CT动脉增强分数、甲胎蛋白异质体3、中性粒细胞与淋巴细胞比值联合检测对肝癌患者介入化疗疗效的评估价值

目的 探讨CT动脉增强分数(AEF)、甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)、中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)联合检测对肝癌患者介入化疗疗效的评估价值。方法 选取94例肝癌介入化疗患者,所有患者均于术前1天、术后30天行CT增强扫描,并检测AFP-L3、中性粒细胞计数和淋巴细胞计数。根据临床疗效将患者分为治疗有效组[完全缓解(CR)+部分缓解(PR)]和治疗无效组[疾病稳定(SD)+疾病进展(PD)],比较两组患者的临床资料,采用Logistic回归模型分析肝癌患者介入化疗疗效的影响因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC),分析AEF、AFP-L3、NLR单独及联合检测对肝癌患者介入化疗疗效的评估价值。结果 94例肝癌患者中,治疗有效组37例(CR 10例,PR 27例),治疗无效组57例(SD 34例,PD 23例)。治疗有效组中肿瘤直径﹤5 cm、肿瘤数目为单发、TNM分期为Ⅱb期的患者比例均高于治疗无效组,差异均有统计学意义(P﹤0.05);治疗有效组患者术后30天AEF、AFP-L3、NLR均明显低于治疗无效组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。多因素Logistic回归分析结果显示,术后30天AEF、AFP-L3、NLR较高均是肝癌患者介入化疗疗效的独立危险因素(P﹤0.05)。ROC曲线显示,AEF、AFP-L3、NLR联合检测评估肝癌患者介入化疗疗效的AUC为0.963,灵敏度为92.98%,均高于各指标单独检测。结论 术后30天AEF、AFP-L3、NLR较高均是肝癌患者介入化疗疗效的独立危险因素,三者联合检测可有效评估肝癌患者介入化疗疗效,为后续治疗提供参考。

ME3对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制研究

目的:分析苹果酸酶3(malic enzyme 3,ME3)在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织以及HCC细胞系中的表达水平,并研究ME3对HCC细胞增殖、迁移和侵袭等方面的影响及其可能机制。方法:使用癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库分析ME3在HCC组织中的表达;使用RT-qPCR和Western blot技术检测HCC细胞系中ME3的mRNA以及蛋白的表达水平;在下调或者上调HCC细胞系中ME3后,借助CCK-8、平板克隆法、Transwell、侵袭实验研究ME3在肝癌细胞增殖、迁移和侵袭方面的作用;运用Western blot检测PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达情况。结果:与癌旁正常组织和正常肝细胞相比,ME3在人类HCC组织和HCC细胞系中表达显著升高,降低ME3表达能减弱HCC细胞的增殖、迁移及侵袭,过表达ME3则会导致相反结果;此外,ME3可以激活PI3K/AKT信号通路。结论:ME3在HCC组织中呈高表达,促进HCC细胞增殖、迁移以及侵袭,并可能通过启动PI3K/AKT信号通路在HCC中发挥其促癌基因的作用。

雷公藤红素通过调控ATF4/caspase-3/GSDME信号通路促进肝癌细胞焦亡

目的探究雷公藤红素(tripterine,TRI)抑制肝癌细胞(hepatocellular carcinoma,HCC)进展的新机制。方法利用不同浓度(0、0.5、2和8μmol·L-1)TRI作用于肝癌细胞,然后利用CCK-8、细胞克隆、Transwell和蛋白免疫印迹等实验方法评估细胞表型和可能机制;再利用siRNA将靶基因GSDME进行干扰,确定GSDME的作用;最后使用移植肿瘤模型验证TRI在体内抑制HCC细胞的生长的机制。结果TRI可抑制HCC细胞增殖、克隆和侵袭,促进细胞焦亡。免疫印迹结果显示,TRI处理后肝细胞癌HepG2或Hepa1-6中GSDME表达均上调,同时cleaved caspase-3和PARP也明显升高。敲除GSDME后可部分逆转TRI诱导的细胞焦亡。同时GSDME敲低后的细胞具有更强的克隆和迁移能力,且与单独的TRI治疗组相比,细胞凋亡率降低。在体内实验中,TRI抑制可HCC肿瘤生长,TRI+siGSDME组小鼠肿瘤生长速度比单独TRI治疗组快。此外,TRI刺激后HepG2和Hepa1-6细胞中p-eIF2a、ATF4均升高。免疫荧光结果显示,TRI刺激后HepG2和Hepa1-6细胞中ATF4阳性细胞数呈剂量依赖性增加。结论TRI抑制肝癌细胞生长和侵袭可能与其调控ATF4/caspase-3/GSDME信号通路促进肝癌细胞焦亡有关。

血清生长分化因子15、细胞因子信号转导抑制因子3水平与原发性肝癌患者接受经导管动脉栓塞化疗预后的关系

目的探究血清生长分化因子15(growth differentiation factor 15,GDF15)、细胞因子信号转导抑制因子3(suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3)水平与原发性肝癌患者接受经导管动脉栓塞化疗(transcatheter arterial chemoembolization,TACE)预后的关系。方法选取89例2018年9月至2020年5月在河北北方学院附属第一医院行TACE的原发性肝癌患者作为研究组,治疗3个周期后评估近期疗效,将研究组分为预后良好组(n=54)、预后不良组(n=35),另选取同期健康体检者89例作为对照组。血清GDF15、SOCS3表达水平用酶联免疫吸附法测定,并进行组间比较;用多因素Logistic回归分析患者接受TACE预后的影响因素;受试者操作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)分析血清GDF15、SOCS3水平对预后的评估价值。结果与对照组相比,研究组血清GDF15水平升高,血清SOCS3水平下降(均P<0.05);与预后良好组相比,预后不良组血清GDF15水平升高,血清SOCS3水平降低(均P<0.05)。血清GDF15为原发性肝癌患者接受TACE预后的独立危险因素,而血清SOCS3为独立保护因素(均P<0.05)。血清GDF15、SOCS3二者联合评估原发性肝癌患者接受TACE预后的ROC曲线的曲线下面积为0.958,优于血清GDF15、SOCS3各自单独检测(Z_(二者联合-GDF15)=2.074、Z_(二者联合-SOCS3)=2.794,P=0.038、P=0.005)。结论血清GDF15表达水平较高和血清SOCS3表达水平较低的原发性肝癌患者接受TACE预后较差,血清GDF15、SOCS3为原发性肝癌患者接受TACE预后的影响因素,对患者预后情况有较好的评估价值。

T细胞免疫球蛋白黏蛋白3在肝癌中的研究进展

肝癌是常见的恶性肿瘤之一,具有病死率高、侵袭转移能力强的特点。T细胞免疫球蛋白黏蛋白(TIM)3是TIM基因家族中的一员,其与机体免疫反应和肿瘤进展之间的关系是临床研究的热点。TIM3与肝癌的发生、发展有关,其可能通过免疫抑制、促进血管生成等方式来促进肝癌的进展,对于肝癌的治疗具有重要的价值和广阔的应用前景。因此,本文对TIM3在肝癌中的研究进展进行综述,以期为TIM3在肝癌中的深入研究提供参考依据。

骨桥蛋白通过LGALS3BP调控PI3K/AKT通路促进肝癌细胞迁移

目的探讨骨桥蛋白(OPN)通过半乳糖凝集素3结合蛋白(LGALS3BP)促进肝癌细胞迁移的作用及机制。方法体外培养人肝癌细胞系SMMC-7721、稳定转染空真核表达载体的人肝癌细胞系SMMC-P及稳定转染OPN基因的人肝癌细胞系SMMC-OPN。RT-qPCR检测细胞中OPN及LGALS3BP mRNA表达情况,Western blot检测细胞中OPN、LGALS3BP和PI3K/AKT通路蛋白表达水平,细胞划痕实验检测细胞迁移能力。SMMC-OPN细胞中分别转染靶向LGALS3BP的小干扰RNA(si-LGALS3BP)及阴性对照(si-NC)后,检测细胞迁移能力变化和PI3K/AKT通路蛋白相对表达水平变化。结果相较于亲本细胞SMMC-7721和转染空载体的细胞SMMC-P,高表达OPN的细胞SMMC-OPN迁移能力明显增强,而且细胞中LGALS3BP mRNA及蛋白表达水平显著上调,同时p-PI3K/PI3K及p-AKT/AKT蛋白相对表达量均显著升高。沉默LGALS3BP表达后,SMMC-OPN细胞的迁移能力受到明显抑制,同时p-PI3K/PI3K及p-AKT/AKT蛋白相对表达水平均显著降低。结论OPN可以通过上调LGALS3BP的表达激活PI3K/AKT通路,从而促进肝癌细胞迁移。

美洲大蠊提取物CⅡ-3对肝癌TAE术后细胞黏附分子水平的影响及其对肝脏的保护作用

目的 探讨美洲大蠊提取物CⅡ-3对肝癌经导管动脉栓塞(transcatheter arterial embolization, TAE)术后癌旁肝组织细胞黏附分子水平的影响及其对肝脏的保护作用。方法 东南大学荷瘤兔2只,新西兰大白兔50只。开腹瘤粒注射法建立兔VX2肝癌模型,影像学确认是否造模成功并评估肿瘤种植情况。将成功建模的45只实验兔随机分为3组,每组15只。对照组不做处理,TAE组用碘化油栓塞肿瘤供血动脉,CⅡ-3组于TAE术前连续3 d耳缘静脉注射CⅡ-3(16 mg/kg)。化学比色法检测各组实验兔术前及术后血清ALT及AST。免疫组化法检测各组癌旁肝组织PPAR-α、NF-κB表达水平。ELISA法检测各组癌旁肝组织细胞间黏附分子-1(ICAM-1)及血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)水平。RTPCR检测各组癌旁肝组织PPAR-α、NF-κB、ICAM-1、VCAM-1 mRNA表达水平。结果术前对照组、TAE组、CⅡ-3组ALT水平分别为(34.49±1.33)、(34.01±1.21)、(34.06±1.23) U/L,AST水平分别为(38.44±1.41)、(38.45±1.47)、(38.42±1.38) U/L,差异无统计学意义(P>0.05);术后对照组、TAE组、CⅡ-3组ALT水平分别为(35.61±1.56)、(118.67±3.39)、(87.24±3.67) U/L,AST水平分别为(41.03±1.83)、(220.60±3.00)、(104.46±2.66) U/L;与对照组比较,TAE组、CⅡ-3组ALT及AST水平明显上升,但CⅡ-3组ALT及AST水平低于TAE组,差异均有统计学意义(P<0.01)。对照组、TAE组、CⅡ-3组ICAM-1水平分别为(1.74±0.13)、(3.43±0.19)、(1.81±0.13) ng/L;VCAM-1水平分别为(1.66±0.05)、(2.18±0.06)、(1.67±0.06) ng/L。对照组、TAE组、CⅡ-3组PPAR-α阳性分别为4、3、10只,NF-κB阳性分别为2、11、3只,与对照组、CⅡ-3组比较,TAE组NF-κB阳性率、NF-κB mRNA水平和ICAM-1、VCAM-1蛋白及mRNA水平明显升高;与对照组、TAE组比较,CⅡ-3组PPAR-α蛋白及mRNA水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 CⅡ-3可通过拮抗NF-kB的表达,降低ICAM-1、VCAM-1水平,达到减轻炎症反应,降低TAE术后肝损伤的作用。

乙型肝炎病毒相关性肝细胞肝癌患者血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达及临床意义

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)相关性肝细胞肝癌(HCC)患者血清微小核糖核酸(miR)-125a-5p、miR-127-3p表达及临床意义。方法选取2018年1月至2020年10月该院收治的90例HBV相关性HCC患者作为HBV相关性HCC组。另选取同期该院的90例体检健康者作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达。分析miR-125a-5p、miR-127-3p表达与HBV相关性HCC患者病理特征的关系。根据HBV相关性HCC患者血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达的平均值分为高、低表达组,通过Kaplan-Meier法绘制各组不同的生存曲线。通过Cox回归分析影响HBV相关性HCC患者预后的因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达对HBV相关性HCC患者死亡的预测价值。结果HBV相关性HCC组血清miR-125a-5p、miR-127-3p相对表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。不同肿瘤最大径、分化程度、脉管侵犯、TNM分期、淋巴结转移的HBV相关性HCC患者血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达比较差异有统计学意义(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析显示,miR-125a-5p高表达组3年总生存率(64.58%)高于miR-125a-5p低表达组(38.10%),miR-127-3p高表达组3年总生存率(66.00%)高于miR-127-3p低表达组(35.00%),差异有统计学意义(χ^(2)=7.770、9.507,P=0.005、0.002)。HBV相关性HCC患者死亡的独立危险因素为肿瘤最大径≥5 cm、低分化、有脉管侵犯、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移,其独立保护因素为miR-125a-5p、miR-127-3p升高。ROC曲线分析结果显示,血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达联合预测的曲线下面积(AUC)为0.907,高于血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达单独预测的AUC(0.790、0.787),差异有统计学意义(Z=2.691、3.152,P=0.007、0.002)。结论HBV相关性HCC患者血清miR-125a-5p、miR-127-3p低表达,与肿瘤最大径、分化程度、脉管侵犯、TNM分期和预后有关,血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达联合对HBV相关性HCC患者预后有较高的预测价值。

芒柄花黄素联合下调miR-4326对肝癌细胞HCCLM3生长和侵袭的影响

目的研究芒柄花黄素联合下调miR-4326对肝癌细胞HCCLM3生长和侵袭的影响和机制。方法RT-qPCR检测各种肝癌细胞中miR-4326表达变化;MTT检测芒柄花黄素对HCCLM3细胞增殖影响;在HCCLM3细胞中转染miR-4326抑制物,并给予芒柄花黄素处理,MTT检测细胞增殖,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移,Western blot检测E-cadherin、Vimentin、β-catenin、c-Myc蛋白表达;用Wnt/β-catenin信号通路激活剂处理转染miR-4326抑制物后的HCCLM3细胞,检测细胞增殖、迁移、侵袭变化。结果miR-4326在HCCLM3肝癌细胞中表达较高;芒柄花黄素处理后的HCCLM3细胞增殖能力降低;转染miR-4326抑制物和芒柄花黄素处理能够协同抑制肝癌细胞增殖、侵袭和迁移,提高细胞中E-cadherin蛋白表达,降低细胞中Vimentin、β-catenin、c-Myc蛋白表达;Wnt/β-catenin信号通路激活剂可以逆转芒柄花黄素联合下调miR-4326对HCCLM3细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用。结论芒柄花黄素联合下调miR-4326抑制肝癌细胞HCCLM3生长和侵袭,作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路激活有关。

磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸肌醇-3-激酶对原发性肝癌TACE治疗反应的预测作用

目的探讨经导管动脉化疗栓塞术(TACE)治疗的原发性肝癌患者磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸肌醇-3-激酶(PIK3CA)的表达及其与TACE治疗反应的相关性。方法从TCGA数据库下载425例肝癌患者PIK3CA的表达量。利用GSE104580数据集内TACE治疗敏感和不敏感患者癌组织PIK3CA表达量,分析两组基因表达差异,绘制ROC曲线分析TACE治疗敏感性与PIK3CA表达的相关性。从GSE14520数据集下载具有完整临床资料、接受TACE治疗的肝细胞癌27例,基于PIK3CA的表达量最佳截断值,分成PIK3CA高表达组和PIK3CA低表达组,比较两组患者的临床资料。应用“survminer”R包进行Kaplan-Meier生存分析。结果肝癌组织PIK3CA表达明显高于癌旁组织;TACE不敏感患者癌组织PIK3CA表达量高于TACE敏感患者,TACE治疗敏感性与PIK3CA表达相关性的ROC曲线下面积(AUC)为0.645;生存分析显示PIK3CA表达量越低,患者生存时间越长,且1、2、3年的AUC分别为0.765、0.713、0.633。结论PIK3CA对于肝细胞癌有一定的诊断价值,有可能作为TACE治疗敏感性的预测指标。

葡萄籽提取物原花青素通过LncRNA NBR2/miR-650调节EMT抑制肝癌细胞Hep3B增殖、迁移和侵袭的分子机制

目的探讨葡萄籽提取物原花青素是否通过长链非编码RNA(LncRNA)NBR2/微小RNA(miR)-650并调节上皮间充质转化(EMT)来影响肝癌细胞Hep3B的增殖、迁移和侵袭。方法将肝癌细胞Hep3B分为NC组(未处理),低、中、高剂量组(给予25、50、100μg/ml葡萄籽提取物原花青素),si-NC组,si-LncRNA NBR2组,si-NC+高剂量组、si-LncRNA NBR2+高剂量组,anti-miR-NC+si-LncRNA NBR2+高剂量组,anti-miR-650+si-LncRNA NBR2+高剂量组。采用Western印迹检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9、EMT过程E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)蛋白表达,细胞计数试剂盒(CCK)-8、Transwell法和定量RT-PCR(qRT-PCR)分析细胞增殖、迁移、侵袭与LncRNA NBR2、miR-650的表达。双荧光素酶活性检测LncRNA NBR2和miR-650的靶向结合。结果低、中、高剂量组葡萄籽提取物原花青素作用的肝癌细胞Hep3B CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表达量、增殖能力、迁移数量、侵袭数量、miR-650表达量均低于NC组,LncRNA NBR2表达量高于NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。高剂量组葡萄籽提取物原花青素作用的肝癌细胞Hep3B细胞中E-Cadherin蛋白表达量高于NC组,N-Cadherin、Vimentin蛋白表达量低于NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。si-LncRNA NBR2组的肝癌细胞Hep3B细胞中CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表达量、增殖能力、迁移和侵袭数量均比si-NC组高,差异有统计学意义(P<0.05)。si-LncRNA NBR2+高剂量组肝癌细胞Hep3B细胞中CyclinD1、MMP2、MMP9、N-Cadherin、Vimentin蛋白表达量、增殖能力、迁移和侵袭数量均高于si-NC+高剂量组,E-Cadherin蛋白表达量低于si-NC+高剂量组,差异有统计学意义(P<0.05)。LncRNA NBR2靶向调控miR-650的表达。anti-miR-650+si-LncRNA NBR2+高剂量组肝癌细胞Hep3B CyclinD1、MMP2、MMP9、N-Cadherin、Vimentin蛋白、LncRNA NBR2表达量及增殖能力、迁移和侵袭数量均低于anti-miR-NC+si-LncRNA NBR2+高剂量组,E-Cadherin蛋白表达量高于anti-miR-NC+si-LncRNA NBR2+高剂量组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论葡萄籽提取物原花青素通过上调LncRNANBR2靶向下调miR-650并调节EMT,来抑制肝癌细胞Hep3B的增殖、迁移和侵袭。

微小RNA-127-3p在乙型肝炎病毒相关性肝癌中的表达意义及对HBV阳性肝癌细胞增殖迁移侵袭的影响

目的:探讨微小RNA-127-3p(miR-127-3p)在乙型肝炎病毒(HBV)相关性肝癌中的表达意义及其对HBV阳性肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(RTFQ-PCR)检测2018年12月至2020年12月在医院手术切除的64例HBV相关性肝癌患者肝癌组织和癌旁组织中miR-127-3p表达量。将对数生长期肝癌HepG2细胞分别以10、20、50 pmol的miR-127-3p mimic进行转染,同时设置对照组(以0 pmol mimic进行转染),培养48 h后采用RTFQ-PCR检测各转染组细胞中miR-127-3p表达量,MTT法检测各转染组细胞增殖情况,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果:肝癌组织miR-127-3p表达量(0.26±0.03)低于癌旁组织(0.53±0.06)(P<0.05)。miR-127-3p mimic转染组(10、20、50 pmol)与对照组肝癌HepG2细胞中miR-127-3p表达量分别为(0.87±0.09)、(1.23±0.13)、(1.51±0.16)、(0.28±0.04),总体比较差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,miR-127-3p mimic(10、20、50 pmol)转染组miR-127-3p表达量更高(P<0.05);miR-127-3p mimic转染组中miR-127-3p表达量随转染浓度的升高而升高(P<0.05)。miR-127-3p mimic转染组(10、20、50 pmol)与对照组肝癌HepG2细胞增殖率分别为[(51.58±5.24)%、(25.42±2.55)%、(16.23±1.65)%、(78.67±7.88)%],细胞迁移距离分别为[(28.26±2.84)mm、(23.17±2.25)mm、(18.32±1.83)mm、(33.87±3.41)mm],穿膜细胞数分别为[(122.54±12.26)个、(101.26±10.45)个、(46.15±4.78)个、(131.23±13.24)个],总体比较差异均有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,miR-127-3p mimic(10、20、50 pmol)转染组细胞增殖率更低,细胞迁移距离更短,穿膜细胞数更少(P<0.05);miR-127-3p mimic转染组细胞增殖率随转染浓度的升高而降低,细胞迁移距离随转染浓度的升高而变短,穿膜细胞数随转染浓度的升高而减少(P<0.05)。结论:miR-127-3p在HBV相关性肝癌患者中呈低表达,其可抑制HBV阳性肝癌HepG2细胞增殖、迁移和侵袭。

ART调节PI3K/AKT通路对肝癌细胞增殖及迁移的影响

目的探究青蒿琥酯(artesunate,ART)调节磷脂酞肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路对肝癌细胞增殖及迁移的影响。方法体外培养HepG2细胞,分为对照组以及不同浓度(30μg/mL、60μg/mL和120μg/mL)ART组。比较不同组别HepG2细胞的细胞增殖率、细胞迁移数量、侵袭数量以及Ki-67蛋白、凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、Caspase-3)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9和PI3K/AKT通路相关蛋白[磷脂酞肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化的磷脂酞肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化的蛋白酶B(p-AKT)]的表达水平。结果不同浓度ART作用于HepG2细胞后,30μg/mL组、60μg/mL组和120μg/mL组的细胞增殖率分别为(81.73±8.39)%、(65.26±6.48)%、(44.27±4.66)%,Ki-67蛋白表达分别为0.76±0.11、0.43±0.09、0.29±0.04,分别与对照组的(100.00±10.51)%、0.98±0.16比较均明显降低,且ART浓度越高,细胞增殖率和Ki-67蛋白表达越低,差异均有统计学意义(P<0.05);不同浓度ART作用于HepG2细胞后,30μg/mL组、60μg/mL组和120μg/mL组的细胞凋亡率分别为(24.84±4.91)%、(36.02±7.35)%、(50.27±10.02)%,Bax蛋白表达分别为0.26±0.05、0.39±0.06、0.58±0.08,Bcl-2蛋白表达分别为0.62±0.07、0.48±0.06、0.33±0.04,Caspase-3蛋白表达分别为10.26±0.68、12.47±0.77、14.96±0.81,分别与对照组的(5.75±1.63)%、0.17±0.03、0.83±0.09、8.73±0.46比较,细胞凋亡率、Bax和Caspase-3蛋白表达明显升高,Bcl-2表达明显降低,且ART浓度越高,细胞凋亡率、Bax和Caspase-3蛋白表达越高,Bcl-2表达越低,差异均有统计学意义(P<0.05);不同浓度ART作用于HepG2细胞后,30μg/mL组、60μg/mL组和120μg/mL组的细胞迁移数量分别为(189.11±16.73)个、(162.29±15.03)个、(134.26±13.26)个,细胞侵袭数量分别为(144.13±13.46)个、(121.61±10.23)个、(90.26±8.71)个,MMP2蛋白表达分别为0.46±0.08、0.38±0.06、0.29±0.05,MMP9蛋白表达分别为0.41±0.09、0.33±0.06、0.24±0.03,分别与对照组的(234.28±20.64)个、(187.55±16.31)个、0.83±0.19、0.74±0.16比较均明显降低,且ART浓度越高,细胞迁移数量、侵袭数量和MMP2、MMP9蛋白表达越低,差异均有统计学意义(P<0.05);不同浓度ART作用于HepG2细胞后,30μg/mL组、60μg/mL组和120μg/mL组的PI3K蛋白表达分别为0.51±0.13、0.36±0.09、0.19±0.05,p-P13K蛋白表达分别为0.54±0.12、0.41±0.08、0.22±0.03,p-AKT蛋白表达分别为0.56±0.11、0.38±0.09、0.21±0.04,分别与对照组的0.85±0.17、0.79±0.16、0.75±0.19比较均明显降低,且ART浓度越高,PI3K、p-P13K和p-AKT蛋白表达越低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论ART在肝癌HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭过程中能够发挥一定的抑制作用,同时可诱导HepG2细胞凋亡,其机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路的活性有关。

长链非编码RNA SBF2-AS1通过miR-372-3p/CDK6轴调控肝癌细胞侵袭及增殖

目的探讨长链非编码RNA SET结合因子2反义RNA1(lnc RNA SBF2-AS1)调控mi R-372-3p/细胞分裂蛋白激酶6(CDK6)轴对肝癌细胞侵袭及增殖的影响。方法以Bel7402和SK-hep1细胞为研究对象,上调或下调SBF2-AS1、miR-372-3p及CDK6表达水平,实时荧光定量PCR及Western blot检测细胞中miR-372-3p及CDK6表达水平。双荧光素酶报告基因实验分别验证SBF2-AS1和miR-372-3p、miR-372-3p和CDK6靶向关系。CCK-8、集落形成实验、Transwell、细胞周期实验及流式细胞术分析细胞增殖、集落形成、迁移/侵袭能力、细胞周期活动及凋亡。结果SBF2-AS1在肝癌细胞中高表达(P<0.05)。敲降SBF2-AS1后,Bel7402和SK-hep1细胞侵袭、增殖能力降低(P<0.05)。敲降miR-372-3p后,Bel7402细胞侵袭、增殖能力升高,同时敲降SBF2-AS1后,可反转上述效应(P<0.05)。miR-372-3p靶向CDK6并抑制后者的表达,过表达SFB2-AS1,可反转上述效应(P<0.05)。过表达CDK6,可以逆转过表达miR-372-3p对Bel7402细胞侵袭及增殖的抑制。结论lncRNA SBF2-AS1通过miR-372-3p正向调控CDK6的表达,改变肝癌细胞的周期活动,影响肝癌细胞的增殖、侵袭能力。

STAT3抑制剂S3I-201对人肝癌BEL-7402细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的 研究STAT3小分子抑制剂S3I-201对人肝癌细胞系BEL-7402增殖、凋亡与细胞周期的影响和初步的作用机制。方法 分别采用细胞活性检测试剂盒cell couting kit-8(CCK-8)和EdU细胞增殖法检测S3I-201对人肝癌细胞BEL-7402细胞增殖的影响,应用流式细胞术分析S3I-201对BEL-7402的细胞凋亡和周期的影响,通过Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果 CCK-8及EdU结果显示,S3I-201能抑制BEL-7402细胞的生长和增殖(P<0.05),使BEL-7402细胞阻滞于S期,具有诱导细胞凋亡的作用,上调Bax的表达,下调Bcl-2的表达(P<0.05)。结论 STAT3小分子抑制剂S3I-201通过促进BEL-7402凋亡、上调促凋亡蛋白Bax、下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,并将BEL-7402阻滞于S期而发挥抗肿瘤效应。

晚期肝癌患者信号转导子和激活子3、微小核糖核苷酸-200表达与程序性细胞死亡配体1关联性及在程序性细胞死亡配体1抑制剂抵抗中的作用

目的:探讨肝癌患者信号转导子和激活子3(STAT3)、微小核糖核苷酸-200(miR-200)表达与程序性细胞死亡配体1(PD-L1)关联性及在PD-L1抑制剂抵抗中的作用。方法:根据入组标准选取2019年2月至2022年1月承德市中心医院收治的108例晚期肝癌患者,根据治疗反应性分为抵抗组75例、非抵抗组33例。比较两组肝癌组织STAT3 mRNA、miR-200、PD-L1表达情况,并比较不同PD-L1表达水平患者肝癌组织STAT3 mRNA、miR-200表达情况。以Pearson法分析STAT3 mRNA、miR-200的关系及与PD-L1关系。以二元Logistic回归分析PD-L1抑制剂抵抗的相关影响因素。使用交互作用系数γ分析STAT3 mRNA、miR-200的交互作用是否存在及其作用类型。结果:抵抗组肝癌组织STAT3 mRNA、PD-L1表达高于非抵抗组,miR-200表达低于非抵抗组,差异均有统计学意义(均P<0.05);PD-L1强表达患者STAT3mRNA高于PD-L1低表达患者,而miR-200低于PD-L1低表达患者,差异均有统计学意义(均P<0.05)。STAT3 mRNA与miR-200呈负相关(P<0.05),与PD-L1呈正相关(P<0.05);miR-200与PD-L1呈负相关(P<0.05)。STAT3 mRNA、PD-L1是PD-L1抑制剂抵抗的相关危险因素,miR-200是PD-L1抑制剂抵抗的相关保护因素(均P<0.05)。单独STAT3 mRNA升高所致OR=21.000,单独miR-200降低所致OR=7.875,两者共存时所致OR=468.00;交互作用OR值大于单独STAT3 mRNA升高所致的OR值与单独miR-200降低所致OR值的乘积。STAT3 mRNA和miR-200对PD-L1抑制剂抵抗影响的模型为超相乘模型,γ=2.019>1,说明两者具有正向交互作用。结论:肝癌患者中STAT3表达升高,与PD-L1呈正相关;miR-200表达降低,与PD-L1呈负相关。STAT3、miR-200表达水平与PD-L1抑制剂抵抗密切相关,具有作为治疗靶点的潜在价值,并能为PD-L1抑制剂的精准化、个性化应用提供参考。

高转移潜能肝癌HCCLM3细胞中侧群细胞的分离及其干细胞特性鉴定

目的:检测高转移潜能肝癌HCCLM3细胞株中侧群(side population,SP)细胞比例,分选SP细胞并探讨其生物学特性。方法:4种肝癌细胞株的转移潜能大小依次为HCCLM3>MHCC97H>MHCC97L>Huh7,分别予以荧光染料Hoechst33342染色,以加入维拉帕米的拮抗组为对照,流式细胞术检测SP细胞比例;从HCCLM3细胞中分选SP细胞和主群(main population,MP)细胞,采用悬浮球培养、Transwell侵袭实验及裸鼠成瘤实验判断HCCLM3 SP细胞是否具备肿瘤干细胞生物学特性;RT-PCR检测SP及MP细胞中干细胞相关基因的表达。结果:HCCLM3细胞中SP细胞比例为(16.9±1.8)%,显著多于MHCC97H、MHCC97L、Huh7中SP细胞比例[(8.4±0.7)%、(4.6±0.5)%、(1.0±0.2)%,均P<0.05]。HCCLM3细胞中,SP细胞悬浮球形成明显高于MP细胞[(25.3±5.1)%vs(11.2±2.6)%,P<0.05],SP细胞的侵袭能力显著高于MP细胞(P<0.05),SP细胞的裸鼠皮下成瘤能力也明显高于MP细胞。HCCLM3细胞的SP细胞中干细胞相关基因ABCG2、CD13、CD44、Nanog、Sox2及Klf4 mRNA平均表达水平分别是MP细胞的5.64、2.26、2.10、3.78、2.37、2.92倍(均P<0.05)。结论:肝癌HCCLM3细胞的SP细胞中富集了肝癌干细胞,这可能与其较高的转移潜能有关。

猫爪草皂苷对高转移肝癌细胞株HCCLM3及MHCC97-H增殖的影响

目的观察猫爪草皂苷(RRTS)对人高转移肝癌细胞株HCCLM3、MHCC97-H增殖的影响。方法将对数生长期HCCLM3、MHCC97-H细胞分为两组。RRTS组分别采用50、100、200、400μg/m L浓度的RRTS干预,每浓度5个复孔;5-FU组采用50μg/m L的5-FU干预,作用后72 h采用MTT法测定两组细胞增殖情况,倒置显微镜下观察细胞形态变化。结果 RRTS组各浓度对HCCLM3、MHCC97-H肿瘤细胞株的生长均有不同程度的抑制作用,随RRTS浓度增加,抑制作用明显增强,呈量—效依赖关系(P均<0.05);400μg/m L对两种细胞的生长抑制率与5-FU组比较差异无统计学意义。倒置显微镜下观察,两种细胞株经RRTS处理后,细胞密度降低,细胞相互分离,贴壁脱落,出现片状无细胞生长区,并见细胞碎片,细胞变圆,体积减小,核固缩,核颜色加深,折光性增强,随着RRTS剂量增加,这种变化更加明显。400μg/m L浓度的RRTS对肿瘤细胞的生长抑制作用与5-FU组相似。结论RRTS对HCCLM3、MHCC97-H细胞生长均有抑制作用。

α干扰素对人高转移肝癌细胞系HCCLM3血管形成因子表达的影响

目的:研究IFN-a对高转移潜能的人肝癌细胞系HCCLM3 细胞血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶- 9(MMP-9)和白介素-8(IL-8)表达的影响,探索IFN-a抗肿瘤血管形成的机制. 方法:将HCCLM3细胞在高糖DMEM培养液(Dulbecco’S modified Eagle medium)和加入了不同剂量(30,300或3 000 kU/L)IFN-α的DMEM培养液中孵育72 h.ELISA法检测IFN-α干预组与对照组(未加入IFN-α)中VEGF, bFGF,MMP-2,MMP-9和IL-8的表达情况. 结果:HCCLM3细胞空白对照组中VEGF,MMP-2, bFGF和IL-8的表达浓度分别为2556±122.6,4400±1000, 28.05±5.1和1 160±69.4 ng/L.同时IFN-α为300 kU/L时, VEGF,MMP-2,bFGF和IL-8的浓度分别为2 476.5±125.7 (P<0.05),2 400±600(P<0.01),25.8±1.6和1 0791±5 ng/L; IFN-α为3 000 kU/L时,VEGF,MMP-2,bFGF和IL- 8的浓度分别为2 289.5+119.5(P<0.01),2 000±500 (P<0.01),25.1±2.9和1 087.9±83.9 ng/L.各组中均未检测到MMP-9的表达. 结论:IFN-α对HCCLM3细胞VEGF和MMP-2蛋白的表达均具有明显的抑制作用,并呈剂量依赖性.bFGF,IL- 8和MMP-9的表达浓度在IFN-α各剂量组与对照组间无显著性差别.IFN-α对肝癌细胞中VEGF租MMP-2表达水平的下调在其抗肝癌血管形成机制中发挥重要作用.

let-7a调控自噬对缺氧状态下原发性肝癌HCCLM3细胞增殖的影响

目的探讨let-7a调控自噬对缺氧状态下原发性肝癌HCCLM3细胞增殖的影响。方法将HCCLM3细胞分为常氧组、缺氧组和缺氧let-7a组,分别给予不同的处理。各组设6个平行孔,培养72 h。采用吖啶橙染液法测定HCCLM3细胞自噬率,采用MTT法检测HCCLM3细胞活力,使用流式细胞仪分析HCCLM3细胞周期G1,采用酶联免疫吸附法测定培养上清let-7a、细胞周期D1蛋白(cyc D1)和血管内皮生长因子(VEGF)水平。结果缺氧let-7a组细胞存活率为(49.7±9.5)%,显著低于常氧组或缺氧组的(100.0±0.0)%或(119.1±13.1)%(P<0.05),缺氧组细胞存活率显著高于常氧组(P<0.05);缺氧let-7a组细胞周期G1期和细胞自噬率分别为(89.6±16.1)%和(49.3±7.4)%,显著高于常氧组或缺氧组的(56.3±11.0)%和(13.2±8.1)%或(69.7±14.1)%和(23.5±5.5)%(P<0.05),缺氧组细胞周期G1期和自噬率显著高于常氧组(P<0.05);缺氧let-7a组细胞let-7a蛋白水平为(96.1±9.3)μmol/L,显著高于常氧组或缺氧组的(33.4±7.1)μmol/L或(65.3±5.2)μmol/L(P<0.05),cyc D1和VEGF水平分别为(72.3±8.8)μmol/L和(56.3±6.3)μmol/L,显著低于常氧组或缺氧组的(124.1±7.2)μmol/L和(114.1±5.2)μmol/L或(98.2±6.7)μmol/L和(85.2±8.1)μmol/L(P<0.05),缺氧组let-7a蛋白显著低于常氧组(P<0.05),cyc D1和VEGF显著高于常氧组(P<0.05)。结论上调let-7a在肝癌HCCLM3细胞的表达能诱发细胞自噬,使得细胞在G1期往S期的分化过程发生障碍,抑制细胞在缺氧环境中的增殖,其机制可能与细胞CYC D1和VEGF表达下调有关。