期刊文献+
共找到22篇文章
< 1 2 >
每页显示 20 50 100
HCV核心蛋白在大肠杆菌中的表达及免疫学特性研究 被引量:8
1
作者 赵玮 廖国阳 +4 位作者 李卫东 张新文 孙明波 陈俊英 姜述德 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期425-429,共5页
目的研究 HCV核心蛋白在大肠杆菌中的非融合表达及重组蛋白的免疫学特性。方法用 DNA重组技术在两种表达质粒 (p QE3O和 p Trc His A)、4种宿主菌 (DH5 a,TOP10 ,BL2 1和 M15 )中表达 HCV全长及羧基端部分缺失的核心蛋白 (aa1~ 191,aa1... 目的研究 HCV核心蛋白在大肠杆菌中的非融合表达及重组蛋白的免疫学特性。方法用 DNA重组技术在两种表达质粒 (p QE3O和 p Trc His A)、4种宿主菌 (DH5 a,TOP10 ,BL2 1和 M15 )中表达 HCV全长及羧基端部分缺失的核心蛋白 (aa1~ 191,aa1~ 15 4和 aa1~ 6 9) ,表达蛋白经 SDS- PAGE检测 ,免疫印迹分析 ,亲和层析法纯化后免疫 BAL B/C小鼠 ,EL ISA法检测免疫小鼠血清中抗 HCV抗体水平。结果 HCV核心蛋白 C15 4,C191在 p QE30 /M15中获得了表达 ,表达量分别占菌体总蛋白的 18.2 %和 9.3%。免疫印迹分析的结果显示在 C15 4和 C191相应位置处出现杂交条带。 EL ISA结果显示C15 4和 C191诱导小鼠产生了抗 HCV抗体。结论表达的重组蛋白具有抗原特异性和免疫原性。“截断”型 展开更多
关键词 hcv核心蛋白 大肠杆菌 亲和层析 抗原性 免疫原性 丙型肝炎
下载PDF
用细菌/杆状病毒系统在昆虫细胞中表达GFP与HCV抗原融合蛋白 被引量:2
2
作者 王业富 齐义鹏 +2 位作者 岳莉莉 杜全胜 邓小昭 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1998年第2期134-139,共6页
用细菌/杆状病毒(Bac-to-Bac)系统在昆虫细胞中高效表达了绿色荧光蛋白(GFP)与HCV抗原的双功能融合蛋白,经ELISA测定和荧光显微镜观查证实,表达产物既能发射易于检测的绿色荧光,又具有HCV的抗原活性,... 用细菌/杆状病毒(Bac-to-Bac)系统在昆虫细胞中高效表达了绿色荧光蛋白(GFP)与HCV抗原的双功能融合蛋白,经ELISA测定和荧光显微镜观查证实,表达产物既能发射易于检测的绿色荧光,又具有HCV的抗原活性,实现了用绿色荧光蛋白等分子标记抗原,为免疫诊断新方法的建立打下了理论基础. 展开更多
关键词 hcv 核心蛋白 基因 绿色荧光蛋白 抗原融合蛋白
下载PDF
基于四环素调控系统的ApoE-rtTA/TRE-HCV-C双转基因小鼠的制备 被引量:1
3
作者 杨国柱 陈系古 +4 位作者 黄冰 单于 肖东 马芸 邓新燕 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2007年第5期321-325,共5页
目的为了丰富现有的四环素调控系统的小鼠资源库,同时也为更好地研究目的基因HCV-C的作用机制提供一个活体的动物模型,制备基于四环素调控系统原理的调控部分ApoE-rtTA的转基因小鼠,与反应部分TRE-HCV-C转基因小鼠,相互交配制作出双转... 目的为了丰富现有的四环素调控系统的小鼠资源库,同时也为更好地研究目的基因HCV-C的作用机制提供一个活体的动物模型,制备基于四环素调控系统原理的调控部分ApoE-rtTA的转基因小鼠,与反应部分TRE-HCV-C转基因小鼠,相互交配制作出双转基因小鼠。方法应用显微注射法将构建好的两种基因片段ApoE-rtTA及TRE-HCV-C分别注入超排的昆明母鼠的受精卵,再植入假母输卵管,出生动物及其后代经PCR初步筛选出阳性,将两者及阳性后代交配产生携带5只转基因鼠再经Western blot和RT-PCR在RNA和蛋白水平上进一步鉴定。结果产生了3只整合有ApoE-rtTA基因的首见鼠和125只阳性子代,以及产生了5只整合有TRE-HCV-C基因的首见鼠和16只阳性子代。PCR及Southern Blot证实上述阳性鼠确有转基因整合。将两者交配产生携带5只双转基因鼠。结论成功制备了携带有ApoE-rtTA及TRE-HCV-C转基因小鼠,建立了分别携带有这两种基因的鼠群,以及同时携带有两种基因的双转基因小鼠,为四环素调控系统提供了一个良好的通用型的调控动物模型,同时也可利用四环素调控系统来研究HCV中的C基因对小鼠的作用,也是HCV-C基因功能研究及与肝细胞癌的关系的机制研究的一个有用工具。 展开更多
关键词 载脂蛋白 四环素调控反式激活子 四环素反应元件 丙肝病毒核心蛋白 转基因鼠
下载PDF
HCV核心蛋白在大肠杆菌中的表达及免疫学特性分析
4
作者 张如新 聂东宋 《激光生物学报》 CAS CSCD 2008年第2期235-238,共4页
目的:表达HCV核心蛋白,为检测丙肝病毒提供合适抗原。方法:以含HCV核心全长cDNA克隆的pMD18T/core质粒为模板,PCR扩增全长的HCV核心抗原基因,插入表达载体pQEN1构建重组质粒pQEN1/Core,转化BL-21(DE3)大肠杆菌,IPTG诱导表达6×His... 目的:表达HCV核心蛋白,为检测丙肝病毒提供合适抗原。方法:以含HCV核心全长cDNA克隆的pMD18T/core质粒为模板,PCR扩增全长的HCV核心抗原基因,插入表达载体pQEN1构建重组质粒pQEN1/Core,转化BL-21(DE3)大肠杆菌,IPTG诱导表达6×His融合蛋白,表达产物经SDS-PAGE及Western blot检测和鉴定。结果:经SDS-PAGE及Western blot显示HCV核心蛋白在大肠杆菌中正确表达,融合蛋白分子量约为22 kD,表达量约占菌体蛋白总量的30%。纯化后的C蛋白能与慢性丙型肝炎患者有血清反应。结论:HCV核心蛋白在大肠杆菌中成功表达并具有较强的抗原性。 展开更多
关键词 hcv核心抗原 基因表达与纯化 血清学反应
下载PDF
丙型肝炎病毒Core与NS3基因的不同融合方式及其表达 被引量:1
5
作者 李暐东 梁布锋 祁自柏 《中国病毒学》 CSCD 2000年第2期204-207,共4页
The gene encoding the core and NS3 proteins of hepatitis C virus was amplified by PCR, respectirely. Two genes were fused and formed the recombinant plamid pHCV CN (Core+NS3) and pHCV NC (NS3+Core). The fused plasmid ... The gene encoding the core and NS3 proteins of hepatitis C virus was amplified by PCR, respectirely. Two genes were fused and formed the recombinant plamid pHCV CN (Core+NS3) and pHCV NC (NS3+Core). The fused plasmid were expressed in E.coli 06. The pHC CN plasmid expressed fussion protein was shown by a major band with a expected molecular weight about 68 kD on SDS PAGE. However, the pHCV NC plasmid expressed fussion protein was 66 kD in molecular weight. The results indicate that the pHCV NC fussion protein differs from the pHCV CN fussion protein in mulecular weight. It suggests that the fusion way is important for the structure of recombinant proteins. 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 core基因 NS3基因 基因融合 表达
下载PDF
旋毛虫成虫抗原基因的原核表达及表达产物的特性分析 被引量:7
6
作者 诸欣平 杨静 +4 位作者 杨雅平 Pascal Boireau 詹斌 冯建军 Peter Hotez 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期16-19,共4页
目的 获得旋毛虫成虫抗原基因的原核表达产物并对其进行纯化及免疫特性分析。 方法 旋毛虫成虫Ts87基因片段亚克隆入 PET- 2 8a(+)表达载体 ,异丙基硫代 -β- D-半乳糖苷 (IPTG)诱导表达。亲和层析和电洗脱法纯化表达产物 ,SDS- PAGE... 目的 获得旋毛虫成虫抗原基因的原核表达产物并对其进行纯化及免疫特性分析。 方法 旋毛虫成虫Ts87基因片段亚克隆入 PET- 2 8a(+)表达载体 ,异丙基硫代 -β- D-半乳糖苷 (IPTG)诱导表达。亲和层析和电洗脱法纯化表达产物 ,SDS- PAGE、 EL ISA和 Western blotting对表达产物进行分析鉴定 ,并将纯化的表达产物人工免疫兔。结果  SDS- PAGE结果显示 ,表达产物为分子量约为 4 0 k Da的重组蛋白。纯化后免疫兔获得高滴度的抗血清。该基因重组蛋白可被感染旋毛虫的猪、兔血清及人工免疫兔血清所识别 ,与感染囊尾蚴、棘球蚴的患者血清或感染日本血吸虫的兔血清不发生交叉免疫反应。 结论 获得一个新的旋毛虫成虫 Ts87基因重组蛋白 ,该蛋白具有特异的抗原性。 展开更多
关键词 旋毛虫 基因表达 纯化 重组蛋白 抗原 鉴定
下载PDF
丙型肝炎病毒核心蛋白在大肠杆菌中的表达 被引量:6
7
作者 胡刚 薛小平 +3 位作者 董晓慧 楚雍烈 尹文 雷迎峰 《生物技术》 CAS CSCD 2004年第4期4-6,共3页
目的 :建立稳定表达丙型肝炎病毒 (HCV)核心蛋白的原核表达系统 ,获得高产量的纯化核心蛋白。方法 :应用多聚酶链反应 (PCR) ,以HCV -H株全长cDNA序列为模板 ,扩增获得核心区基因片段 ,克隆入原核表达载体pBVIL1,构建原核表达载体pBVIL1... 目的 :建立稳定表达丙型肝炎病毒 (HCV)核心蛋白的原核表达系统 ,获得高产量的纯化核心蛋白。方法 :应用多聚酶链反应 (PCR) ,以HCV -H株全长cDNA序列为模板 ,扩增获得核心区基因片段 ,克隆入原核表达载体pBVIL1,构建原核表达载体pBVIL1-C ,转化HB10 1宿主菌 ,通过温度诱导表达核心蛋白。结果 :扩增得到目的基因长度为 5 73bp ,构建pBVIL1-C表达载体 ,在HB10 1宿主菌中通过温度诱导获得稳定表达 ,表达蛋白占菌体总蛋白含量的 2 1% ,Western -Blot检测证实表达产物可与HCV患者阳性血清发生特异性结合反应。结论 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒(hcv) 核心蛋白 基因表达 大肠杆菌
下载PDF
丙型肝炎病毒核心蛋白的高效表达及纯化 被引量:1
8
作者 李越希 唐家琪 +5 位作者 陶开华 张云 李先富 胡云龙 潘秀珍 郭恒彬 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 1995年第4期153-156,共4页
用新型表达载体PGEX4T-2在大肠杆菌内高效表达了丙型肝炎病毒核心蛋白。所表达的核心蛋白融合有谷优甘肽转移酶,用Sepharose4B—GSH凝胶一步亲和层析纯化即可获得高纯度的核心蛋白、该蛋白具有较好的抗原性和特异性。
关键词 丙型肝炎病毒 核心蛋白 基因表达 提纯
下载PDF
恙虫病东方体蛋白基因的原核表达及活性鉴定 被引量:2
9
作者 操敏 郭恒彬 +3 位作者 郁兴明 王柏仁 杨文富 唐家琪 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期769-771,共3页
目的 对恙虫病东方体Gilliam株 5 6kDa外膜蛋白基因进行原核表达 ,并对表达产物进行纯化 ,以获得有生物活性的重组蛋白 ,用于恙虫病诊断试剂的研制。方法 根据Gilliam株东方体 5 6kDa蛋白基因序列设计特定引物 ,用PCR法扩增出编码 5 6... 目的 对恙虫病东方体Gilliam株 5 6kDa外膜蛋白基因进行原核表达 ,并对表达产物进行纯化 ,以获得有生物活性的重组蛋白 ,用于恙虫病诊断试剂的研制。方法 根据Gilliam株东方体 5 6kDa蛋白基因序列设计特定引物 ,用PCR法扩增出编码 5 6kDa抗原长约 132 0bp的DNA ,克隆至原核载体PET2 8a ,构建了表达载体PET -OTG ,并获表达。表达产物经镍 (Ni2 +)柱亲和层析纯化 ,聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS -PAGE)及蛋白印迹 (Western -blot)分析鉴定 ,并用间接ELISA进行抗原性分析。结果 SDS -PAGE检测表明重组蛋白分别以可溶性蛋白和包涵体两种方式表达 ,在相对分子质量约 5 2kDa处有表达目的条带。经Ni2 + 层析柱纯化得到目的蛋白 ,包涵体蛋白纯化后纯度大于可溶性蛋白 ,达电泳纯。Western -blot证实该蛋白能被患者阳性血清所识别 ,用阴性血清则未出现相应印迹。间接ELISA结果表明重组蛋白具有良好的抗原性 ,能有效区分恙虫病阳性和阴性血清。结论 重组蛋白具有免疫反应活性 ,有望作为诊断抗原用于恙虫病的诊断。 展开更多
关键词 东方体 56kDa蛋白 基因表达 蛋白纯化 抗原性
下载PDF
丙型肝炎病毒核心蛋白基因在大肠杆菌内的表达及应用 被引量:4
10
作者 李越希 唐家琪 +2 位作者 史江 赵学忠 乔仁良 《中国病毒学》 CSCD 1994年第1期18-24,共7页
将从中国丙肝病人血清中扩增克隆的丙型肝炎病毒核心蛋白基因(408bp)酶切处理后插入表达载体pJLA502内,获得高表达核心蛋白的重组工程菌。将重组菌经42℃热诱导5h,SDS-PAGE分析表明,表达的核心蛋白占菌体... 将从中国丙肝病人血清中扩增克隆的丙型肝炎病毒核心蛋白基因(408bp)酶切处理后插入表达载体pJLA502内,获得高表达核心蛋白的重组工程菌。将重组菌经42℃热诱导5h,SDS-PAGE分析表明,表达的核心蛋白占菌体蛋白总量的20%。经分子筛和吸附层析纯化后获得的核心蛋白,ELISA检测证实有较好的抗原性和特异性。用表达的核心抗原加用表达的NS_3抗原(C_33)装配的抗-HCV试剂盒,经用标准血清验证及与国外第二代抗-HCV试剂盒比较,证实符合丙肝诊断试剂要求。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 核心蛋白基因 表达
下载PDF
丙型肝炎病毒C区截短型基因原核表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达 被引量:1
11
作者 胡刚 董晓慧 +3 位作者 薛小平 楚雍烈 尹文 雷迎峰 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期320-322,326,共4页
目的建立稳定表达丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白的原核表达系统,获得高产量的纯化核心蛋白。方法应用多聚酶链反应(PCR),以HCV-H株全长cDNA序列为模板,扩增获得C区羧基端部分缺失的基因片段,克隆入原核表达载体pBVIL1,构建原核表达载体pBVI... 目的建立稳定表达丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白的原核表达系统,获得高产量的纯化核心蛋白。方法应用多聚酶链反应(PCR),以HCV-H株全长cDNA序列为模板,扩增获得C区羧基端部分缺失的基因片段,克隆入原核表达载体pBVIL1,构建原核表达载体pBVIL1-Ct,转化HB101宿主菌,通过温度诱导表达截短型C蛋白。结果扩增得到目的基因长度为462bp,构建pBVIL1-Ct表达载体,在HB101宿主菌中通过温度诱导获得稳定表达,表达蛋白占菌体总蛋白含量的24%。Western-Blot及ELISA检测证实表达产物可与HCV患者阳性血清发生特异性结合反应。结论羧基端部分缺失的HCV C区基因片段可在大肠杆菌中稳定表达并具有良好的反应原性。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒(hcv) 核心蛋白 基因表达 大肠杆菌
下载PDF
恶性疟合成多肽抗原基因在大肠杆菌中表达产物的分离纯化 被引量:1
12
作者 陈仕荣 王昌才 +2 位作者 钟雄林 胡亚芳 王启松 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第2期196-199,共4页
我们用化学方法合成的两个恶性疟原虫杂合抗原基因,即A基因和B基因,分别与表达载体pWR450·1重组并转化到大肠杆菌使其表达。经筛选获得了pWR/A·7和pWR/B·164两个表达较高的克隆菌(经扫描测定表达融合蛋白量分别为菌体总... 我们用化学方法合成的两个恶性疟原虫杂合抗原基因,即A基因和B基因,分别与表达载体pWR450·1重组并转化到大肠杆菌使其表达。经筛选获得了pWR/A·7和pWR/B·164两个表达较高的克隆菌(经扫描测定表达融合蛋白量分别为菌体总蛋白的8.8%和11.0%)。又将A基因和B基因串连后与pWR450·1重组并转化到大肠杆菌JM103株,经筛选鉴定获得了上述两个基因串连的pWR/AB·20克隆菌(表达融合蛋白量为35.8%)。为了进一步研究这3个克隆菌表达蛋白的免疫功能等活性,用8.0mol/L脲处理包涵体,离心沉淀上清液进行DEAE-sephacel柱层析,用Tris梯度缓冲液洗脱,但分离效果不好,而应用PAGE方法进行分离纯化,则可得到电泳纯、稳定又具有免疫原性的产物。 展开更多
关键词 疟疾 疟原虫 合成多肽 抗原 表达产物 提纯
下载PDF
人肝细胞癌相关抗原661基因在大肠杆菌中的克隆、表达及产物纯化 被引量:1
13
作者 李树蕾 谭岩 +3 位作者 刘力华 段秀梅 方艳秋 许淑芬 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期899-902,共4页
目的:构建人肝细胞癌相关抗原661(Hepatocellular carcinoma-associated antigens661,HCA661)原核表达载体并诱导其表达,纯化及鉴定目的蛋白。方法:人肝细胞癌SMMC7721细胞基因组DNA经PCR扩增HCA661基因,克隆到pGEM-Teasy中进行酶切、PC... 目的:构建人肝细胞癌相关抗原661(Hepatocellular carcinoma-associated antigens661,HCA661)原核表达载体并诱导其表达,纯化及鉴定目的蛋白。方法:人肝细胞癌SMMC7721细胞基因组DNA经PCR扩增HCA661基因,克隆到pGEM-Teasy中进行酶切、PCR和测序鉴定;构建重组质粒pQE-HCA661,并转化大肠杆菌M15[pREP4],经IPTG诱导表达目的蛋白;镍离子亲和层析柱(Ni2+-NTA)纯化靶蛋白后进行Western blot鉴定。结果:目的基因经酶切和PCR鉴定结果与预期相符,测序结果显示目的基因与GeneBank登录的序列完全一致;工程化大肠杆菌M15[pREP4]经IPTG诱导表达约39kD的目的蛋白。Western blot鉴定结果显示,纯化重组蛋白能够分别与抗His单克隆抗体和抗HCA661多克隆抗体特异性结合。结论:本实验成功地构建了重组原核表达质粒pQE-HCA661,工程菌表达的重组HCA661带有6×His标签,并具有免疫原性,可以用于制备单克隆抗体,或用于检测患者血清中肝细胞癌抗体以预测肿瘤恶性程度。 展开更多
关键词 人肝细胞癌相关抗原661 基因克隆 原核表达 蛋白纯化 免疫原性
下载PDF
肝脏特异性可调控丙型肝炎病毒核心蛋白表达的转基因小鼠模型的建立 被引量:1
14
作者 杨国柱 傅思莹 +5 位作者 黄冰 单于 肖东 马芸 邓新燕 陈系古 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期373-377,共5页
【目的】制备TRE-HCV-C转基因小鼠,为四环素调控系统的体内研究提供了反应部分的转基因小鼠,以便与本实验室同时建立的调控部分的小鼠共同作用,为进一步建立双转基因小鼠模型奠定基础,更为丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV-C)的发病机制的研究... 【目的】制备TRE-HCV-C转基因小鼠,为四环素调控系统的体内研究提供了反应部分的转基因小鼠,以便与本实验室同时建立的调控部分的小鼠共同作用,为进一步建立双转基因小鼠模型奠定基础,更为丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV-C)的发病机制的研究提供一个实用方便的模型。【方法】重组构建含有目的基因HCV-C、TRE序列和SV40 polyA的转基因载体pTRE-HCV-C,以显微注射的方法将1.153kb的转基因片段注入BALB/C母鼠的受精卵,出生动物及其后代经PCR初步筛选出阳性,再经Southern杂交对阳性鼠基因组DNA标本行进一步鉴定。用转基因阳性小鼠和整合有肝脏特异性启动子ApoE和rtTA基因的另一品系转基因小鼠杂交,得到子代F1小鼠,通过免疫组织化学来初步检测HCV-C在肝脏中特异性的可调控性的表达。【结果】产生了5只整合有TRE-HCV-C基因的首建鼠,以及它的子代也带有此基因。与基因组上整合有肝脏特异性启动子ApoE和rtTA基因的转基因小鼠杂交后,得到子代F1小鼠,特定时间与DOX作用后,小鼠肝脏的免疫组织化学结果表明,TRE-HCV-C小鼠为丙型肝炎病毒核心蛋白的发病机制研究提供了一个良好的动物模型工具。【结论】成功制备了HCV-C转基因小鼠,可利用四环素调控系统来研究HCV中的C基因对小鼠的作用,为进一步建立四环素调控系统调控下表达HCV-C基因双转基因小鼠模型奠定基础,也是HCV-C基因功能研究及与肝细胞癌的关系的机制研究的一个有用工具。 展开更多
关键词 hcv-C 丙型肝炎病毒核心蛋白 转基因小鼠模型 四环素调控系统 组织特异性表达
下载PDF
虎源猫泛白细胞减少症病毒VP2基因主要抗原表位区的原核表达和蛋白纯化 被引量:2
15
作者 田丽红 华育平 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期97-100,共4页
利用PCR技术从FPV-HLJ株病毒细胞培养物中扩增VP2基因主要抗原表位区片段VP2’。扩增片段克隆至pMD18-T载体,经核苷酸序列测定确认后,亚克隆于pGEX-6p-1原核表达载体,构建pGEX-6p-VP2’重组原核表达质粒。将该质粒转化至表达菌BL21(DE3... 利用PCR技术从FPV-HLJ株病毒细胞培养物中扩增VP2基因主要抗原表位区片段VP2’。扩增片段克隆至pMD18-T载体,经核苷酸序列测定确认后,亚克隆于pGEX-6p-1原核表达载体,构建pGEX-6p-VP2’重组原核表达质粒。将该质粒转化至表达菌BL21(DE3)中用IPTG进行诱导表达。表达蛋白采用切胶法纯化,并用SDS-PAGE和Westernblot检测纯化蛋白纯度和抗原特异性。结果表明,VP2基因全长1200bp,编码400个氨基酸。重组菌可表达相对分子量约为66kD的融合蛋白,包括目的蛋白40kD和GST标签26kD。该蛋白以包涵体形式存在,且GST融合蛋白具有良好抗原特异性。 展开更多
关键词 猫泛白细胞减少症病毒 VP2基因 抗原表位 原核表达 蛋白纯化
下载PDF
可承载CETP多肽表位的颗粒样蛋白表达载体的克隆、表达与分离纯化 被引量:1
16
作者 龙军 吴洁 +1 位作者 曹荣月 刘景晶 《药物生物技术》 CAS CSCD 2006年第4期237-243,共7页
为了提高多肽表位的免疫原性,利用乙肝病毒核心抗原能够在体外自行组装成病毒样颗粒的特性,将人源胆固醇酯转运蛋白羧基端26个氨基酸连同大肠杆菌DnaK基因C端结构域克隆入乙肝病毒核心抗原的免疫优势决定区,并在大肠杆菌BL-21(DE3)表达... 为了提高多肽表位的免疫原性,利用乙肝病毒核心抗原能够在体外自行组装成病毒样颗粒的特性,将人源胆固醇酯转运蛋白羧基端26个氨基酸连同大肠杆菌DnaK基因C端结构域克隆入乙肝病毒核心抗原的免疫优势决定区,并在大肠杆菌BL-21(DE3)表达,以包含体形式存在,经过洗涤、复性和分子筛纯化,获得纯度达90%以上的目的蛋白。纯化的蛋白免疫新西兰大白兔后能够诱导产生高水平的抗胆固醇酯转运蛋白的抗体,表明乙肝病毒核心抗原能够在体外自发装配成多聚体颗粒,并能够将插入其免疫优势决定区的胆固醇酯转运蛋白(CETP)多肽表位展示于颗粒表面以提高免疫原性,显示出其作为疫苗免疫载体的良好前景。 展开更多
关键词 乙肝病毒核心抗原 病毒样颗粒 DnaK基因 胆固醇酯转运蛋白 包含体 纯化
下载PDF
Tat_(47-57)-HBcAg融合基因表达载体的构建及融合蛋白的表达鉴定 被引量:1
17
作者 潘庆春 余永胜 +3 位作者 汤正好 张韡 韩进超 臧国庆 《蚌埠医学院学报》 CAS 2008年第6期640-643,共4页
目的:探讨融合蛋白Tat47-57-HBcAg原核表达的可行性,并分析其表达形式,为研究其功能提供理论基础。方法:合成Tat47-57编码序列,PCR技术扩增HBcAg基因,通过重叠延伸PCR片段拼接法,将Tat47-57编码序列和HBcAg基因拼接,将融合基因克隆到pE... 目的:探讨融合蛋白Tat47-57-HBcAg原核表达的可行性,并分析其表达形式,为研究其功能提供理论基础。方法:合成Tat47-57编码序列,PCR技术扩增HBcAg基因,通过重叠延伸PCR片段拼接法,将Tat47-57编码序列和HBcAg基因拼接,将融合基因克隆到pET28原核表达载体中。挑选测序正确的构建质粒转化大肠埃希菌Rosetta-gamiTM2(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导融合蛋白表达,表达产物超声破壁,十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析融合蛋白的表达形式,Western印迹鉴定。结果:Tat47-57-HBcAg融合蛋白在大肠埃希菌中主要以可溶性形式过度表达,Western印迹分析表明Tat47-57-HBcAg融合蛋白可与HBcAg单克隆抗体反应。结论:融合蛋白Tat47-57-HBcAg以可溶性形式在原核表达系统中高效表达,并能特异性的被HBcAg单克隆抗体所识别。 展开更多
关键词 乙型肝炎核心抗原 Tat47-57 融合基因 重组融合蛋白质类 基因表达 大肠埃希菌
下载PDF
丙型肝炎NS5A基因多克隆抗体的制备 被引量:1
18
作者 刘秀财 李耕慧 郭伟华 《中国医药导报》 CAS 2010年第15期20-22,共3页
目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)NS5A蛋白原核表达载体,获得高产量的纯化目的蛋白,并制备其多克隆抗体。方法:应用聚合酶链反应技术,PCR扩增获得NS5A基因,将NS5A基因插入至原核表达载体pET-32a(+)中,转化大肠埃希菌DH5α提取质粒,验证正确后... 目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)NS5A蛋白原核表达载体,获得高产量的纯化目的蛋白,并制备其多克隆抗体。方法:应用聚合酶链反应技术,PCR扩增获得NS5A基因,将NS5A基因插入至原核表达载体pET-32a(+)中,转化大肠埃希菌DH5α提取质粒,验证正确后,转化大肠埃希菌BL21中,以IPTG诱导,获得NS5A融合蛋白的可诱导性表达,通过SDS-PAGE电泳、Western blot免疫印迹分析证实融合蛋白表达的特异性。利用Ni+亲和柱对表达蛋白进行纯化及柱上复性。纯化蛋白免疫新西兰兔,利用Western blot和ELISA法对多克隆抗体进行特异性和效价检测。结果:NS5A融合蛋白表达成功,成功获得了融合蛋白及兔抗NS5A多克隆抗体。结论:成功表达NS5A基因融合蛋白,获得高特异性、兔抗NS5A多克隆抗体,为研究NS5A基因的生物学功能提供了重要制剂。 展开更多
关键词 hcv—NS5A基因 原核表达 蛋白纯化
下载PDF
丙型肝炎病毒核心蛋白基因的克隆与表达
19
作者 李越希 唐家琪 《生物技术通讯》 CAS 1994年第3期106-109,共4页
以含有丙型肝炎病毒核心蛋白基因的质粒pJLA502-C为模板,用PCR方法重新扩增克隆了核心蛋白基因,在扩增基因的上下端分别增加了NCOⅠ及SalⅠ酶切位点。将克隆的基因酶切后插入表达载体pBV221内,转化大肠肝菌DH_(5α),获得表达非融合核心... 以含有丙型肝炎病毒核心蛋白基因的质粒pJLA502-C为模板,用PCR方法重新扩增克隆了核心蛋白基因,在扩增基因的上下端分别增加了NCOⅠ及SalⅠ酶切位点。将克隆的基因酶切后插入表达载体pBV221内,转化大肠肝菌DH_(5α),获得表达非融合核心蛋白的工程菌,42℃热诱导5hr,表达蛋白占菌体蛋白总量的15%。经包涵体纯化及分子筛纯化等,获得核心蛋白,经ELISA及Western Blotting分析表明有较好的抗原性和特异性。 展开更多
关键词 hcv 核心蛋白 基因克隆与表达 PCR 抗原性
下载PDF
乙型肝炎病毒核心抗原的原核表达及纯化 被引量:2
20
作者 李计来 徐静 +4 位作者 王娟 吴刚 崔文禹 赵莉 许丽锋 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2011年第10期1121-1125,共5页
目的原核表达乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg),纯化HBcAg病毒样颗粒(Virus-like particle,VLP),并对其理化性质进行鉴定。方法根据大肠杆菌密码子偏爱性对HBcAg基因进行密码子优化,全基因合成优化基因,克隆至载体pET-32a(+)中,构建原核表... 目的原核表达乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg),纯化HBcAg病毒样颗粒(Virus-like particle,VLP),并对其理化性质进行鉴定。方法根据大肠杆菌密码子偏爱性对HBcAg基因进行密码子优化,全基因合成优化基因,克隆至载体pET-32a(+)中,构建原核表达质粒pET-HBcAg,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。重组蛋白经盐析和层析纯化后,经SDS-PAGE、Western blot、电镜观察、等电点分析、高效液相色谱(HPLC)分析和N-末端氨基酸测序等进行鉴定。结果重组表达质粒经酶切和测序鉴定证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为21 000,为可溶性表达,表达量占菌体总蛋白的21.6%;纯化后其纯度可达99.4%,具有良好的反应原性,VLP形成良好,结构均一,等电点在pH 6.0~6.9之间,HPLC分析形成T3和T4两种不同结构,N-末端序列正确,无氨基酸降解。结论已成功构建了HBcAg原核表达质粒,并获得了高纯度的HBcAgVLP,为进一步研究HBcAg VLP的生物学特性奠定了基础。 展开更多
关键词 肝炎核心抗原 乙型 病毒样颗粒 基因优化 原核细胞 基因表达 纯化
原文传递
上一页 1 2 下一页 到第
使用帮助 返回顶部