乙醇诱导肝癌HCC-9204细胞凋亡的研究

目的 :探讨乙醇对肝癌细胞系HCC 92 0 4凋亡的诱导作用 ,建立乙醇诱导肝癌细胞凋亡的模型。方法 :用噻唑蓝 (MTT)法检测浓度分别为 2 %～ 10 %的乙醇对HCC 92 0 4的杀伤作用。然后用 6%乙醇作用 6h诱导HCC 92 0 4细胞凋亡。以透射电子显微镜、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记 (TUNEL)法和流式细胞术分别检测调亡细胞的形态学变化、DNA断裂情况和不同细胞周期的DNA含量变化。结果 :乙醇对HCC 92 0 4细胞的杀伤作用随浓度的增加而增强。 6%乙醇可使HCC 92 0 4细胞产生明显的凋亡形态学变化 ,大部分细胞为TUNEL阳性 ,并且流式细胞仪分析可见明显的亚二倍体凋亡峰。结论 :低浓度乙醇能有效诱导HCC 92 0

Bax对HCC-9204细胞系的凋亡及化疗敏感性的影响

目的研究Bax对HCC-9204细胞系凋亡和对阿霉素敏感性的影响。方法采用脂质体转染法将Bax基因转入HCC-9204细胞中。免疫组织化学分析Bax在HCC-9204细胞中的表达,TUNEL及细胞周期分析细胞凋亡,MTT实验判断肿瘤细胞的活力。结果免疫组化结果显示转染Bax基因的HCC-9204/Bax细胞的Bax表达显著增加。TUNEL检测显示,HCC-9204/Bax细胞的凋亡指数在ZnSO4诱导后24、48h明显增加(3·6±5·3vs27·2±10·5,t=63·45,P<0·05;4·2±4·1vs32·3±8·6,t=93·27;P<0·05),流式细胞仪分析显示,诱导后48h出现显著的“亚二倍体峰”。MTT实验显示Bax基因的过表达能够降低阿霉素处理后的细胞活力,呈时间依赖性。结论Bax基因不仅可以诱导HCC-9204细胞的凋亡,而且能够增加HCC-9204细胞对阿霉素杀伤作用的敏感性。

Bax基因的过表达上调HCC-9204细胞系对阿霉素的敏感性

目的 探讨Bax基因的过表达是否能够调节HCC 92 0 4细胞系对阿霉素的敏感性。方法 采用一种可诱导性表达系统、MT Ⅱ调节系统 ,在外加锌离子 (ZnSO4,10 0 μmol/L)的条件下 ,诱导Bax基因过表达。以克隆形成实验来判断Bax是否能够降低阿霉素处理后肿瘤细胞的克隆存活率。以MTT实验来反映细胞活力的改变。凋亡性细胞死亡的鉴定是通过形态学标准并结合TUNEL和细胞周期的分析加以证实。结果 阿霉素能够显著诱导HCC 92 0 4细胞发生凋亡。TUNEL染色显示典型的凋亡特征如新月体样或环状染色体边集于核膜 ,胞浆皱缩并且“发泡”。流式细胞仪分析显示 ,在处理后 2 4h出现显著的亚二倍体峰。Bax能够显著降低阿霉素处理组的克隆存活率 ,Bax也能够降低药物处理后的细胞活力 ,呈时间依赖性。结论 Bax基因的过表达能够增加HCC 92 0

乙醇诱导的肝癌细胞HCC-9204凋亡及其与Bax和Bcl-2蛋白的关系

目的探讨乙醇对肝癌细胞凋亡的诱导作用及其与凋亡相关基因bax和bcl-2表达的关系。方法用噻唑蓝(MTT)法检测浓度分别为20～100 mL/ L的乙醇对肝癌细胞系HCC-9204的杀伤作用。然后，用60 mL/ L乙醇作用6 h诱导HCC-9204细胞凋亡。以May-Grunwald-Giemsa (MGG)染色法、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法和流式细胞术分别分析凋亡细胞的形态学变化、DNA断裂情况和不同细胞周期的DNA含量变化。用免疫细胞化学染色图象分析法，检测诱导凋亡前、后Bax和Bcl-2蛋白表达水平的变化。结果随着乙醇浓度的增加，其对HCC-9204细胞的杀伤作用逐渐增强。60 mL/ L乙醇可使HCC-9204细胞发生明显的细胞凋亡的形态学变化，并且大部分细胞为TUNEL阳性着色。流式细胞术分析可见明显的亚二倍体凋亡峰。诱导凋亡后的HCC-9204细胞Bax蛋白的表达水平明显增高，而Bcl-2在诱导凋亡前、后的HCC-9204细胞中均未见表达。结论低浓度乙醇对肝癌细胞HCC-9204具有明显的凋亡诱导作用，其凋亡的发生与Bax蛋白表达水平的增高有关。

苦丁冬青苷D对人HCC-1806乳腺癌细胞增殖、凋亡、自噬的影响及机制研究

目的探讨苦丁冬青苷D(KD-D)对人HCC-1806乳腺癌细胞增殖、凋亡、自噬的影响及机制。方法将人HCC-1806乳腺癌细胞作为研究对象,给予不同浓度KD-D处理后,采用CCK-8法检测细胞存活率;EdU法检测细胞增殖能力;结晶紫染色法检测细胞克隆形成能力;流式细胞术(Annexin V-FITC/PI法)检测细胞凋亡;JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位;免疫荧光法检测细胞Cleaved Caspase-3、LC3、P62蛋白表达;Western Blot法检测细胞Cleaved Caspase-3、Pan-AKT、Phosp-AKT、LC3Ⅱ蛋白表达;自噬双标mRFP-EGFP-LC3腺病毒感染实验检测细胞自噬流。结果与对照组比较,12.5、25、50、100、200、400μmol·L^(-1)KD-D处理HCC-1806细胞24、48 h后,随着给药浓度增大和处理时间延长,细胞活性显著降低(P<0.001),细胞内吸光度值显著降低(P<0.001),细胞增殖受到抑制;60、80μmol·L^(-1)KD-D组的细胞克隆形成计数显著减少(P<0.001);50、100、150μmol·L^(-1)KD-D组细胞的早期及晚期凋亡比例均显著升高(P<0.05,P<0.001);40、60、80μmol·L^(-1)KD-D组的红色荧光比例显著下降(P<0.001),绿色荧光比例显著升高(P<0.01,P<0.001),HCC-1806细胞线粒体膜电位下降;60、80、100μmol·L^(-1)KD-D组细胞的Cleaved Caspase-3蛋白表达均显著上调(P<0.001),60μmol·L^(-1)KD-D组细胞的Pan-AKT、Phosp-AKT蛋白表达均显著上调(P<0.001);60μmol·L^(-1)KD-D组细胞的LC3蛋白荧光小点数量显著增加(P<0.001),P62蛋白平均荧光强度显著降低(P<0.001),LC3Ⅱ蛋白表达显著上调(P<0.001),自噬小体及自噬溶酶体数量显著增加(P<0.01,P<0.001),自噬流激活。与60μmol·L^(-1)KD-D组比较,KD-D+AKT抑制剂(Afuresertib)组细胞的Cleaved Caspase-3、Pan-AKT蛋白表达显著下调(P<0.01,P<0.001),Phosp-AKT蛋白表达显著上调(P<0.001)。结论KD-D能抑制人乳腺癌HCC-1806细胞增殖,并诱导其发生凋亡和自噬,KD-D诱导HCC-1806细胞凋亡可能与激活AKT信号影响Cleaved Caspase-3表达有关。

人肝癌细胞系HCC-9724的建立及其生物学特性

目的 建立一株肝癌细胞系 HCC- 972 4,为肝癌研究提供实验模型 .方法 无菌切除肝癌手术标本 ,6只裸鼠右后肢皮下包埋 ,体内连续传 3代后 ,取移植瘤体外培养 ,绘制细胞生长曲线 ,光镜、电镜观察细胞形态 ,并进行细胞周期和染色体核形分析 ,用免疫荧光法测定荷瘤鼠中 AFP的表达 .结果 移植模型原代获得率为 33.3% ,潜伏期为 5 2 d,自第 3代后肿瘤获得率为 10 0 .0 % ,潜伏期为 16 d,该模型移植瘤具有生长稳定 ,移植成功率高 (10 0 % ) ,潜伏期短 (10 d) ,无自发消退等特点 ,裸鼠移植瘤标本体外培养得到肝癌细胞系 HCC-972 4(简称 H) ,其形态结构 ,排列方式和移植瘤的分化程度与原发瘤保持一致 ,且遗传学特性包括染色体形态仍为人类核型 ,众数维持在 6 2～ 6 6之间 ,占 75 .0 % ,细胞周期分析 G1 期5 3.5 % ,G2 期 19.5 % ,S1 期 2 7.0 % ,细胞群体倍增时间为 2 3d,建立的裸小鼠人肝癌模型具有典型的肝细胞癌特征 ,持续分泌甲胎蛋白 (AFP) .结论 通过裸鼠体内移植瘤建立的肝癌细胞系 HCC- 972 4,与原发癌保持相同的生物学特性 ,体外连续传代 6 mo以上 ,细胞形态不变 ,生长周期恒定 。

IκB-α基因转染HCC9204细胞对NF-κB和MMP-9表达的影响

目的观察高转移性人肝癌细胞系HCC9204转染抑制性κB基因(IκB-α)后核因子-κB(NF-κB)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的改变。方法采用脂质体法将IκB-α基因转染HCC9204细胞,应用Western-blot及RT-PCR法检测MMP-9和NF-κB的表达;通过基底膜侵袭实验检测肿瘤细胞的浸润和转移能力。结果HCC9204细胞转染pcDNA3-IκB-α后,细胞内NF-κB蛋白表达下降,同时伴随MMP-9mRNA表达水平和细胞侵袭、转移能力的明显下降。结论NF-κB活性被抑制后引起细胞侵袭、转移能力的下降可能是由于MMP-9表达下降所致。

新建肝癌细胞系(HCC-9810)的初步观察

目的 建立山东地区的肝癌细胞系,并研究其生物学特性.方法 将临床获取肝癌标本用组织块法进行体外培养,观察肝癌细胞的形态学、核型、增殖动力学和AFP功能.结果 肝癌细胞系(HCC-9810)具有典型的上皮细胞特征,染色体数目22～116,细胞倍增时间约20.4h.结论提示HCC-9810是一株新建肝癌细胞系,可作为进一步肝癌研究的模型.

人肝细胞肝癌细胞系HCC-9903生物学特性的初步观察

目的 :新建一株人肝癌细胞系 ,为肝癌研究提供新的实验模型。方法 :用组织块法培养 ,并按细胞系建立标准检测细胞的一系列生物学特性。结果 :细胞维持培养 15个月 ,传代 10 0代 ,细胞形态及超微结构具有恶性细胞的特征 ,45代细胞的倍增时间为 2 1 3h ,细胞能在软琼脂上生长 ,形成集落 ,染色体众数60～ 67条 ,主干系为亚三倍体。 1q(i) 和t(6,11)为其标记染色体 ,细胞对刀豆球蛋白有凝集反应 ,5× 10 6 细胞接种于裸鼠皮下 ,肿瘤呈进行性生长。结论 :该细胞系符合建系标准 ,是一株新建的肝癌细胞系。

人工三倍体桑树新品种9204细胞染色体核型分析

采用酶解去壁低渗和BSG法对桑品种 92 0 4及其亲本洛玉 1号和西庆 2号的细胞染色体核型进行分析研究。 92 0 4、洛玉 1号、西庆 2号的核型公式分别为 :2n =3x =4 2 =3 6m +6sm ,2n =2x =2 8=2 4m +4sm ,2n =4x =56=4 8m +8sm ;带型公式分别为 :2n =4 2 =4CIT +3CI +T+ +3CIT+ +3CI +T+ +1T++4CT+ +2T+ +1 0CT +8C +3I+1 ,2n=2 8=2CIT +4CI+T+ +1CIT +2CIT+ +2T +1CT +2T +6CT +5C +2I+1 ,2n=56=6CIT +7CI+T+ +9CIT +1 2CIT+ +3T +1 0CT +CT +3CT +2C +2T

阿霉素诱导人肝癌细胞株HCC－9204肝癌细胞凋亡的实验研究

阿霉素诱导人肝癌细胞株ＨＣＣ－９２０４肝癌细胞凋亡的实验研究张晓东，王文亮（西安病理学教研室西安７１００３３）关键词肝细胞瘤；凋亡；阿霉素中图号Ｒ７３－３作者应用抗癌药阿霉素（ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ）成功地诱导培养的人肝癌细胞株ＨＣＣ－９２０４肝癌细胞...

乙醇诱导的肝癌细胞HCC—9204凋亡及其与Bax和Bcl—2蛋白的关系

［杨连君，王文亮，司晓辉. 细胞与分子免疫学杂志，2001;17（4）：315-317］ 目的探讨乙醇对肝癌细胞凋亡的诱导作用及其与凋亡相关基因bax和bcl-2表达的关系. 方法用噻唑蓝(MTT)法检测浓度分别为20～100 mL·L-1的乙醇对肝癌细胞系HCC-9204的杀伤作用. 然后，用60 mL·L-1乙醇作用6 h诱导HCC-9204细胞凋亡. 以May-Grunwald-Giemsa (MGG)染色法、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法和流式细胞术分别分析凋亡细胞的形态学变化、DNA断裂情况和不同细胞周期的DNA含量变化. 用免疫细胞化学染色图像分析法，检测诱导凋亡前、后Bax和Bcl-2蛋白表达水平的变化. 结果随着乙醇浓度的增加，其对HCC-9204细胞的杀伤作用逐渐增强. 60 mL·L-1乙醇可使HCC-9204细胞发生明显的细胞凋亡的形态学变化，并且大部分细胞为TUNEL阳性着色.流式细胞术分析可见明显的亚二倍体凋亡峰. 诱导凋亡后的HCC-9204细胞Bax蛋白的表达水平明显增高，而Bcl-2在诱导凋亡前、后的HCC-9204细胞中均未见表达. 结论低浓度乙醇对肝癌细胞HCC-9204具有明显的凋亡诱导作用，其凋亡的发生与Bax蛋白表达水平的增高有关. (何扬举)

JA_1对体外培养肝癌细胞线粒体膜电位及wt-p53基因表达的影响

为探索梯度浓度的JA1对体外培养人肝癌细胞株(HCC-9724)的细胞周期、细胞线粒体膜电位和wt-p53蛋白表达的影响.采用流式细胞技术和体外细胞培养技术,发现经JA1处理后的细胞培养样本中有明显的DNA低含量颗粒("亚G1期"峰),细胞周期各时相分布发生改变,细胞在G1被阻滞.细胞线粒体膜电位(ΔΨm)明显下降,且表现出剂量和时间效应关系.而wt-p53蛋白阳性细胞百分率则随时间延长而逐渐增加.JA1诱导了HCC-9724细胞线粒体膜电位的下降和细胞凋亡,而wt-p53蛋白表达的增强则是其诱导HCC-9724细胞凋亡的重要分子机制之一.

27-P-CAUA通过抑制HER2/PI3K/AKT信号通路诱导乳腺癌细胞凋亡和线粒体自噬

目的探讨大叶冬青叶中三萜类活性成分27-P-香豆酰基-乌索酸(27-P-CAUA)对乳腺癌细胞增殖抑制的作用机制。方法27-P-CAUA处理HCC-1806细胞24、48、72 h后,CCK-8法检测HCC-1806细胞存活率;集落克隆法检测27-P-CAUA对细胞的增殖抑制作用;JC-1检测线粒体膜电位改变;流式细胞术检测细胞凋亡情况;细胞免疫荧光观察C-Caspase-3、P62表达;氯喹预处理后,Western blot观察27-P-CAUA对LC3I/II、P62以及HER2信号通路蛋白的影响。结果CCK-8和集落克隆结果显示,随着药物浓度增加和时间延长,27-P-CAUA对HCC-1806乳腺癌细胞的抑制作用逐渐增强(P<0.01),24、48、72 h的IC50值分别为83.671、49.479、19.578µmol/L;JC-1检测结果显示,线粒体膜电位改变明显(P<0.01);流式细胞术结果显示,27-P-CAUA可诱导细胞发生凋亡,细胞早期调亡比率增加3.34%;免疫荧光结果显示,C-Caspase-3表达增强,促进细胞凋亡,40µmol/L 27-P-CAUA能显著诱导细胞凋亡(P<0.01)。Western blot和细胞免疫荧光结果显示,27-P-CAUA降低LC3II表达,导致P62降解,诱导自噬发生。经氯喹预处理后,27-P-CAUA诱导自噬可被逆转。此外,27-P-CAUA可抑制细胞内Her2及AKT蛋白的磷酸化,细胞内的Her2以及磷酸化AKT蛋白表达逐渐减少(P<0.01)。结论27-P-CAUA可通过抑制HER2/PI3K/AKT信号通路,抑制HCC-1806细胞增殖,诱导细胞发生线粒体自噬和凋亡。

人子宫颈鳞状细胞癌细胞系HCC-0214的建立及其生物学特性

目的 建立人子宫颈鳞状细胞癌细胞系HCC-0214,为子宫颈癌研究提供实验模型。方法无菌切除人子宫颈癌的手术标本,用组织块贴壁法体外培养,连续传代稳定生长后,绘制细胞生长曲线。采用光镜、电镜观察细胞形态,并进行细胞周期和染色体核形分析。用免疫组化法测定细胞系肿瘤标记物的(ER、PR、Keratine、PCNA)表达情况。结果组织块贴壁法体外培养获得人子宫颈鳞状细胞癌细胞系HCC-0214(简称H),细胞维持培养16个月,传代131代,生长稳定,群体倍增时间为35.48 h,细胞呈上皮镶嵌状贴壁生长,趋向复层生长,无接触抑制。超微结构显示,具有典型的桥粒结构和较多的张力原纤维。染色体数目35～156条,主流范围58～80条(64.8％),结构为人类染色体。细胞的肿瘤标记物(ER、PR、Keratine、PCNA)检测呈高表达,DNA指数为1.931。裸鼠移植瘤组织病理形态学与患者原始肿瘤一致,无血清培养成功。结论通过组织块贴壁法体外培养建立的人子宫颈鳞状细胞癌细胞系HCC-0214,与原发癌保持相同的生物学特性,体外连续传代16个月以上,细胞形态不变,生长周期恒定,可望作为一个稳定的细胞系。

人肝癌细胞移植瘤QGY-9204中细胞调亡和坏死并存现象的初步分析

关于细胞调亡和坏死的判别标准及其相互关系已逐渐成为研讨的热点．研究表明，p53基因的表达导致细胞周亡，抑制肿瘤形成．在将Ad／p53导人人肝癌细胞移植瘤QGY－9204的研究中发现，实验组与对照组的移植瘤中均出现凋亡特征指标（DNA梯型条带、凋亡小体等）．而离体培养的肝癌细胞QGY－7703并未检出细胞凋亡现象．那么，实体瘤的DNA梯型条带与调亡和坏死有何关系？研究表明，瘤体内细胞阔亡和坏死并存，与对照组相比，实验组的瘤体积较小，坏死面积小，凋亡比例较高．对移植瘤QGY－9204中细胞调亡和坏死的特征及其并存现象的可能原因进行了初步分析，推断：在该移植瘤内，凋亡和坏死并非是细胞死亡的两种相互排斥的选择，它们可能相继发生和互为影响．

NF-κB、MMP-9与肝细胞肝癌浸润转移的实验研究

目的观察高转移性肝癌细胞系HCC9204细胞转染抑制性κB基因(IκB-α)后核因子κB(NF-κB)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的改变以及细胞浸润转移能力的改变。方法采用脂质体法将IκB-α基因转染HCC9204细胞,应用Western-blot及RT-PCR法检测MMP-9和NF-κB的表达;电泳迁移率分析(EMSA)测定NF-κB活性;免疫组化法检NF-κBp65、MMP-9的表达;激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察MMP-9细胞定位以及细胞形态;基底膜侵袭实验检测肿瘤细胞的浸润和转移。结果HCC9204细胞转染PcDNA3-IκB-α后,细胞内NF-κB和MMP-9mRNA表达以及NF-κB活性下降;NF-κB、MMP-9表达具有明显的正相关;MMP-9蛋白表达位置和细胞形态改变;细胞侵袭转移能力明显下降。结论NF-κB表达水平与HCC9204的浸润转移能力有关;NF-κB活性抑制后细胞浸润转移能力下降,MMP-9表达下降可能起主要作用。