HCCR-2基因的克隆及原核表达

目的：克隆HCCR-2基因、原核表达并鉴定。方法：从培养的人骨肉瘤细胞SOSP-9607中提取总RNA，经RT—PCR获得HCCR-2基因。将该基因克隆到pGEM—T—Easy克隆载体中，测序、鉴定。将测序正确的HCCR-2基因亚克隆到pET-28a（＋）表达载体中，构建HCCR-2表达载体，IPTG诱导表达1～5h，做SDS—PAGE分析，鉴定HCCR-2蛋白的表达。结果：DNA测序证明，获得了HCCR-2基因，其序列与GenBank中报道序列完全一致。SDS—PAGE分析表明，HCCR-2蛋白获得高效表达，其相对分子质量为39kDa，表达量约占菌体总蛋白的25％。结论：HCCR-2基因的克隆和表达均获得了成功，为进一步探讨HCCR基因在骨肉瘤诊治中应用奠定了基础。