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HBX-GFP基因工程DN突变体瞬时表达及乙型肝炎病毒复制的实验研究 被引量:5
1
作者 林菊生 梁扩寰 宋家武 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 2003年第1期47-49,共3页
寻找有效的乙型肝炎病毒(HBV)的基因治疗方法,成为当前抗HBV感染的研究热点.新近出现的DN突变体技术(Dominant negative mutant)[1,2],显示出了良好的抗HBV作用苗头.
关键词 hbx-gfp 基因工程 DN突变体 瞬时表达 乙型肝炎病毒 复制 实验研究
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HBx-GFP DN突变子长期稳定表达抑制2.2.15细胞乙型肝炎病毒基因的表达
2
作者 宋家武 林菊生 孔心涓 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期316-319,共4页
目的 探索和寻找更有效的乙型肝炎治疗新的靶点和新的治疗方法 ,研究其抗病毒基因表达作用。方法 运用基因工程技术 ,建立了HBx GFP及其作对照的表达野生X蛋白、绿色荧光蛋白 (GFP)的长期稳定表达细胞克隆 ,Northernblot检测细胞内的... 目的 探索和寻找更有效的乙型肝炎治疗新的靶点和新的治疗方法 ,研究其抗病毒基因表达作用。方法 运用基因工程技术 ,建立了HBx GFP及其作对照的表达野生X蛋白、绿色荧光蛋白 (GFP)的长期稳定表达细胞克隆 ,Northernblot检测细胞内的乙型肝炎病毒相关基因RNA转录 ,应用RIA检测细胞上清液中HBsAg和HBeAg表达 ,观察对乙型肝炎病毒基因表达的影响。 结果所构建的X GFP突变子 ,Xwt,GFP质粒均能在 2 .2 .15细胞株中稳定高效表达并使细胞上清液中HBsAgHBeAg表达水平分别较 2 .2 .15组的 ( 10 1± 5.5)ng/ml、 ( 12 1± 8.6)ng/ml显著降低为平均( 7.6± 11.5)ng/ml、 ( 3 5± 3 .5)ng/ml (P <0 .0 1) ,细胞内的病毒 3 .5kb ,2 .1kb及 2 .4kb的RNA与各对照组比较均有显著降低 ,以 2 .1kb及 2 .4kb的mRNA下降最为显著。结论 乙型肝炎X基因DN突变子X GFP能显著抑制乙型肝炎病毒基因转录和S ,C基因的表达。提示 。 展开更多
关键词 hbx-gfp DN突变子 2.2.15细胞 乙型肝炎病毒 基因表达 基因转录
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HBx—GFP基因工程DN突变体瞬时表达抑制乙型肝炎病毒的实验研究
3
作者 宋家武 林菊生 《胃肠病学》 2002年第B11期45-45,共1页
关键词 hbx-gfp 基因工程 DN突变体 瞬时表达 抑制 乙型肝炎病毒 实验研究
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HBx—GFP DN突变子长期稳定表达抑制2215细胞乙型肝炎病毒基因表达的实验研究
4
作者 宋家武 林菊生 《胃肠病学》 2002年第B11期45-46,共2页
关键词 hbx-gfp DN突变子 2215细胞 乙型肝炎病毒 基因表达 实验研究
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HBx、MHBs^(t155)真核表达载体构建及在HepG2细胞中的表达 被引量:3
5
作者 康艳红 杨林 +4 位作者 麦丽 张绍全 胡朝霞 谢奇峰 高志良 《热带医学杂志》 CAS 2012年第5期501-505,509,F0003,共7页
目的建立稳定、高效的HBx、羧基末端截短的中分子表面蛋白(MHBst)体外表达细胞株,以进一步研究HBx、MHBst蛋白在肝癌发生中的作用及其机理。方法设计特异性引物,采用PCR方法从adr亚型HBV质粒pHBV DNA中扩增HBx、羧基末端截短至155位氨... 目的建立稳定、高效的HBx、羧基末端截短的中分子表面蛋白(MHBst)体外表达细胞株,以进一步研究HBx、MHBst蛋白在肝癌发生中的作用及其机理。方法设计特异性引物,采用PCR方法从adr亚型HBV质粒pHBV DNA中扩增HBx、羧基末端截短至155位氨基酸的中分子表面蛋白(MHBst155)编码基因,并定向插入绿色荧光蛋白(GFP)表达载体pEGFP-C1的BglⅡ、KpnⅠ和BglⅡ、BamHⅠ酶切位点,转化宿主菌DH5α,提取质粒,分别用上述内切酶酶切及DNA测序鉴定重组质粒。采用脂质体介导将空载体、重组质粒分别转染到人肝肿瘤细胞株HepG2中,G418筛选抗性细胞克隆,荧光显微镜下观察GFP表达,挑取表达GFP的抗性克隆扩大培养、传代。采用RT-PCR、蛋白印迹检测抗性细胞中HBx、MHBst155的mRNA及蛋白水平。结果经酶切及测序鉴定成功构建了pGFP-HBx、pGFP-MHBst155重组表达载体,将空载体及重组质粒转染HepG2,经G418筛选约20 d获得抗性细胞克隆。将带有绿色荧光的抗性克隆扩大培养并经传代40次,细胞仍表达强的绿色荧光。RT-PCR及蛋白印迹检测表明转染重组体的HepG2/GFP-HBx、HepG2/GFP-MHBst155细胞有相应的条带,而空载体、空白对照组未出现条带。结论成功构建了HBx、MHBst155真核重组表达载体pGFP-HBx、pGFP-MHBst155,获得了稳定表达融合蛋白GFP-HBx、GFP-MHBst155的HepG2细胞系,为进一步研究HBx及MHBst蛋白在肝癌发生中的作用及分子机制构建了良好的平台。 展开更多
关键词 HBX MHBst155 GFP 细胞株 基因表达
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