三氧化二砷对HBx-Hep G_2细胞侵袭转移能力的影响

目的探讨三氧化二砷(As_2_3)对HBx—Hep G_2细胞体外黏附、侵袭、迁移能力的影响及其机制。方法慢病毒介导构建HBx—Hep G_2细胞模型,免疫细胞化学法检测HBx蛋白表达,分别采用MTT法、Transwell小室检测As_2O_3对HBx—Hep G_2细胞黏附、迁移、侵袭能力的影响,免疫组化方法检测As_2O_3作用前后HBx-Hep G_2细胞CD44V6表达的改变。结果构建后的HBx—Hep G_2细胞呈现HBx阳性信号,主要分布于胞浆,无局部高浓度聚集。随着As_2O_3作用时间的延长及浓度增加,HBx—Hep G_2细胞对Matrigel的黏附能力也随之增加;与作用前相比,As_2O_3作用后HBx—Hep G_2细胞游走与穿透基底膜的能力明显受抑制[(128±8)vs.(102±7)、(96±5)vs.(85±6)]个/HP(P<0.05);与As_2O_3作用前比较,H-SCOKE及阴性表达率均下降[(3.75±0.55)vs.(2.54±0.68)、(92.65±4.86)%vs.(63.27±5.98)%]能抑制HBx—Hep G_2细胞CD44v6的表达(P<0.05)。结论 As_2O_3能抑制HBx-Hep G_2细胞与细胞的黏附、迁移和侵袭能力,其抑制作用可能与CD44v6的表达下调有关。

miR-222通过调控BCL2L13基因促进HBx-HepG2细胞生长

目的:探讨HBx-Hep G2细胞中微小RNA-222(mi R-222)对BCL2L13基因表达的调控作用以及对细胞生长和凋亡的影响,并研究其潜在的分子作用机制。方法:利用实时荧光定量PCR检测mi R-222的表达水平;MTT和集落形成实验检测细胞的生长;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;构建BCL2L13 3’UTR双萤光素酶报告载体,通过采用双萤光素酶报告实验验证mi R-222的靶基因。结果:与正常的肝细胞L02相比,mi R-222在HBx-Hep G2细胞过量表达(P<0.05)。mi R-222过表达可促进HBx-Hep G2细胞的生长,改变细胞周期,降低细胞的凋亡率;mi R-222表达下调可抑制HBx-Hep G2细胞的生长,改变细胞周期,增加细胞的凋亡率,和对照组相比差异有统计学显著性(P<0.05)。与正常肝细胞L02相比,BCL2L13在HBx-Hep G2细胞表达下调(P<0.05);mi R-222表达下调可促进BCL2L13的表达(P<0.05)。双萤光素酶报告实验和pc DNA3.1-BCL2L13转染实验结果提示mi R-222可以通过作用于BCL2L13的3’UTR区,负向调控其表达,从而促进细胞的生长。结论:mi R-222可以通过靶向调控BCL2L13基因进而促进HBx-HepG2细胞的生长。