人子宫颈癌基因HCCR-2真核表达载体的构建及鉴定

目的:克隆人子宫癌基因HCCR-2并构建其真核表达载体,为研究其在人胃癌细胞中与P53的相互作用关系奠定基础.方法:从人肝癌细胞株HepG2提取RNA,利用RT-PCR方法,先克隆出一包括HCCR-2编码区的长约1kb的片段,并将其与T载体连接并转化,测序证实无误后,以HCCR-2/T载体为模板,再通过PCR克隆出HCCR-2的编码区序列,将其连接到pIRES2-EGFP真核表达载体,并通过测序获得证实.结果:RT-PCR扩增出一长约1kb的HCCR-2片段,PCR扩增出约0.9kb大小的目的片段,HCCR-2/T,pIRES2-EGFP/HCCR-2(+)DNA测序均表明编码序列及读框完全正确.结论:成功构建HCCR-2真核表达载体pIRES2-EGFP/HCCR-2(+),为进一步研究其致癌机制打下基础.