丙型肝炎病毒Ⅱ型阳性PBMC永生化细胞株的生物学特性

目的 观察丙型肝炎病人外周血B细胞长期存活状态下其中是否仍有丙型肝炎病毒(HCV)存在 ,探讨建立HCV体外复制细胞模型的可能性。方法 利用EB病毒转化B淋巴细胞技术 ,建立丙型肝炎患者外周血单个核细胞 (PBMC )HCV阳性传代细胞株 (LCL) ,并应用细胞培养、染色体显示、流式细胞荧光染色、逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)、免疫组化、原位RT PCR及电镜等技术研究其分子生物学和免疫学特性。结果 (1)LCL细胞核型 47,XX ,+mar,细胞表面CD19、CD2 0抗原阳性 ,CD2 1分子消失。 (2 )传代培养细胞中HCVRNA正链持续 12个月阳性 ,而培养上清中则呈间断性阳性 ,无明显规律。HCVRNA负链在LCL细胞中也呈间断阳性。HCV基因分型为Ⅱ型株。 (3)免疫组化、原位PCR和电镜发现HCV抗原蛋白、HCVRNA和病毒颗粒均存在于LCL细胞浆中 ;电镜发现HCV病毒颗粒呈圆球型 ,双层膜结构 ,定位于细胞胞质空泡内。直径多为 45～ 70nm ,个别为 110nm。结论 HCV可以在EB病毒转化病人B细胞株中长期存活、复制和分泌。