酶联免疫双抗原夹心法检测HCV抗体的应用与分析

目的通过对第四代双抗原夹心法HCV抗体检测试剂进行系列验证以及与第三代间接法HCV抗体检测试剂的平行比对,分析双抗原夹心试剂的检测性能。方法于2020年10月13日—2021年12月31日在淮安市中心血站用第四代试剂检测室内质控品、参考血清盘等样本,分析其重复性、批内和批间精密度以及敏感性和特异性等;运用第三代和第四代HCV抗体检测试剂平行检测同期无偿献血者标本等,比较其检测特异性和灵敏度。结果第四代试剂阴、阳性对照检测符合率100%;批内检测精密度4.36%,批间检测精密度6.88%;在确证试验结论为阳性的11例标本检测中,第四代试剂检测出9例,第三代试剂检测出3例,差异有统计学意义(χ^(2)=3.342,P<0.05);在确证试验结论为阴性的83237例标本中,第四代试剂检测假阳性12例,第三代试剂检测假阳性95例,差异有统计学意义(χ^(2)=32.238,P<0.05)。结论第四代双抗原夹心法HCV抗体检测试剂的重复性、灵敏度和特异性均明显高于第三代间接法HCV抗体检测试剂。

HCV抗原检测与HCV—RNA和HCV抗体检测的比较研究

目的评价丙型肝炎病毒核心抗原（HCV抗原）、丙型肝炎病毒抗体（HCV抗体）及丙型肝炎病毒RNA（HCV—RNA）三种检测方法在丙型肝炎实验室诊断中的作用。方法HCV抗原采用双抗体夹心法；HCV-RNA采用实时荧光定量PCR技术（RT—PCR），HCV抗体采用酶联免疫技术（间接法），对44例HCV抗体阳性标本进行HCV抗原和HCV-RNA检测。结果在HCV抗体阳性标本中，HCV抗原阳性检出率为43．2％，HCV-RNA阳性检出率为82．5％；在HCV—RNA阳性标本中，HCV抗原阳性检出率为45．5％。结论三种丙肝标志物中，实时荧光定量PCR技术检测HCV-RNA是判断丙肝感染最可靠的方法而HCV抗原诊断丙肝，仍有54．5％的漏检率，其应用于临床还有距离。所以在没有条件应用实时荧光定量PCR技术检测HCV-RNA的医院，在用HCV抗原对HcV抗体阳性标本进行确认，来判断HCV既往感染或现症感染时，应结合肝功能指标及临床表现以明确诊断。

慢性丙型肝炎患者血清中HCV核心抗原的定性检测

目的:应用酶联免疫吸附试验(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)定性检测血清中丙型肝炎病毒(hepatitisCvirus,HCV)核心抗原,分析和评价HCV核心抗原检测的临床价值。方法:应用ELISA方法定性检测慢性丙型肝炎患者149份血清中的HCV核心抗原,以健康人血清20份,慢性乙型肝炎患者血清20份作为对照,以证明方法的特异性;并同时应用RT-PCR和ELISA方法分别检测血清中的HCVRNA和抗HCV。结果:健康人血清和慢性乙型肝炎患者血清HCV核心抗原定性检测均呈阴性反应,检测值(OD值)分别为0.022±0.017,0.001±0.012;149份慢性丙型肝炎患者血清HCV核心抗原阳性者74例,阳性率49.66%,阳性检测值(OD值)为0.534±0.457,与阴性检测值比较其差异有统计学意义。HCVRNA和HCV核心抗原检测有54.36%的符合率,两种检测方法之间检测的差异性无统计学意义(P>0.05)。149份抗HCV阳性血清中HCVRNA阳性率为55.03%(82/149),HCV核心抗原阳性率为49.66%(74/149),两者比较无统计学意义(P>0.05)。结论:HCV核心抗原定性检测特异性强,慢性丙型肝炎患者血清中阳性率为49.66%,与HCVRNA有一定的相关性,可能也是反映HCV病毒血症的血清学标志。与HCVRNA同时检测,可提高对慢性丙型肝炎患者的病毒血症和病毒复制诊断率,但其检测的灵敏性还有待进一步提高。

关于HCV不同区段抗原的反应性研究

目的 探讨各种丙型肝炎病毒 (HCV)抗原在诊断中的作用及其与HCVRNA的关系。方法 利用HCV不同区段抗原抗 -HCV酶联免疫试验 (EIA)和逆转录聚合酶链反应法 (RT PCR) ,对不同临床型HCV患者进行检测。结果 各组患者均以抗 NS3和抗 C阳性率最高。但均有一定比例患者抗 NS4和抗 NS5阳性。与各单个片段抗 HCV阳性率相比 ,抗 HCV总抗体阳性率最高。结论 NS3和C抗原在检测抗 HCV中起很重要作用 ,但NS4和NS5抗原在抗 HCVEIA中的作用也不容忽视。联合应用不同区段HCV抗原将大大提高抗 HCVEIA试剂的灵敏度。

HCV抗体阳性样品核酸及核心抗原检测分析

目的对90份临床检测为丙型肝炎病毒抗体(HCV-Ab)阳性样品检测其核心抗原(HCV-cAg)、荧光定量PCR,观察3者间的相关性。方法采集临床诊断为HCV-Ab阳性样品90份,分别用市售的HCV-cAg检测试剂盒、荧光定量PCR检测试剂盒、HCV-Ab检测试剂盒进行3种指标的检测复核。结果 90份临床HCV-Ab阳性样品,检出HCV-cAg阳性25份(27.8%),荧光定量PCR检出67份阳性(74.4%),抗体复核阳性的75份(83.33%);检出率HCV-Ab(83.33%)>荧光定量(74.4%)>HCV-cAg(27.8%)。结论丙肝的3种标志物之间存在一定的联系,但不同试剂的检测结果间存在明显差异。

^(60)Co辐照聚苯乙烯微孔板在抗-HCV ELISA中的应用

为了探讨印60Coγ射线辐照对聚苯乙烯微孔板吸附小分子多肽的影响,建立了检测抗-丙型肝炎病毒 (Hepatitis C virus,HCV)的间接酶联免疫法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)。分别用未经辐 照处理、紫外线(Ultraviolet ray,UV)辐照处理和60Co辐照处理的微孔板吸附重组HCV抗原,再配以辣根 过氧化物酶标记的羊抗人IgG,考察其灵敏度、特异性、均一性和稳定性等相关指标。实验结果表明,经 8 kGy60Co辐照处理的聚苯乙烯微孔板可改善酶联免疫法的测定效果,检测灵敏度和均一性均有所提高。

ECLIA与ELISA法检测献血者HBsAg、抗-HCV和HIV抗原/抗体的一致性分析

目的探讨电化学发光免疫分析法(ECLIA)在献血者血液检测中的应用模式。方法以2016年12月—2017月11月东莞市中心血站33 493(人)份献血者血液标本为研究对象,先用ELISA法:分别用2种不同厂家的HBs Ag试剂(B1和B2)、抗-HCV试剂(C1和C2)和HIV抗原/抗体试剂(I1和I2)检测2遍;2017年7月前主要挑选任1次ELISA(试剂)检测结果为'S/CO≥0. 3'的标本做ECLIA检测(挑选模式),7月后所有标本平行检测(不挑选模式),分析ECLIA与ELISA(试剂)检测结果的一致性;比较ECLIA'挑选模式'和'不挑选模式'中ELISA无反应性标本(S/CO<0. 9)的ECLIA阳性检出率,评价ECLIA作为补充检测模式的效果。结果 ECLIA与2种ELISA(试剂)检测献血者3项血液学指标结果一致性与阳性检出率:HBs Ag一致性极好(К≥0. 9),阳性率分别为2. 894%(322/11 127)与2. 642%(B1:294/11 127)、3. 020%(B2:336/11 127)(P>0. 05);抗-HCV一致性较高(К>0. 6),阳性率分别为0. 395%(67/16 978)与同为0. 224%(C1和C2相同:38/16 978)(P<0. 01);HIV抗原/抗体一致性较差(0. 3<К<0. 4),阳性率分别为0. 499%(69/13 837)与0. 238%(I1:33/13 837)、0. 289%(I2:40/13 837)(P<0. 01)。ECLIA'不挑选'与'挑选'2种检测模式的阳性率比较:HBs Ag为0. 07%(4/5 678) vs 0. 441%(22/4 988)(P<0. 01),抗-HCV为0. 169%(28/16 528) vs 1. 176%(4/340)(P <0. 01),HIV抗原/抗体为0. 377%(51/13 542) vs 0. 649%(1/154)(P>0. 05)。结论在献血者血液筛查中,ECLIA与ELISA的HBs Ag和抗-HCV检测结果一致性好,HIV抗原/抗体的结果一致性较差;'挑选模式'中HBs Ag和抗-HCV的ECLIA阳性检出率较高,ECLIA的应用模式有待进一步研究。

酶联法抗-HCV和HCV-cAg联检对丙型肝炎实验室诊断的应用价值

目的:探讨联合丙型肝炎病毒核心抗原(HCV-cAg)及抗-HCV抗体酶联免疫检测对丙型肝炎实验室诊断的应用价值。方法:289份血清标本按抗-HCV阳性、弱阳性、阴性及HCV-cAg阳性、弱阳性及阴性分组,用PCR扩增法检测其HCV RNA含量。结果:单项抗-HCV阳性及弱阳性标本其HCV RNA检测阳性符合率分别为87.7%和70%。联合抗-HCV和HCV-cAg酶联免疫检测结果为阳性或弱阳性者其HCV RNA阳性符合率均>90%。结论:酶联免疫方法联合检测抗-HCV及HCV-cAg,有利于HCV感染的早期诊断,提高其检出率,缩短窗口期,具有较高的临床应用价值。

HGV/GBV-C与HCV混合感染者肝组织中相关病毒表达的免疫组化研究

目的 了解HGV/GBV C与HCV混合感染者肝组织中HGV/GBV C相关抗原的分布状况 ,探讨HGV/GBV C对肝脏的损害机制。方法 以抗HGV/GBV CNS5单克隆抗体或抗HCVNS3单克隆抗体为试剂 ,采用免疫组织化学方法检测肝炎病人肝组织中HGV/GBV C、HCV相关抗原表达。结果 5 6例肝炎病人肝组织中HGV/GBV C相关抗原表达阳性率为 2 6 .79% (15 / 5 6 ) ;HCVNS3抗原表达阳性率为 39.2 9% (2 2 / 5 6 )。HGV/GBV CNS5抗原表达阳性信号主要位于肝细胞胞浆中 ,染色阳性细胞周围可见淋巴细胞浸润。结论 肝细胞中存在HGV/GBV C相关抗原表达 ,其编码产物可能作为一种靶抗原 ,诱发免疫病理反应 。

HGV/GBV-C与HCV混合感染者肝组织中相关病毒抗原表达

庚型肝炎病毒(HGV/GBV-C)的致病性是目前研究焦点之一,多数研究表明大多数HGV/GBV-C感染者体内常有两种或两种以上的肝炎病毒混合感染,并认为HGV/GBV-C感染对原有乙型肝炎病毒(HBV)或丙型肝炎病毒(HCV)感染的基础病变似无明显影响,但仅从血清学、临床表现及常规病理角度试图说明HGV/GBV-C对机体有无损害的研究工作是很困难,我们应用免疫组织化学技术对HGV/GBV-C与HCV混合感染者肝组织中HGV/GBV-C。HCV相关抗原表达进行研究,试图从免疫病理学角度探讨HGV/GBV-C对机体肝脏的致病性。 1

HBsAg、抗-HCV反应性无偿献血者归队检测模式探讨

目的：探讨深圳地区无偿献血人群因血液筛查检测 HBsAg 或抗-HCV 呈阳性反应，在规定的条件下允许其再次招回重新检测，以确定是否恢复其献血资格并重新归队献血的检测模式。方法对深圳市2007年10月至2013年12月期间无偿献血人群捐血后 HBsAg、抗-HCV 初筛反应性人员，且符合我中心制定的再次招回重新检测的献血人群进行分析研究，对无偿献血者归队模式的可行性进行探讨。结果2007～2013年期间共计415759人次，HBsAg 检测阳性2506例，抗-HCV 检测阳性1357例，阳性率分别为0.60％和0.33％。笔者对符合召回条件的59例 HBsAg 和16例抗-HCV 阳性反应的多次献血者启动了归队检测的召回流程，HBsAg、抗-HCV 项目分别有31例和9例成功完成检测流程检测项。其中29例曾经 HBsAg 呈阳性反应的献血者重新恢复献血资格，2例因后续检测不合格被屏蔽献血资格，而9例曾经抗-HCV 阳性反应而召回献血者全部恢复其献血资格。结论在现有检测模式下，血液筛查的检测技术手段很难避免因试剂、设备、人员操作等原因造成假阳性反应的发生。为了保护无偿献血人群的献血资格，必须建立一套科学、合理并具有实际操作性的献血者归队检测模式，以保护有限的无偿献血资源。

HCV抗原表位预测

应用网络生物信息资源查找丙型肝炎病毒基因组全序列 ,用软件Lasergene中的EditSeq将来自中国河北株mRNA序列翻译为氨基酸序列 ,尔后用程序Protean进行氨基酸序列分析 ,对HCV各区段的B细胞抗原指数进行预测。同时又在两个网站对中国汉族人中频率较高的HLA基因型进行CD8和CD4T细胞表位预测。

丙型肝炎病毒核心抗原检测在临床诊断HCV感染的价值

目的:评估丙型肝炎病毒核心抗原(HCVcAg)诊断试剂在临床运用对HCV感染的诊断价值。方法:对临床214例确认HCV感染者、60例健康体检者、40例非HCV感染的其他肝炎患者同时检测HCVcAg、抗HCV和HCV RNA,并对78例HIV感染者进行HCV感染筛查,分析HCVcAg试剂的敏感性、特异性。结果:214例确认丙肝患者HCVcAg检测162例(75.7%)阳性,且HCV RNA水平越高,HCVcAg检出率也越高。当HCV RNA载量>106/ml时,HCVcAg与HCV RNA检测的符合率达98.7%;60例健康对照和40例非HCV感染的各种肝炎HCVcAg检测均为阴性,显示了HCVcAg对诊断HCV感染得高度特异性。对78份HIV感染者样本进行HCV RNA测定,有16例阳性,以HCVcAg法测定有15例阳性,以抗HCV法测定仅有9例阳性。结论:HCVcAg可作为HCV感染诊断的血清病毒标志物,也可用于使用免疫抑制剂,抗HCV产生受到抑制的患者,以及在一些不具备开展PCR的医院实验室作为HCV RNA检测的替代试验。

HCV抗原检测与HCV-RNA及HCV抗体检测的比较研究

目的评价HCV抗原检测在临床的应用价值。方法用HCV抗原酶联法检测试剂盒对临床送检HCV-RNA及HCV抗体的血标本进行检测,并分析结果。结果39例HCV-RNA阳性标本中,HCV抗原阳性28例(71.8%);116例HCV-RNA阴性标本中,HCV抗原阳性1例(0.86%);96例HCV抗体阳性标本中HCV抗原阳性47例(48.96%),HCV抗体阴性106例中,HCV抗原均为阴性。结论现有HCV抗原检测试剂盒尚不适合作临床丙型肝炎的筛选,但可作为HCV抗体检测的进一步验证,部分程度地替代HCV-RNA检测。

从HCV核心蛋白噬菌体随机展示肽库中筛选抗原表位

目的探讨病毒抗原序列研究的新方法。方法应用噬菌体展示技术，筛选ＨＣＶ核心蛋白的抗原序列。用抗－ＨＣＶ核心抗体单独阳性的血清，对巳构建的ＨＣＶ核心蛋白噬菌体随机展示肽库进行４轮筛选，检测筛选阳性的克隆数、插入阳性率和杂交阳性率来评价筛选的效果。测定和分析７个杂交阳性克隆的ＤＮＡ序列。结果所测定的７个序列中，６个为ＨＣＶ核心蛋白序列，其中５个被正确地展示于噬菌体表面，１个可能被正确展示，这些序列均含有重要的ＨＣＶ核心抗原表位。另１个为大肠杆菌ｎｒｆａ基因。结论噬菌体展示技术完全可应用于病毒蛋白抗原序列的筛选，并具有简便、快速、准确的优点。

丙肝抗体阳性患者血清中HCV核心抗原的检测

目的:应用ELISA方法检测丙肝抗体阳性血清标本中的HCV核心抗原,分析和评价HCV核心抗原检测的在献血员筛查中的意义。方法:对丙肝抗体弱阳性标本14例和强阳性标本9例和阴性标本18例,用ELISA方法检测标本中的HCV核心抗原。结果:14例弱阳性标本中有10例HCV核心抗原为阳性,9例强阳性标本中仅有1例HCV核心抗原为阳性,18例阴性标本中有1例HCV核心抗原为阳性。结论:HCV核心抗原检测必须结合HCV抗体检测,仅用HCV核心抗原检测会漏检HCV抗体强阳性的标本。

肝癌中HBV和HCV基因和抗原的分布及意义

采用原位分子杂交方法检测HCVRNA及HBVX基因 ;采用免疫组织化学方法研究HCV核心抗原 ,非结构区C33c抗原及HBxAg在肝细胞肝癌中的定位及分布。结果表明 (1)HCVRNA、HBVX基因在肝细胞肝癌组织检出率分别为 4 0 % (5 5 / 136 )和 82 % (112 / 136 )。HCVRNA定位于癌细胞的胞浆内 ,阳性细胞呈散在、灶状及弥漫分布三种形式 ;HBVX基因在肝癌细胞中的分布呈胞浆型、核型及核浆型 ,阳性细胞也呈上述三种分布形式 ;(2 )HCVC33c抗原、核心抗原在肝细胞肝癌中的阳性率为 81% (133/ 16 4 )及 86 % (14 1/ 16 4 )。C33c抗原定位于癌细胞及肝细胞的胞浆内 ;核心抗原既定位于癌细胞核中 ,又可定位于胞浆中。C33c抗原阳性细胞以灶状分布为主 ;而核心抗原阳性细胞在癌组织以弥漫核阳性常见 ,在癌旁肝组织以胞浆阳性为主 ;(3)HBxAg在肝细胞肝癌中的检出率为 75 % (12 3/16 4 ) ,C33c和HBxAg二者同时阳性占 6 3% (10 3/ 16 4 )。HCV感染在我国肝细胞肝癌中比较普遍 ,HCV和HBV重叠感染占相当比例 。

SDS在HCV基因工程抗原包被中的应用研究

在间接EL ISA法检测HCV抗体过程中,通过使用含有十二烷基硫酸钠(SDS)的包被液对HCV基因工程抗原固相化,发现使用SDS提高了HCV间接EL ISA法诊断试剂检测的阳性标本和阴性标本的偏比,改善了反应模式,为改善HCV-EL ISA法诊断试剂的质量提供了有效途径.

输血前患者血HBsAg、抗HCV、抗HIV和梅毒抗体检测结果临床研究

目的:观察输血前患者血乙肝表面抗原(HBsAg)、丙肝抗体(抗HCV)、艾滋病抗体(抗HIV)和梅毒抗体检测结果。方法:取医院输血治疗患者3542例,治疗前对患者采用化学发光免疫测定(CLIA)法和ELISA法检测血清标本中血HBsAg、抗HCV、抗HIV和梅毒抗体指标,分析其检测结果并提出相应的解决对策。结果:3542例输血患者中704例血HBsAg阳性,52例抗HCV阳性、3例抗HIV阳性,200例梅毒抗体阳性;男性血HBsAg、抗HCV、抗HIV和梅毒抗体感染率,高于女性(P<0.05)。3542例输血患者中不同年龄段均存在血HBsAg、抗HCV、抗HIV和梅毒抗体感,对于血HBsAg、抗HCV多发生在21~40岁年龄段;抗HIV多发生在41~60岁年龄段;梅毒抗体发生在41~>60岁年龄段。959例血HBsAg、抗HCV、抗HIV和梅毒抗体感染病例分布科室较多,排在前三位分别为消化内科、普外科及肿瘤科,分别占33.98%、20.96%及17.00%。结论:输血前加强患者血HBsAg、抗HCV、抗HIV和梅毒抗体指标检测,能降低血液传染性疾病发生率,值得推广应用。