抗HCV HVR1模拟合成肽单克隆抗体的制备及特性鉴定

目的:制备抗-HCV高变区1(HVR1)合成肽单克隆抗体(mAb),并对其特性进行鉴定。方法:以固相合成的HCV HVR1合成肽与牛血清白蛋白(BSA)偶联后,免疫8周龄的BALB/c小鼠。采用杂交瘤技术,取免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合,制备抗-HCV HVR1 mAb。经HAT、HT选择培养及有限稀释法进行克隆化后,用相关的试剂盒鉴定小鼠mAb的Ig亚类;经中和抑制后用ELISA法检测mAb的特异性;用间接ELISA法检测mAb腹水的效价及相对亲和常数。结果:获得1株可分泌抗-HCV HVR1合成肽特异性mAb的杂交瘤细胞1A9G9F11。该株mAb的Ig亚类为IgG3;腹水效价为3.125×10-5;相对亲和常数为1.0×106L/mol。该株mAb与HBsAg、HBeAg、HBcAg、HAAg、牛血清白蛋白、酪蛋白和胸腺5肽均无交叉反应,与HCV HVR1合成肽-牛血清白蛋白出现特异性反应。结论:成功地建立了1株可分泌抗-HCV HVR1 mAb的杂交瘤细胞1A9G9F11,为进一步的实验研究提供了重要的制剂。

慢性丙型肝炎患者HCV HVR1准种异质性与干扰素疗效关系的研究

目的:研究HCVHVR1准种异质性与干扰素疗效以及与HCVRNA载量之间的关系,为临床选择应用干扰素抗病毒治疗适应症及预测疗效提供理论依据。方法:采用核苷酸序列测定法进行HCV基因分型;分别采用单链构象多态性聚合酶链反应法(SSCP)及克隆测序法进行HVR1准种异质性检测;采用荧光特异性PCR法进行HCVRNA载量检测。结果:14例1b型慢性丙肝患者干扰素治疗前5例为SSCP低复杂性(SSCP条带数≤3),9例为高复杂性(SSCP条带数>3),干扰素治疗应答组SSCP条带数明显少于无应答组。1b型患者中无应答组HVR1变异株的数目(准种数)和基因的差异性(每个基因位点的平均变异率)均明显高于应答组。HVR1准种异质性程度与HCVRNA含量无正相关关系。结论:感染HCV基因型1b型的慢性丙型肝炎患者HVR1准种异质性程度越高对干扰素无应答的可能性越大。HVR1准种的复杂性程度与HCVRNA含量无关,是预测干扰素疗效的一个独立因素。

Antigenicity of the HCV HVR1 Peptide Analyzed by Computer Modeling

To find out the protective polypeptide epitopes of HCV HVR1, the antigenicity of the synthetic peptide was predicted by computer modeling and verified by ELISA and lymphocyte transformation test. It was found that the outcome of the computer modeling was in accord with the experimental results. The method by using computer modeling would be a economic approach by which the protective peptides could be identified quickly.

HCV-1b型HVR1区准种变异与干扰素疗效的关系

目的研究丙型肝炎病毒基因1b(HCV-1b)HVR1区准种变异与干扰素疗效的关系。方法选取HCV-1b型慢性丙型肝炎患者20例,在干扰素治疗前作HVR1区准种变异测定,同时进行HCV RNA定量分析,比较其与干扰素疗效的关系。结果7例干扰素治疗有效者的异源双链杂交电泳分析大部分<3带,平均为(2.37±0.89)带;而13例干扰素治疗无效者的结果均>3带,平均(4.75±0.92)带;两者比较差异有非常显著性(P<0.01);且准种数量与治疗前HCV RNA水平呈显著正相关(r=0.35,P<0.01)。结论干扰素的疗效与HVR1准种变异密切相关,有效者准种变异的程度明显低于无效者,即患者治疗前HCV准种变异较少者,HCV病毒易于被清除;采用异源双链杂交电泳法(HMA)检测HVR1区准种变异,对预测慢性丙型肝炎干扰素疗效有一定的实用价值。

皖南地区丙型肝炎病毒治疗前后HVR1区碱基变异数量的研究

目的研究皖南地区丙型肝炎病毒治疗前后高变区1(HVR1)碱基变异数量与病情变化和治疗效果之间是否具有相关性。方法应用速率法和荧光定量PCR法,检测皖南地区141例慢性丙型肝炎患者血清ALT水平和HCV RNA的载量。应用RT-PCR法进行HCV基因型和治疗前后的HVR1区域序列的检测。结果 141例患者的血清ALT与HCV RNA两指标间采用Spearman等级相关分析显示,rs=0.213,P=0.011,差异具有统计学意义,存在正相关。通过HCV基因1型、2型和未分型3组的HVR1碱基变异数量的单因素方差分析,显示组与组之间差异具有统计学意义。结论慢性丙型肝炎患者治疗前后的HVR1序列碱基变异数量的分析,对治疗效果、病情变化及预后发展等方面的评估具有重要的指导意义。