hCLP46基因在不同侵袭转移潜能乳腺癌细胞表达中的差异及其意义

目的探讨hCLP46基因在MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌细胞中表达的差异性及其意义。方法采用RT-PCR的方法检测2个细胞系（乳腺癌低度侵袭转移细胞系MCF-7、中度侵袭转移细胞系MDA-MB-231）中hCLP46mRNA的表达差异。取MCF-7和MDA-MB-231细胞株进行培养，分别加入100μmol／L的转化生长因子-B（TGF-β）并设对照组，培养72h，用Western-blot方法分析P15蛋白表达。结果RT-PCR检测hCLP46结果显示，在MCF-7和MDA-MB-231细胞系中，内参基因GAPDH的表达量相近，hCLP46基因在两个细胞系中均表达，其中MDA-MB-231细胞系中的表达高于MCF-7细胞系。两个细胞系分别加入TGF-β培养72h后，与相应的对照细胞系相比，P15的表达均有降低，hCLP46基因高表达的MDA-MB-231细胞中P15表达较MCF-7细胞显著降低。结论hCLP46基因过表达可能抑制TGF-β对MDA-MB-231和MCF-7乳腺癌细胞P15基因的上调，hCLP46可能在乳腺癌的发病中起到-定作用。

HCLP法测定中药泡腾栓组分含量的研究

在前期采用正交法筛选出具有清热解毒抑菌、去腐生肌的中药组方泡腾栓的基础上,采用HCLP法测定该中药泡腾栓中主要成分绿原酸和黄芩苷的含量,以此评价其质量,更高效地治疗奶牛子宫内膜炎。结果显示,绿原酸在波长349 nm下和黄芩苷在270 nm下,标准品分别在5.144 min和6.823 min出现明显的色谱峰,而阴性对照无峰出现。绿原酸和黄芩苷的标准曲线分别为A=10068C-2351.1,R=0.9995;A=20919C-132936,R=0.9999;精密度和重现性均良好;加样回收率分别为99.46±0.93和99.23±0.64;每粒栓剂中绿原酸和黄芩苷含量分别为2.91±0.031 mg和13.48±0.113 mg。表明建立起来的HPLC条件可以对该中药泡腾栓组分进行含量分析,并可评价其质量,为治疗奶牛子宫内膜炎中药栓剂的研发和生产提供质量检测保证。

人CD_(34)^+干/祖细胞异常表达基因hCLP46功能初步探讨

hCLP46是从MDS-AML的CD3+4细胞cDNA文库中筛选出的一个新的基因,为了进一步对该基因进行功能、性质研究,利用RT-PCR技术证明该基因在人脑组织中有表达,而在人胚胎肝组织中无表达.将该基因构建到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,转染U937细胞,发现过量表达该基因的U937细胞能够抑制TGF-β对P15基因的上调.利用生物信息学手段对该基因进行序列分析,得到其启动子区存在一个典型的"CpGisland".提示该基因有可能参与甲基化调节途径,为进一步研究该基因的作用机制打下基础.

串联亲和纯化技术筛选hCLP46的相互作用蛋白

hCLP46(human CAP10-like protein46)是从MDS-AML患者的CD34+干细胞cDNA文库中筛选出的基因.我们利用串联亲和纯化技术来筛选与hCLP46有相互作用的蛋白.通过体内交联-甘氨酸洗脱策略,检测到7条有差异的蛋白带,经液相色谱-质谱联用鉴定,得到了CNX和PDI等一系列内质网伴侣蛋白.所以hCLP46可能是一个糖蛋白,其成熟过程利用了BiP/Grp94和CNX/CRT 2套伴侣蛋白系统.

hCLP46基因在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的 探讨hCLP46基因在乳腺癌中mRNA表达情况及其临床意义.方法 采用实时定量RT-PCR方法检测48对乳腺癌组织和癌旁正常组织中hCLP46基因的mRNA表达情况.结果 乳腺癌组织中hCLP46基因表达量高于癌旁正常组织（t=2.368,P＜0.05）;癌组织中hCLP46基因表达水平仅与腋淋巴结转移有显著统计学意义（P＜0.05）.结论 hCLP46基因在乳腺癌中表达量增高,且与淋巴结转移相关,可能有助于乳腺癌的靶向治疗.

酵母双杂交技术筛选hCLP46的相互作用蛋白

目的:利用酵母双杂交技术,筛选人白细胞cDNA文库中能与人类CD34+干/祖细胞异常表达蛋白hCLP46(human CAP10-like protein46)相互作用的未知蛋白。通过对其相互作用蛋白的筛选和研究,研究hCLP46基因在骨髓增生异常综合症MDS-AML的作用机制,为MDS-AML的临床治疗和诊断提供理论基础。方法:以pGBKT7-hCLP46为诱饵质粒筛选人白细胞cDNA文库,得到阳性克隆,并对验证后的阳性克隆的外源性片段进行测序及同源性分析。结果:经过两次筛选、验证,从人白细胞cDNA文库中得到5个阳性克隆,对验证后的阳性克隆的外源片段进行测序及同源性分析,最终得到4个不同的候选基因序列。结论:应用酵母双杂交系统,共筛选得到4个不同的基因,其编码蛋白与hCLP46有相互作用,可能与MDS-AML发病机制相关。

通过对免疫共沉淀技术的优化验证蛋白质弱相互作用

采用单因子法对影响免疫共沉淀结果的各因素进行优化.以hCLP46(humanCAP10-like protein46)蛋白和内质网分子伴侣calnexin为例,对相互作用开展研究.通过对细胞裂解液各组分浓度、抗体用量、hCLP46的蛋白量和交联剂DSP因素的优化,验证了hCLP46(human CAP10-like protein46)蛋白和内质网分子伴侣calnexin间的弱相互作用.研究结果为探讨蛋白质之间弱相互作用提供一定的参考价值.

社会工作的自助和同伴支持理念的产生和演变——西方精神健康服务模式的发展轨迹

西方传统的精神健康服务方式采取的是生物化学模式,关注精神疾病患者病症的诊断和消除,把精神疾病患者视为需要帮助的服务对象。随着20世纪60、70年代服务使用者运用的产生和发展,社会工作的自助和同伴支持的重要理念逐渐在精神健康服务中获得普遍的认可,让人们看到精神疾病患者自身所拥有的能力,不再仅仅关注精神疾病患者的病症,而是把精神疾病患者视为具有各种发展要求的人。到了20世纪90年代,西方精神健康服务方式逐渐采取复原模式,把自助和同伴支持确定为帮助服务使用者寻回有意义生活的重要元素。西方精神健康服务方式转变的基础,是对精神疾病患者看法的根本改变,把自助和同伴支持确立为服务的核心理念。

红稗多糖的分离纯化工艺

为研究红稗粗多糖不同的脱蛋白工艺,并确定DEAE-52纤维素交换层析柱纯化分离红稗多糖的最优条件。用Sephadex G-100柱层析分离纯化得到的红稗多糖并采用柱前衍生化高效液相色谱法对纯化后的红稗精多糖的单糖组成种类进行测定。结果表明:红稗粗多糖的最佳上样浓度为5 mg/mL,洗脱速度0.5mL/min,上样体积25mL;采用Sevage法除蛋白3次,得到的蛋白清除率以及多糖保存率均较高,通过DEAE-52纤维素的柱层析分离纯化后可得到大组份多糖;再由Sephadex G-100柱层析分离纯化得到的大组份红稗中性多糖;再利用柱前衍生化高效液相色谱法(HCLP)测定分离纯化后的红稗多糖主要由L-鼠李糖(rhamnose,Rham)、D-葡萄糖醛酸(glucuronic acid,Glu)和葡萄糖(glucose,Glc)3种单糖组成。

论新时期人民群众上访的特点

在新的历史时期,人民内部矛盾是一个关系到全局性工作的社会矛盾,它贯穿社会生活的各个方面。群众上访是新时期人民内部矛盾的一种突出表现,有它自身的特点。