“二仙汤”对人乳腺癌HCC1937细胞侵袭的影响

乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤,乳腺癌细胞转移是治疗失败和患者死亡的主要原因。中医学认为冲任失调是发生乳房疾病最主要的致病因素之一,也是乳腺癌复发转移的重要病机。临床上＂调摄冲任＂治则法能明显改善乳腺癌术后患者的预后,减少肿瘤复发和转移。本研究就＂二仙汤＂经典方剂的抗乳腺癌HCC1937细胞转移进行了体外实验研究。现报道如下。

小檗碱抑制缺氧诱导的人乳腺癌HCC1937细胞自噬

目的研究小檗碱(berberine,BBR)对缺氧条件下人乳腺癌HCC1937细胞自噬的影响。方法培养人乳腺癌HCC1937细胞,以CCK-8法分别测定常氧及缺氧条件下不同浓度BBR(0,5,10,20,40,80,160μmol·L^(−1))对细胞活力的影响,选择用于进一步实验的药物浓度;将培养的HCC1937细胞随机分为4组:对照组,20μmol·L^(−1) BBR组,缺氧组,缺氧+20μmol·L^(−1) BBR组。LIVE/DEAD细胞活力/细胞毒性试剂盒测定细胞死亡率。Western blotting测定自噬相关蛋白Beclin1、LC3及P62的表达。以mCherry-GFP-LC3腺病毒感染细胞,激光共聚焦显微镜成像并计数各组单个细胞内自噬体及自噬溶酶体的数目,判定BBR对HCC1937细胞自噬流的影响。结果BBR呈浓度依赖性地降低人乳腺癌HCC1937细胞的细胞活力;缺氧处理后HCC1937细胞的死亡率无显著改变,细胞内Beclin1、LC3-II及LC3-II/LC3-I的比值显著增加,P62无显著改变,自噬流增强;常氧及缺氧条件下BBR都能显著增加细胞的死亡率,降低Beclin1及LC3II/LC3-I的比值,增加细胞内P62,显著减少自噬体及自噬溶酶体的数量,抑制自噬体的形成及清除。结论BBR增加缺氧条件下人乳腺癌HCC1937细胞的死亡率,其作用与BBR抑制缺氧条件下细胞自噬的作用相关。

紫杉醇顺铂对HCC1937人乳腺癌细胞MAPK信号通路影响

目的:研究紫杉醇、顺铂对BRCA1基因缺陷型三阴性乳腺癌细胞HCC1937的增殖抑制作用及与MAPK信号通路的关系。方法:采用CCK-8试剂盒检测紫杉醇、顺铂分别对HCC1937细胞、MCF-7细胞的50%抑制浓度(IC_(50));采用流式细胞仪和Western blot分别检测两药作用HCC1937细胞48 h后的细胞周期和MAPK通路蛋白表达状况。结果:HCC1937细胞(IC_(50) 6～9μg/mL)对顺铂敏感性显著高于MCF-7细胞(IC_(50) 18～20μg/mL)(P<0.01);而HCC1937细胞(IC_(50) 3～4.6μg/mL)对紫杉醇的敏感性则明显低于MCF-7细胞(IC_(50) 0.12～0.3μg/mL)(P<0.01)。紫杉醇使HCC1937细胞阻断在G_2～M期,呈剂量-效应趋势,顺铂使其阻断在G_0/G_1期;紫杉醇、顺铂作用HCC1937细胞48 h后,P-JNK和P-P38蛋白表达显著增加,顺铂组P-ERK蛋白表达较对照组明显降低。结论:1)三阴性乳腺癌细胞HCC1937对顺铂的敏感性明显优于紫杉醇;2)紫杉醇、顺铂皆可激活HCC1937细胞JNK/SAPK、P38通路,同时不同浓度的顺铂可以抑制ERK通路激活。

X射线对人三阴性乳腺癌细胞E-钙黏蛋白基因表达的影响

目的研究不同剂量X射线照射人三阴性乳腺癌细胞,照射后不同时间点对人三阴性乳腺癌细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)基因表达的影响。方法用X射线分2.5、5和10 Gy 3个吸收剂量组照射体外培养的人三阴性乳腺癌HCC1937细胞和MDA-MB-231细胞,采用荧光实时定量PCR技术检测HCC1937细胞和MDA-MB-231细胞经照射后6、12、24和48 h的E-cadherin mRNA表达水平,以未照射组(0 h组)为对照。结果 HCC1937细胞和MDA-MB-231细胞E-cadherin mRNA的表达在2.5、5、10 Gy X射线照射后,随着时间点的后移呈升高趋势。与未照射组相比,除了HCC1937细胞10 Gy照射后6 h、2.5 Gy和5 Gy照射后24 h及MDA-MB-231细胞5 Gy照射后12 h外,各时间点差异均有统计学意义(P<0.05)。HCC1937细胞在2.5 Gy和10 Gy照射后48 h,E-cadherin mRNA的表达呈下降趋势,与未照射组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论较大剂量的X射线整体可上调HCC1937细胞和MDA-MB-231细胞E-cadherin mRNA的表达,可能诱导了肿瘤细胞凋亡;晚期HCC1937细胞E-cadherin mRNA的表达下降,可能与辐射所致HCC1937细胞的放射生物学效应有关。

薯蓣皂苷元对三阴乳腺癌细胞系HCC1937增殖及凋亡的影响

目的探讨薯蓣皂苷元对人三阴乳腺癌细胞系HCC1937增殖及凋亡的影响。方法对数生长期人三阴乳腺癌HCC1937细胞株分为空白组(培养液)、实验1组(培养液+10mg/L薯蓣皂苷元)、实验2组(培养液+25mg/L薯蓣皂苷元)。采用MTT法观察薯蓣皂苷元培养24、48、72h时HCC1937细胞生长抑制率;流式细胞仪检测薯蓣皂苷元培养48h时HCC1937细胞周期及细胞凋亡;Western blot法检测薯蓣皂苷元培养48h时Bcl-2、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2associated X protein,Bax)、P53、caspase3蛋白表达;Transwell实验观察薯蓣皂苷元培养24h时HCC1937细胞侵袭能力。结果薯蓣皂苷元培养24、48、72h,HCC1937细胞生长抑制率在实验1组分别为(6.86±2.56)%、(15.57±1.86)%、(14.84±4.64)%,在实验2组分别为(11.78±2.16)%、(24.48±3.70)%、(31.38±3.76)%,均高于空白组[(3.34±2.56)%、(8.47±1.86)%、(7.73±4.64)%](P<0.05),且实验2组高于实验1组(P<0.05);薯蓣皂苷元培养48h,实验1组G_1期细胞比例、细胞凋亡率分别为(36.21±3.12)%、(21.99±2.36)%,实验2组分别为(50.26±2.36)%、(26.17±3.46)%,均高于空白组[(28.35±2.54)%、(17.25±1.23)%](P<0.05),实验2组高于实验1组(P<0.05);薯蓣皂苷元培养24h,实验1组、实验2组HCC1937侵袭细胞数目[(64.00±11.01)%、(30.33±6.11)%]低于空白组[(146.00±9.16)%](P<0.05),实验2组低于实验1组(P<0.05);薯蓣皂苷元培养48h时,实验1组、实验2组HCC1937细胞Bcl-2表达量低于空白组,Bax、caspase3表达量高于空白组(P<0.05),实验1组Bcl-2表达量低于实验2组,Bax、caspase3表达量高于实验2组(P<0.05),3组P53蛋白表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论薯蓣皂苷元可抑制人三阴乳腺癌细胞系HCC1937增殖与侵袭,可能机制为使肿瘤细胞G_1期阻滞,下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达,上调促凋亡蛋白Bax、caspase3表达。

三氧化二砷对三阴性乳腺癌细胞增殖及凋亡的抑制作用

目的探讨三氧化二砷对人三阴性乳腺癌细胞HCC1937的抑制作用。方法体外培养人乳腺癌HCC1937细胞,利用MTT法及倒置荧光显微镜观察三氧化二砷对人乳腺癌HCC1937细胞生长的抑制作用。结果不同浓度的三氧化二砷均可抑制人乳腺癌HCC1937细胞的增殖,促进其凋亡。三氧化二砷20μg/m1对肿瘤细胞作用72h,其生长抑制率达80.51%。结论三氧化二砷可有效抑制人乳腺癌HCC1937细胞生长,且呈时间、剂量依赖关系。