IκB-α基因转染HCC9204细胞对NF-κB和MMP-9表达的影响

目的观察高转移性人肝癌细胞系HCC9204转染抑制性κB基因(IκB-α)后核因子-κB(NF-κB)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的改变。方法采用脂质体法将IκB-α基因转染HCC9204细胞,应用Western-blot及RT-PCR法检测MMP-9和NF-κB的表达;通过基底膜侵袭实验检测肿瘤细胞的浸润和转移能力。结果HCC9204细胞转染pcDNA3-IκB-α后,细胞内NF-κB蛋白表达下降,同时伴随MMP-9mRNA表达水平和细胞侵袭、转移能力的明显下降。结论NF-κB活性被抑制后引起细胞侵袭、转移能力的下降可能是由于MMP-9表达下降所致。

利用自体的人肝癌细胞系HCC-9724诱导特异性CTL

目的 :用自体的人肝癌细胞系诱导对肝癌细胞具有特异性杀伤作用的T淋巴细胞。方法 :分离肝癌患者外周血淋巴细胞 (PBL) ,在 5 0U/mlIL - 2存在下与经照射的自体肝癌细胞系共刺激 ,进行筛选性的混合淋巴细胞肿瘤细胞培养 (MLTC) ,直接免疫荧光法分析其细胞表型 ,51Cr释放试验检测效应细胞的杀伤效应。结果 :淋巴细胞明显增殖 ,细胞变大呈豆芽状。细胞毒性实验证明该细胞对HCC - 972 4有特异性杀伤作用 ,而对K5 6 2细胞没有杀伤作用。结论 :利用同体肝癌细胞系HCC - 972 4作为刺激细胞反复诱导肝癌患者能产生肝癌特异性的CTL。推测在刺激及培养条件适宜时 ,人外周血中较少的CTL前体细胞 (CTLp)

Bax对HCC-9204细胞系的凋亡及化疗敏感性的影响

目的研究Bax对HCC-9204细胞系凋亡和对阿霉素敏感性的影响。方法采用脂质体转染法将Bax基因转入HCC-9204细胞中。免疫组织化学分析Bax在HCC-9204细胞中的表达,TUNEL及细胞周期分析细胞凋亡,MTT实验判断肿瘤细胞的活力。结果免疫组化结果显示转染Bax基因的HCC-9204/Bax细胞的Bax表达显著增加。TUNEL检测显示,HCC-9204/Bax细胞的凋亡指数在ZnSO4诱导后24、48h明显增加(3·6±5·3vs27·2±10·5,t=63·45,P<0·05;4·2±4·1vs32·3±8·6,t=93·27;P<0·05),流式细胞仪分析显示,诱导后48h出现显著的“亚二倍体峰”。MTT实验显示Bax基因的过表达能够降低阿霉素处理后的细胞活力,呈时间依赖性。结论Bax基因不仅可以诱导HCC-9204细胞的凋亡,而且能够增加HCC-9204细胞对阿霉素杀伤作用的敏感性。

Bax基因的过表达上调HCC-9204细胞系对阿霉素的敏感性

目的 探讨Bax基因的过表达是否能够调节HCC 92 0 4细胞系对阿霉素的敏感性。方法 采用一种可诱导性表达系统、MT Ⅱ调节系统 ,在外加锌离子 (ZnSO4,10 0 μmol/L)的条件下 ,诱导Bax基因过表达。以克隆形成实验来判断Bax是否能够降低阿霉素处理后肿瘤细胞的克隆存活率。以MTT实验来反映细胞活力的改变。凋亡性细胞死亡的鉴定是通过形态学标准并结合TUNEL和细胞周期的分析加以证实。结果 阿霉素能够显著诱导HCC 92 0 4细胞发生凋亡。TUNEL染色显示典型的凋亡特征如新月体样或环状染色体边集于核膜 ,胞浆皱缩并且“发泡”。流式细胞仪分析显示 ,在处理后 2 4h出现显著的亚二倍体峰。Bax能够显著降低阿霉素处理组的克隆存活率 ,Bax也能够降低药物处理后的细胞活力 ,呈时间依赖性。结论 Bax基因的过表达能够增加HCC 92 0

DNA错配修复基因甲基化在肝细胞癌发生发展中的作用

目的 探讨DNA错配修复基因 (MMR)hMLH1,hMSH2和hMSH3甲基化在肝细胞癌(HCC)发生发展中的作用。方法 采用甲基化特异性聚合酶链反应 (MSP)法对 38例新鲜HCC组织 ,相应非肿瘤肝组织 ,2例正常的捐肝组织及 6种肝癌细胞系的hMLH1,hMSH2和hMSH3基因启动子CpG岛甲基化进行检测 ;培养 6种肝癌细胞系 ,MSP法检测加入 5 aza 2′ deoxycytidine前后hMSH2基因在HCC中的甲基化状态改变 ;逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测加入 5 aza 2′ deoxycytidine前后hMSH2在肝癌细胞株中的mRNA表达改变。 结果 HCC标本中 13 2 % (5 / 38)发生了hMLH1启动子甲基化 ,6 8 4 % (2 6 / 38)发生了hMSH2启动子甲基化 ;相应的非肿瘤肝组织中hMLH1,hMSH2启动子甲基化阳性率分别为 2 6 % (1/ 38) ,5 5 3% (2 1/ 38) ;2例正常肝组织中未发现甲基化 ;6株肝癌细胞系中有 5株发生了hMSH2启动子甲基化 ,而未发现有MLH1启动子甲基化。所有标本中均未发现有hMSH3启动子甲基化。 5 aza 2′ deoxycytidine处理细胞株后 ,可部分或完全逆转hMSH2启动子甲基化 ,各细胞株的mRNA均有不同程度的表达增加。结论 hMSH3基因启动子CpG岛甲基化与HCC的发生发展关系不大。hMSH2基因甲基化与mRNA表达密切相关 ,是基因表达调节的一种重要方式。

NF-κB、MMP-9与肝细胞肝癌浸润转移的实验研究

目的观察高转移性肝癌细胞系HCC9204细胞转染抑制性κB基因(IκB-α)后核因子κB(NF-κB)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的改变以及细胞浸润转移能力的改变。方法采用脂质体法将IκB-α基因转染HCC9204细胞,应用Western-blot及RT-PCR法检测MMP-9和NF-κB的表达;电泳迁移率分析(EMSA)测定NF-κB活性;免疫组化法检NF-κBp65、MMP-9的表达;激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察MMP-9细胞定位以及细胞形态;基底膜侵袭实验检测肿瘤细胞的浸润和转移。结果HCC9204细胞转染PcDNA3-IκB-α后,细胞内NF-κB和MMP-9mRNA表达以及NF-κB活性下降;NF-κB、MMP-9表达具有明显的正相关;MMP-9蛋白表达位置和细胞形态改变;细胞侵袭转移能力明显下降。结论NF-κB表达水平与HCC9204的浸润转移能力有关;NF-κB活性抑制后细胞浸润转移能力下降,MMP-9表达下降可能起主要作用。