严密型四环素调控系统调控的表达HCV-C基因双转基因小鼠模型的建立

目的制备严密型四环素调控系统调控下表达丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV-C)基因的双转基因小鼠,为进一步阐明核心蛋白Core与HCV感染所致的疾病以及与肝细胞癌发生的关系奠定基础。方法严密型四环素调控部分(ApoE-rtTA-tTS)转基因阳性鼠和反应部分(TRE-HCV-C)转基因阳性鼠交配产生仔鼠,经PCR和Southern blot分析筛选出阳性鼠,免疫组织化学检测HCV-C蛋白双转基因小鼠肝组织内表达情况及其肝脏的病理变化。结果得到了2只携带有两种基因(tTS和HCV-C)的双转基因小鼠,成功制备了严密型四环素调控系统的HCV-C双转基因小鼠。结论结果表明,所建立的严密型四环素调控系统在动物模型中是可行的和有效的,它消除了普通四环素调控系统存在的本底泄漏表达的缺点,是HCV-C基因功能研究及与肝细胞癌的关系的机制研究的一个有用工具。

HBVX基因-HCVC基因cDNA融合基因真核表达载体的构建及其表达

目的 构建HBVX HCVC融合基因真核表达载体 ,并获得稳定表达该基因的HepG2细胞株。方法 双酶切质粒pXT1 X ,得到完整的HBVX基因片段后 ,将其插入到质粒PBK CMV和PBK HCVC的相应酶切位点 ,得到重组质粒PBK X和PBK X C ;再将质粒RBK CMV、PBK X、PBK HCVC和PBK X C分别导入肝癌细胞株HepG2中 ,G418筛选 ,RT PCR、蛋白印迹鉴定HBVX和HCVC蛋白表达。结果 质粒PBK CMV、PBK X、PBK HCVC和PBK X C在HepG2细胞中有稳定表达。结论 成功构建HBVX HCVC融合基因真核表达载体 。