重组人血管内皮抑素体外对肝癌HCCLM6细胞转移侵袭的影响

目的研究重组人血管内皮抑素在体外对人肝癌HCCLM6细胞粘附、迁移及侵袭的抑制作用。方法分别以25、50、100、200、400μg/ml的重组人血管内皮抑素在体外处理HCCLM6细胞,采用MTT法检测药物对细胞增殖的影响,利用transwell小室及matrigel胶体外检测药物对细胞迁移、侵袭及粘附的影响。结果重组人血管内皮抑素作用HCCLM6细胞72h后对细胞增殖存在一定的抑制作用;重组人血管内皮抑素可明显抑制HCCLM6细胞与matrigel的黏附、对人工基底膜的侵袭力和迁移力,且抑制作用均呈剂量依赖性。结论重组人血管内皮抑素具有直接抑制人肝癌细胞体外侵袭转移和增殖作用,其机制有待进一步探讨。

不同RNA干扰载体对肝癌细胞株HCCLM6的影响

目的:筛选高效而安全的HCCLM6细胞RNA干扰载体。方法:以慢病毒、脂质体及磁纳米颗粒为载体,将非特异性shRNA质粒导入HCCLM6中。用流式细胞仪检测3种转染载体的转染效率,MTT法检测各转染组细胞及野生株生长曲线的变化。结果:3种载体中,慢病毒的转染效率最高(90%),脂质体次之(60%),磁纳米颗粒最低(30%)。慢病毒及脂质体转染后的细胞生长速度较野生型细胞慢,生长曲线较低,但差异无统计学意义(P>0.05)。磁纳米颗粒转染组细胞生长与野生型细胞无显著性差异(P>0.05)。结论:慢病毒是HCCLM6细胞株高效而相对安全的转染载体,但磁纳米颗粒转染方法有待于进一步优化。

脐血移植后SCID鼠的免疫功能重建及抗人肝癌作用的初步研究

目的证实脐血造血干/祖细胞移植重建SCID鼠的免疫功能对人肝癌有抑制及杀伤作用。方法首先进行人肝癌高转移细胞株HCCLM6细胞培养,然后将HCCLM6细胞株分别在脐血移植免疫功能重建组(A组)及未移植脐血造血干/祖细胞组(B组)建立SCID鼠皮下荷瘤模型。接种肿瘤后5周处死,分别进行以下检测:(1)比较A、B两组间肿瘤生长情况的差异;(2)常规病理学检查:比较A、B两组移植瘤状况,并观察有无肿瘤转移;(3)免疫组化检查:观察肿瘤组织中人源CD3+、CD8+细胞对肿瘤组织的杀伤力;(4)细胞毒试验:A、B两组动物脾脏细胞与HCCLM6细胞体外混合培养,采用MTT法观察对肿瘤细胞的杀伤作用。结果 (1)HCCLM6细胞株接种于A组、B组SCID小鼠皮下均可成瘤,成瘤率为100%,成瘤潜伏期分别为(9.83±1.47)d、(5.16±1.17)d,二组比较差异有统计学意义(P<0.01);接种后5周移植瘤体积分别为(539.22±94.08)mm3、(1 126.17±154.75)mm3,二组比较差异有统计学意义(P<0.01)。(2)病理学检查可见:A组肿瘤坏死明显,未见远处转移;B组坏死程度明显较轻,可见肺转移。(3)免疫组织化学检查:A组肿瘤组织中可见大量人源CD3+、CD8+细胞浸润,坏死组织周围更加明显;B组移植瘤内亦有肿瘤坏死,但未见人源淋巴细胞。(4)细胞毒试验表明:A组脾脏细胞对HCCLM6细胞的杀伤作用明显,在效靶比例为120∶1时,特异性杀伤率为(7.41±1.07)%;B组脾脏细胞对肝癌细胞的杀伤率为(3.97±0.27)%,二组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论HCCLM6是一个活力强、代谢活跃的肿瘤细胞亚群。人源脐血干细胞在SCID鼠体内重建免疫后可发挥对HCCLM6细胞的杀伤作用,对肝癌的生长有抑制作用。脐血干细胞移植有可能成为肝癌治疗的一种新方法,其应用前景值得进一步研究探讨。

荷瘤SCID小鼠脐血移植后免疫功能变化的研究

目的探讨脐血造血干/祖细胞移植重建荷瘤SCID鼠的免疫学机制是否为负荷人肿瘤激活人源性免疫功能。方法首先培养人肝癌高转移细胞株HCCLM6细胞,然后以HCCLM6细胞株在脐血移植免疫功能重建组(A组)SCID鼠皮下建立荷瘤模型,脐血移植免疫功能重建B组未荷瘤作为对照。实验动物于5周后处死,分别进行以下检测:(1)比较A、B两组之间免疫功能指标变化情况,即用流式细胞仪分析小鼠外周血有核细胞中人淋巴细胞比例,ELISA法测定人IgG含量。(2)比较B组第6周与第11周时免疫功能指标变化情况。结果 (1)HCCLM6细胞株接种于A组SCID小鼠皮下成瘤率为100%,成瘤潜伏期为(9.83±1.47)d;接种后5周移植瘤体积为(539.22±94.08)mm3。5周后SCID小鼠外周血有核细胞中人淋巴细胞比例CD3+、CD4+/CD8+分别为:A组(1.50±0.40)%、(2.17±0.88);B组(2.17±0.50)%、(1.19±0.66),两组比较,PCD3=0.04、PCD4/CD8=0.08。人IgG含量分别为(48.57±4.51)μg/mL、(61.68±5.66)μg/mL,两组比较P<0.01,有统计学差异。(2)B组中人淋巴细胞比例CD3+、CD4+/CD8+及人IgG含量第6周与第11周时分别为(1.60±0.32)%、(2.36±0.74)、(50.13±1.27)μg/mL与(1.50±0.40)%、(2.17±0.88)、(48.57±4.51)μg/mL,可以看出T淋巴细胞在第6周时已达高峰并可维持到第11周尚无明显变化,而IgG含量虽有所下降,但并无统计学差异(P>0.05)。结论肿瘤负荷状态会对免疫功能产生影响,即重建免疫的SCID鼠负荷人肿瘤激活人源性免疫从而增强其免疫功能,因而脐血干细胞移植有可能成为肝癌治疗的一种新方法。