深圳献血员HBsAg阴性HBVDNA阳性的追踪分析

目的对酶联检测结果阴性NAT筛查为HBVDNA阳性标本8份中的6份进行HBVDNA定量追踪分析,以期发现血清转换期标本。方法采用国产及进口试剂同时检测乙肝表面抗原(HBsAg),丙型肝炎抗体(抗-HCV),爱滋病抗体(抗-HIV),梅毒螺旋体抗体(抗-TP),丙氨酸氨基转移酶(ALT),对各项结果均为阴性者进行核酸检测(NAT)筛查,对HBVDNA阳性献血员进行核酸定量追踪。结果从16512人份标本中筛出8份HBVDNA阳性,其中7例HBVDNA定量检测均能检测出HBVDNA的拷贝数,1例因HBVDNA含量过低不能检出拷贝数;随后追踪标本中HBVDNA含量均无显著性变化,未发现血清转换期献血员。结论所用酶联检测试剂及NAT筛查试剂均有较高灵敏度,核酸定量检测试剂定量较准确,HBVDNA定性检测结果为阳性并不一定说明体内有较高含量的HBVDNA拷贝数;应加大核酸筛查力度,才能发现血清转换期标本,从而为卫生部门制定相关政策提供科学依据。

肝组织HBVDNA定量检查的临床意义

由于对HBV感染的认识正在不断深入,抗病毒治疗急待寻找判定效果可靠的方法,HBVDNA检测,特别是血液和肝组织定量检测显得极其重要。不加选择对HBV感染者作肝活检时留取小粒肝组织,同时采血作HB-VDNA定量检查。急慢性HBV感染病例均示肝组织内HBVDNA检查明显高于血内检出率,同时肝组织HBV含量明显高于血液的含量。肝组织检测HBVDNA可以明显提高HBV感染诊断率,血内HBVDNA阴转时不能说明肝组织内亦已阴转,血内HBVDNA阴转不宜随即停止治疗。

慢性乙型肝炎病人血清HBVDNA滴度与HBeAg ALT关系

本文对我院1997年8月至1998年4月期间95例慢性乙型肝炎住院病人利用Acugen Amplisensor^(TM) HBV法(定量PCR法)进行血清HBVDNA水平检测,同时应用ELISA法检测血清HBeAg(P/N值),并检测了血清谷丙转氨酶(ALT)。研究发现:(1)血清中高滴度HBVDNA多与阳性HBeAg相伴,低水平HBVDNA多与阴性HBeAg相伴(p=0.005)。(2)轻、中、重度慢性乙型肝炎病人血清HBVDNA滴度没有差别。

乙型肝炎患者血清HBeAg模式与HBVDNA负荷的相关性初探

目的:探讨慢性乙型肝炎HBeAg模式与HBVDNA负荷的相关性。方法:检测40例乙型肝炎患者血清HBVDNA负荷和其HBeAg模式。结果:当乙型肝炎患者血清HBVDNA含量为A、C级时,出现HBeAg阳性模式中病毒水平低及HBeAg阴性模式病毒水平高现象,HBeAg阳性模式与HBeAg阴性模式者差异不显著,血清HBVDNA负荷和其HBeAg模式无相关性;当乙型肝炎患者血清HBVDNA含量为B级时,HBeAg阳性模式HBV-DNA载量显著高于HBeAg阴性模式,HBeAg阳性模式与HBeAg阴性模式者差异显著,血清HBVDNA负荷和其HBeAg模式有相关性。结论:当乙型肝炎患者血清HBVDNA含量为A、C级时,血清HBVDNA负荷和其HBeAg模式无相关性;当HBVDNA含量为B级时,乙型肝炎患者血清HBVDNA负荷和其HBeAg模式有相关性。

慢性乙型肝炎患者血清HBVDNA含量与IL-8、IL-10水平检测及临床意义

目的检测慢性乙型肝炎(CHB)患者血清IL-8、IL-10与HBVDNA、ALT水平,探讨乙型肝炎慢性化的机理,为慢性乙型肝炎的治疗提供依据。方法分离72例CHB临床血清标本,用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)测HBVDNA含量;用双抗体夹心法定量检测血清IL-8、IL-10水平,以16位健康献血者的血清为对照。结果与正常对照相比,CHB患者IL-8、IL-10明显升高,IL-10在HBVDNA阳性组高于HBVDNA阴性组,IL-8在ALT异常组明显高于ALT正常组。结论血清IL-8水平的升高与肝损害程度有关,IL-10水平升高与HBVDNA持续感染有关。

血液和组织内HBVDNA定量检查的临床意义

HBV感染的治疗应以抗病毒为主 ,评价疗效应以HBVDNA消长来衡量。用PCR定量法不加选择地观察98例HBV急慢性感染病例的血液和肝、脾、肾、脑组织内HBVDNA含量。急性HBV感染血和肝组织内HBVDNA阳性率和平均含量均较低 ,慢性感染则均明显较高。治疗血内HBVDNA阴转后 ,肝组织内多数亦随之阴转。慢性HBV感染者血和肝、脾、肾、脑组织均可查见HBVDNA ,肝、脾脏组织内含量较高 ,少数阴转可能晚于血液 ,不应忽略巩固治疗 ,防止复发。

HBeAg阴性慢性乙型肝炎中医证型分布及与HBVDNA、肝纤四项关系的研究

目的探讨HBeAg阴性慢性乙型肝炎中医证型分布规律及各证型与实验室指标的关系。方法采用临床流行病学回顾性研究方法，从2008年1月-2009年5月就诊于广东省中医院门诊及住院患者中选取合格研究对象329例，观察其肝功能、HBVDNA、肝纤四项等实验室指标。结果各证型的分布为：肝郁脾虚〉湿热中阻〉肝肾阴虚〉瘀血阻络〉脾肾阳虚。湿热中阻证的血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）水平明显高于其他证型（P〈0．05）。当HBVDNA〈10^4 copies／mL时，湿热中阻证的频数明显高于其他证型（P〈0．05）；而当10^4≤HBVDNA〈10^7 copies／mL时则相反。湿热中阻证三型前胶原（PCIII）的异常率明显高于肝郁脾虚、肝肾阴虚证，肝肾阴虚证层粘连蛋白（LN）、透明质酸（HA）的异常率及瘀血阻络证HA的异常率均明显高于肝郁脾虚、湿热中阻证（P〈0．05）；而肝郁脾虚证IV型胶原（CIV）的异常率与湿热中阻证差异没有统计学意义（P〉0．05）。结论HBeAg阴性慢性乙型肝炎的中医证型分布具有一定的规律；各证型与转氨酶、HBVDNA、肝纤四项等实验室指标之间有一定的内在关系。

HBVDNA的表达与肝纤维化形成的相关性研究

探讨HBVDNA的表达与肝纤维化形成的相关性。应用荧光定量PCR技术测定 2 0 0例乙肝患者和 4 9名健康对照组的血清HBVDNA ,同时用放免法检测层粘连蛋白 (LN)、透明质酸 (HA)、Ⅲ型前胶原 (PⅢ )、Ⅳ型胶原 (Ⅳ .C)水平。HBVDNA表达阳性组LN、HA、PⅢ、Ⅳ .C的含量〔(16 4 8± 5 6 1)、(16 6 1± 78 0 )、(15 3 5± 6 0 7)、(92 1±2 9 9) μg/L〕显著高于HBVDNA阴性组〔(110 9± 2 9 8)、(82 1± 2 4 7)、(91 9± 2 9 2 )、(5 9 5± 14 3) μg/L〕(P <0 0 0 1)和健康对照组〔(10 4 9± 16 3)、(6 8 0± 2 7 6 )、(76 3± 2 1 3)、(5 4 3± 7 8) μg/L〕(P <0 0 0 1)。HBVDNA阳性组中 ,上述四项指标随着HBVDNA含量升高而递增。动态观察 2 8例乙肝患者随着治疗过程HBVDNA浓度下降 ,LN、HA、PⅢ、Ⅳ .C的含量明显递减。

检测HBVDNA/Ig-双特异性循环免疫复合物的免疫捕捉法PCR

目的:建立一种免疫捕捉法PCR技术,研究血清免疫复合物中不同Ig类型抗体结合HBV的情况,并初步探讨其意义。方法:以羊抗人μ、γ、α链的IgG为捕捉抗体,再利用PCR扩增捕捉物中的HBVDNA。结果:成功地建立了检测HBVDNA/IgM、IgG和IgATCIC的免疫捕捉法PCR技术。该技术特异性强、敏感性高、重复性好,可以显著提高HBVDNA的检出率。同时发现,结合HBV的抗体的Ig类型组合有明显差异,三者均阳性最高。结论:说明乙肝患者血清免疫复合物中有较多的病毒颗粒。研究HBVDNA/IgTCIC对乙肝发病机理的深入阐明可能具有重要意义。

抗-HBs阳性肝炎HBVDNA检测和肝活检的临床意义

为了明确抗－ＨＢｓ阳性、肝功能反复异常者的病原学诊断，我们对５８例抗－ＨＢｓ阳性患者测定血清ＨＢＶＤＮＡ，其中１４例行肝穿活检免疫组化双标志检测，结果显示２３／５８患者ＨＢＶＤＮＡ阳性，肝穿组１３／１４患者肝组织ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ双阳性，２例ＨＤＡｇ＋患者ＨＢＶＤＮＡ均阳性。提示抗－ＨＢｓ阳性、肝功能反复异常仍应考虑乙肝病毒感染，血清ＨＢＶＤＮＡ检测和肝穿刺将有助于明确诊断。

基因芯片检测肝炎肝硬化患者肝组织中HBVDNA

目的研究病毒性肝炎基因芯片的制备,用肝炎基因诊断芯片,免疫组织化学法和原位分子杂交法,检测99例乙型肝炎后肝硬化肝组织,比较各种方法的优缺点。方法将PCR扩增的HBVDNA探针用点样仪点于玻片介质上,并经过点样处理后制备成基因芯片;收集肝炎后肝硬化肝组织标本99份,分别用基因芯片、原位分子杂交法、免疫组织化学法检测HBVDNA和HBcAg。结果53例HBcAg、HBVDNA阳性组织中基因芯片检测阳性40例;22例HBcAg阳性组织中基因芯片检测阳性6例;32例HBcAg、HBVDNA阴性组织中基因芯片检测均阴性。结论肝炎基因诊断芯片可以检测肝组织中HBVDNA,准确率可达75%,假阳性率低。

肝炎肝硬化患者肝组织中HBcAg、HBVDNA表达的初步探讨

观察乙型肝炎引起的肝炎肝硬化患者肝组织中HBcAg和HBVDNA的表达。随机采取 10 0例乙型肝炎肝硬化患者 ,行肝活检术取肝组织 ,采用免疫组织化学和原位分子杂交法 ,检测其中HBcAg和HBVDNA。肝组织中HBcAg、HBVDNA的检出率分别为 6 4%和 6 2 %(P >0 0 5 )。血清HBV呈高复制时 ,肝组织中HBcAg和HB VDNA的阳性表达 ,有较好的一致性 ;HBcAg颗粒在肝呈弥漫的浆、膜型分布者 ,其肝组织中HBVDNA呈高表达 ;其肝组织病变是活动的 (P <0 0 5 )。乙型肝炎肝硬化患者肝组织中有较高的HBV复制率 ;肝组织中HBcAg和HBVDNA的分布类型与其中的HBV的复制状况和组织病变的活动性有关。

慢乙肝患者血清及肝组织HBVDNA表达及基因芯片检测研究

用点样仪将 PCR扩增的 HBVDNA探针制成基因芯片 ,对 15例慢性乙型肝炎 (下称慢乙肝 )患者的血清及肝活检组织 ,分别用基因芯片、原位分子杂交法、免疫组织化学法、雅培试剂检测 HBVDNA、HBc Ag、HBs Ag、HBe Ag。结果 15例患者的血清 HBs Ag、HBe Ag及基因芯片检测均阳性。15例肝组织标本中 ,免疫组化法HBc Ag阳性 15例 ,HBVDNA原位分子杂交法阳性 14例 ,基因芯片检测阳性 14例。认为肝炎基因诊断可同时检测乙肝患者血清及肝组织中的 HBVDNA。

HBeAg阴、阳性慢乙肝患者细胞免疫状态及HBVDNA水平分析

目的对比HBeAg阴性及HBeAg阳性慢性乙肝患者在细胞免疫状态及HBV DNA水平方面的差别,分析造成这种差别的可能原因。方法应用流式细胞仪进行T淋巴细胞分类检测、荧光定量PCR测量血清中的HBVDNA。结果在HBVDNA水平方面,HBeAg阴性慢性乙肝患者均值为(5.13±1.43)Log,显著低于HBeAg阳性组的(6.29±1.70)Log(P<0.05);在T淋巴细胞分类方面,HBeAg阴性慢性乙肝患者CD8+T显著高于HBeAg阳性患者,分别是:23.25±3.79和20.69±3.30(P<0.05),总T、CD4+T及CD44+/CD8+比值方面两组无明显差别(P>0.05)。结论HBeAg阴性慢性乙肝患者HBV DNA水平低于HBeAg阳性患者,可能与HBeAg阴性慢性乙肝患者具有相对较强的细胞免疫状态有关。

HBsAg阳性孕妇HBsAg、HBeAg和HBVDNA关系探讨

目的研究HBsAg阳性孕妇血清HBVDNA载量与HBsAg、HBeAg滴度之间的关系。方法入组乙肝疫苗母婴阻断效果研究队列892例未经抗病毒治疗孕妇,经雅培Architect i2000分析仪检测其血清HBsAg和HBeAg,并用雅培全自动实时荧光定量系统m2000定量检测HBVDNA水平。结果 HBeAg阳性组中,HBVDNA阳性率为95.65%;HBeAg阴性组中,HBVDNA阳性率为30.08%,差异有统计学意义(P<0.05)。不同浓度组HBeAg和HBVDNA检测结果比较,差异有统计学意义(P<0.05)。不同载量HBVDNA组,HBeAg差异有统计学意义(P<0.01),且随HBVDNA含量增加而增加,成正相关(r=0.71,P<0.01);HBsAg差异也有统计学意义(P<0.01),随HBVDNA含量增加而增加,成正相关(r=0.53,P<0.01)。结论在未经抗病毒治疗的HBsAg阳性孕妇中HBVDNA载量与HBsAg、HBeAg滴度均呈正相关,HBsAg可以较好的反映HBV复制水平。

2.2.15细胞上清HBVDNA定量检测方法的比较

目的拟筛选和比较2.2.15细胞上清中HBVDNA定量检测的方法。方法分别采用3种方法抽提HBVDNA,抽提物分别采用Taqman荧光定量、SYBR荧光定量PCR技术检测其滴度。结果直接应用上清分别采取热变性,碱裂解法抽提HBVDNA均为阴性,而应用PEG沉淀后检测结果证实细胞上清中有高拷贝的分泌性HBVDNA,Taqman荧光定量方法的敏感性高于SYBR实时定量PCR,在高拷贝时,两种方法的检测结果一致。结论PEG沉淀法是2.2.15细胞上清HBVDNA提取的有效方法,Taqman荧光定量方法敏感性高,是HBVDNA定量检查的首选方法。SYBR法简便,经济,也可用于上清HBVDNA的检测。

慢性HBV感染患者血清cccDNA与HBVDNA、HBeAg关系研究

目的研究慢性HBV感染患者血清cccDNA与HBVDNA、HBeAg关系。方法采用分子信标PCR技术检测156例慢性HBV感染患者血清cccDNA。结果血清HBVDNA、HBeAg阳性组的血清cccDNA阳性率分别与阴性组相比较差异有显著性(P<0.01),血清HBVDNA阴性组血清cccDNA阳性率为0,与HBeAg阴性组比较差异也有显著性(P<0.01)。HBeAg阳性组血清cccDNA水平较高,与阴性组比较差异有显著性(P<0.01)。结论血清cccDNA与血清HBVDNA、HBeAg密切相关,是判断HBV病毒复制、活动、抗病毒效果的指标,可能比HBeAg更有价值。

等位基因差异特异性PCR检测HBVDNA的前C区1896突变位点及其临床意义

为了探讨ＨＢＶ前Ｃ区 １８９６突变位点检测的临床意义，采用３－末瑞等位基因差异特异性ＰＣＲ方法对９５例乙型肝炎病毒感染者的ＨＢＶＤＮＡ１ ８９６位点进行基因型（野生株／突变株）的检测，结果显示：总突变率为６４．２％，总野生率为５５．８％，纯野生型和纯突变型的检出率分别为２８．４％和２７．４％；不同临床类型的乙肝病毒感染者均可出现突变，其野生型、突变型和混合感染型的检出率之间的比较无显著性差异（Ｐ＞０．０５），急性乙肝与慢性乙肝、携带者、肝硬化和肝癌的总突变率存在差异（Ｐ＜０．０５）；血清不同ＨＢｅ系统均可发生突变．抗－ ＨＢｅ阳性组的突变率显著高于ＨＢｅＡｇ阳性和ＨＢｅ系统阴性组（Ｐ＜０．０５），提示：机体感染了ＨＢＶ后．变异主要是发生在慢性持续性感染过程中．突变株逐渐替代了野生株并成为优势株．使宿主得以持续感染ＨＢＶ。

不同Child分级的高HBVDNA滴度原发性肝癌介入治疗后肝功能损害的对比研究

目的对比不同Child分级的高HBVDNA滴度肝癌患者接受介入治疗后肝功能损伤程度的差异。方法对2008年10月至2011年10月收治的80例高HBVDNA滴度的原发性肝癌患者,Child A级50例,Child B级30例,均给予介入治疗,比较两组在介入治疗后6个月内肝功能损伤的差异。结果两组出现肝功能损害的时间均在介入治疗后2周～1个月内,差异无统计学意义(P>0.05);但两组肝功能恢复时间差异有统计学意义(P<0.05)。Child B级组患者肝功能指标在介入治疗后明显升高,损害程度主要为Ⅱ、Ⅲ度,差异与Child A级组比有统计学意义(P<0.05)。在介入治疗后2个月Child A级和B级患者肝功能正常率分别为83%和50%(P<0.01);4个月肝功能正常率分别为88%和67%(P>0.05);6个月肝功能正常率分别为92%和80%(P>0.05)。结论高HBVDNA滴度Child B级肝癌患者在接受介入治疗后,肝功能损害程度明显,损伤比例较高,提示介入治疗前联合HBVDNA滴度和Child分级评价介入治疗指征的重要性。

慢性乙型肝炎患者血清IL-10与HBVDNA复制水平检测及临床意义

检测慢性乙型肝炎 (CHB)患者血清IL - 10与HBVDNA、ALT水平 ,探讨乙型肝炎慢性化的机理。检测 77例CHB临床血清标本 ,用实时荧光定量聚合酶链反应 (FQ -PCR)测HBVDNA含量 ;用双抗体夹心ELISA法定量检测血清IL - 10水平。CHB患者血清IL - 10浓度明显高于正常对照组 (P <0 0 1) ,HBVDNA阳性组高于HBVDNA阴性组 ;CHB组患者血清ALT异常者的IL - 10浓度明显高于ALT正常组 ;IL - 10水平与HBVDNA复制程度呈正相关。CHB患者血清IL - 10水平升高与HBV持续感染、HBVDNA高复制合并肝损害有关。