准的要求。结论针对酶联免疫检测采用的性能验证方法能够满足ISO15189的要求,同时也符合实验室的要求,能够提高实验室对检测系统的性能指标的认识,对实验室管理水平的提高起到了重要的作用。

HBsAg和抗-HCV酶联免疫检测与血液病毒核酸筛查技术的关系

目的分析乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)酶联免疫检测与血液病毒核酸筛查技术的关系。方法选择13085个血样标本,经HBsAg与抗-HCV酶联免疫检测,对确认阳性及阴性的血样标本进行血液病毒核酸方面的筛查,分析HBs Ag与抗-HCV酶联免疫检测与血液病毒核酸筛查技术之间的关系。结果经HBsAg酶联检测显示,13085个血样标本中阳性219个,约占1.67%,分别经过国产或进口试剂检测分析,其一致率为99.55%;经抗-HCV酶联免疫检测显示,13085个血液样本中阳性者108个,约占0.83%,分别经过国产或进口试剂检测分析,其一致率为95.37%;再次确认HBsAg结果显示219个中阳性者198个,阴性者21个,分别经过国产或进口试剂检测分析,其一致率为90.41%;经抗-HCV再次检测确认108个中阳性者57个、阴性者44个、可疑结果7个,分别经过国产或进口检测试剂分析,其一致率为59.26%。将血液标本经核酸筛查技术测定乙型肝炎病毒核酸(HBV DNA)显示结果阳性者195个,阴性17个,而丙型肝炎病毒核酸(HCV RNA)测定结果显示阳性者72个,阴性者36个;合并计算这两种因素,经酶联免疫法测定及再次确认测定灵敏度为97.26%,其特异性计算为94.44%。结论经过HBs Ag及抗-HCV酶联免疫检测,其检测结果显示灵敏度及特异度均良好,但因试剂盒有所不同而出现误检的情况,但血液核酸筛查技术能够有效避免误检情况出现,促进检出率提高。

转基因作物pat蛋白的双抗体夹心酶联免疫检测方法研究

将克隆到的pat基因构建原核表达载体pET30（＋）-pat并在大肠杆菌中进行表达，分离纯化得到高纯度pat蛋白。用所得到的pat蛋白制备了兔多克隆抗体和鼠单抗2F6。多抗效价〉8000，单抗效价为5×10^4；单抗为IgGl类，轻链为，（型。基于抗pat蛋白单克隆抗体和兔多克隆抗体建立了双抗夹心酶联免疫分析方法（SandwichELISA）。检测范围为1．6～100μg／L，线性回归方程y=0．6914x-2．572，决定系数为0．9951。用所建立的方法测定了5个转基因抗虫棉和2个非转基因棉花品种叶片中pat蛋白的含量，其中转基因抗虫棉中的3个品种检测出pat蛋白，其余均未检出pat蛋白。

碱性橙Ⅱ的酶联免疫检测方法的研究

建立碱性橙Ⅱ的酶联免疫分析方法。采用戊二醛偶联法将半抗原碱性橙Ⅱ与载体牛血清白蛋白(BSA)及卵清蛋白(OVA)制备免疫抗原碱性橙Ⅱ-BSA和包被抗原碱性橙Ⅱ-OVA。经紫外可见吸收光谱鉴定和大白兔免疫实验证实人工抗原成功合成,并制备抗碱性橙Ⅱ的多克隆抗体,该抗体可检测快速定量食品中的碱性橙Ⅱ,最低检测限为10 pg。该检测方法具有高灵敏度和特异性,可应用于食品中碱性橙Ⅱ检测试剂盒的研制。

罗丹明123人工抗原的合成及抗体的酶联免疫检测

为建立罗丹明B(rhodamine B)的免疫分析方法,采用戊二醛法,将半抗原罗丹明123与载体牛血清白蛋白(BSA)及卵清蛋白(OVA)偶联制备免疫抗原R123-B S A和包被抗原R123-OVA。经动物免疫实验证实人工抗原合成,并制备抗罗丹明123的多克隆抗体,此抗体同时能够检测食品中的罗丹明B,且最低检测限为0.001ng/mL。

基于单链抗体的呋喃唑酮酶联免疫检测方法的建立

目的:为快速检测呋喃唑酮(furazolidone,FZD)在动物性食品中的残留量。方法:基于单链抗体的间接竞争酶联免疫吸附实验法建立了FZD检测方法。结果:最佳抗原工作质量浓度为2μg/m L,最佳抗体稀释倍数为1∶500,一抗最佳反应时间为60 min,二抗最佳反应时间为45 min,四甲基联苯胺最佳显色时间为20 min。FZD检测试剂盒在10~100 ng/m L范围具有较好的线性关系,IC50值为13.01 ng/m L,检出限为1.28 ng/m L,回收率为73.38%~84.52%。结论:与抗FZD单克隆抗体相比,所建立的检测试剂盒检测范围更广,且具有很高的灵敏度以及很好的特异性和稳定性。

转基因抗虫作物中豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)酶联免疫检测方法的建立

从10个不同豇豆品种中筛选出抑制剂活性最高的901青皮豇豆,提取豇豆胰蛋白酶抑制剂。通过G-75凝胶过滤、亲和层析纯化了豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)并制备了其兔多克隆抗体。用所制备的抗体建立了酶联免疫检测方法并检测了转CpTI编码基因棉花、水稻中的CpTI含量,发现棉花不同器官CpTI的表达量不尽相同。

抗HCV分片段酶联免疫检测试剂的临床评价

在克隆表达了丙型肝炎病毒不同区抗原(HCV—C、NS—3、NS—4、NS—5)的基础上,研制出抗HCV抗体分片段酶联免疫检测试剂。对该试剂特异性、灵敏度进行了临床评价。结果显示该试剂具有良好的特异性和灵敏度。

呋喃唑酮代谢物间接竞争酶联免疫检测方法的研究

建立了呋喃唑酮代谢物间接竞争酶联免疫检测法。用活化酯法将卵清蛋白和半抗原连接成为包被原,对包被原和单克隆抗体的稀释倍数,封闭液浓度、竞争时间、酶标二抗孵育时间和显色反应时间进行优化,同时通过灵敏度、特异性、精密度和准确度等指标进行方法学评价。结果显示,最佳条件为:包被原和单克隆抗体稀释倍数分别为800倍和6 400倍,封闭液是1%脱脂乳,竞争时间是60 min,辣根过氧化物酶标记羊抗鼠二抗孵育时间是45 min,显色时间是15 min。通过建立的标准曲线计算得到线性方程是Y=-0.253X+1.336(R2=0.995),IC50是2.015 ng/m L,线性范围是0.131~30.911 ng/m L,空白猪肉添加回收率是84.8%~90.3%,批内和批间变异系数分别为3.3%~4.1%和4.6%~6.7%。此方法特异性强,准确性、精密度和重现性均良好,可用于动物源性食品中呋喃唑酮代谢物的快速筛查。

GA_(1,3,4,7)酶联免疫检测法(ELISA)的建立

用碳二亚胺(EDC)法将赤霉素A_4(GA_4)与卵清蛋白(OVA)连接,形成GA_4-OVA复合物用于包板,利用GA_4-Me与GA_4-OVA对兔抗GA_4-PAbs竞争结合反应,建立了GA_(1,3,4,7)间接酶联免疫检测法(ELISA).其灵敏度、检测范围和最小检测样品量分别为45pg,0.2～200ng和50～500mg,样品的平均回收率为97%,批内和批间的变异系数分别为4.2%和4.8%.

酶联免疫检测技术在水环境雌激素快速筛选中的应用研究

采用酶联免疫(ELISA)检测技术,对长江口水样和污水处理厂水样中的典型雌激素雌二醇(E2)进行分析,并与化学检测浓度进行验证比较.结果表明:ELISA的检测限可低至0.5 ng.L-1,试验的变异系数小于30%,具有较高的灵敏性和良好的重复性;ELISA检测长江口采集的水样中E2浓度范围在0.5 ng.L-1以下到0.7 ng.L-1,污水处理厂水样中E2浓度范围在2.5～11.5 ng.L-1,与液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)的分析结果相比,相关系数R2为0.9147,表明两种方法具有良好的相关性;ELISA检测所需的水样量比LC-MS/MS更少,使用96微孔板可同时对43个样品进行检测,从而缩短了单个样品的分析时间,具有快速简便和经济适用性.

盐酸克伦特罗的酶联免疫分析试剂盒的研制——Ⅱ克伦特罗酶联免疫检测方法的研究

〔目的〕在成功制备关键试剂的基础上 ,建立克伦特罗酶联免疫检测方法 ,并研制其测试盒。〔方法〕应用ELISA法重复测定样品 ,变异系数为 6.9% ,方法的添加回收率尿样为 92 .5 % ,检测限可达 0 .1ng/ml ,克伦特罗抗体与沙丁胺醇、异丙肾上腺素交叉反应率分别为 1.2 5 %、0 .0 3 %。〔结果〕自制的试剂盒与英国Randox公司的 β -Agonist试剂盒对比试验结果 ,两组数据经极差t检验分析 ,|t| <t0 .975无显著差异。〔结论〕该试剂盒具有专一性、快速、灵敏、准确的特点。

石杉碱甲多克隆抗体的制备及酶联免疫检测方法的建立

目的制备珍稀药源植物蛇足石杉的活性成分石杉碱甲(huperzine A,HupA)的人工抗原及多克隆抗体,建立快速检测HupA的酶联免疫分析方法。方法采用戊二醛法,将半抗原HupA与载体牛血清白蛋白(BSA)及卵清蛋白(OVA)偶联制备人工抗原HupA-BSA和包被抗原HupA-OVA。用HupA-BSA免疫新西兰大白兔,制备抗HupA的抗血清,通过间接ELISA法和竞争ELISA法检测抗血清的效价和特异性。采用Protein A亲和层析法对抗血清进行纯化,以纯化后的多克隆抗体建立HupA的标准竞争抑制曲线。结果合成的人工抗原HupA-BSA的偶联比为10.8∶1,免疫兔子得到抗HupA的抗血清,其效价为1∶64000,HupA的标准竞争抑制曲线为Y=0.215 1X-0.095 5(R2=0.987 3)。结论成功合成石杉碱甲人工抗原,经过免疫兔子制备抗石杉碱甲的多克隆抗体,建立HupA的酶联免疫检测方法。