H_2O_2对新生大鼠心室肌细胞HCN通道电流的影响及其机制

目的明确过氧化氢(H2O2)对新生大鼠心肌细胞超极化激活环核苷酸门控离子通道(HCN)电流的影响及其机制。方法用胶原蛋白酶技术分离新生SD大鼠心室肌获得单一的心室肌细胞,用全细胞膜片钳技术记录HCN通道电流(I f);提取心肌细胞膜蛋白,用Western blot检测HCN蛋白的表达。结果 1)将心室肌细胞暴露于H2O2(100μmol/L)20 min后,I f显著增大(P<0.05);2)H2O2增大I f电流可被酪氨酸蛋白激酶抑制剂Genistein或PP2显著抑制;增大的通道酪氨酸磷酸化水平随之减小(P<0.05);3)用硫氧还原蛋白受体阻断剂显著抑制H2O2增大的I f(P<0.05);4)非特异性蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPs)抑制剂可显著增大I f(P<0.05)。结论 H2O2增大I f,是通过ROS依赖性的酪氨酸蛋白激酶及其相关的硫氧还原蛋白系统,调控HCN通道的活性和表达。

银杏叶提取物对超极化激活的环核苷酸门控基因编码的起搏通道电生理特性的影响

目的研究银杏叶提取物对异源表达在卵母细胞上的超极化激活的环核苷酸门控通道（HCN）2、4阻断的电药理学特性及分子机制。方法将人HCN2、4的mRNA显微注射到非洲爪蟾卵母细胞后,利用双电极电压钳技术记录通道电流。结果银杏叶提取物呈浓度依赖性阻滞表达在爪蟾卵母细胞上HCN2、4通道,药物半量抑制浓度IC50值分别为0.12±0.05 mg/ml和0.25±0.01 mg/ml。银杏叶提取物对HCN2、4通道阻断的阻断作用是不可逆的,经过15-20 min药物洗脱,阻滞的HCN电流部分并没有完全恢复到对照水平,只能恢复大约55%-75%。在-110 mV时银杏叶提取物对激活时间常数的值明显增大,对HCN2通道从504.6±39.8 ms（n=8）增为588.4±21.7 ms（0.03 mg/ml,n=8,P〈0.05）,1176.4±57.3 ms（0.3 mg/ml,n=8,P〈0.05）;对HCN4通道从1330.5±59.8 ms（n=8）增为1973.1±83.6 ms（0.03 mg/ml,n=8,P〈0.05）,而银杏叶提取物对HCN电流的去激活时间常数并未明显改变。结论银杏叶提取物以浓度依赖性方式不可逆的作用于HCN2、4通道,且对HCN4通道的抑制作用强于HCN2通道,减慢了通道的激活动力学,而对通道的去激活动力学无明显影响。

血管紧张素Ⅱ对新生大鼠心室肌细胞HCN通道的影响机制的探讨

目的明确血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对新生大鼠心肌细胞超极化激活环核苷酸门控离子通道(HCN)电流的影响及其机制。方法用胶原蛋白酶技术分离新生SD大鼠心室肌获得单一的心室肌细胞,用全细胞膜片钳技术记录HCN通道电流(If);提取心肌细胞膜蛋白,用Western blot检测HCN蛋白的表达。结果 (1)将心室肌细胞暴露于AngⅡ(100mol/L)20min后,If显著增大(P <0.05);(2)AngⅡ增大If电流可被酪氨酸蛋白激酶抑制剂Genistein或PP2显著抑制;增大的通道酪氨酸磷酸化水平也被减小(P <0.05);(3)用硫氧还原蛋白受体阻断剂显著抑制AngⅡ增大的If(P <0.05);(4)If也可被非特异性蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPs)抑制剂显著增大(P <0.05)。结论 AngⅡ增大If,是通过ROS依赖性的酪氨酸蛋白激酶及其相关的硫氧还原蛋白系统,调控HCN通道的活性和表达。这将为氧化应激引起的细胞损伤和离子通道重构的调控的研究提供一个新的视点,为临床更有效地防治心律失常提供新的理论依据和治疗策略。