慢性丙型肝炎合并非酒精性脂肪肝患者血清25(OH)D水平变化及其与HCV-RNA载量、糖脂代谢的关系

目的 探讨慢性丙型肝炎(CHC)合并非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者血清25-羟维生素D[25(OH)D]水平及其与HCV-RNA载量、糖脂代谢的关系。方法 选取2018年9月至2021年9月医院收治CHC患者174例,根据是否合并NAFLD分为单纯CHC组(110例)和CHC-NAFLD组(64例),选取同期体检健康成人87例(健康组),使用酶联免疫吸附法检测纳入对象血清25(OH)D水平,生化分析检测糖脂代谢指标,荧光定量PCR法检测CHC患者HCV-RNA载量,spearman相关性分析血清25(OH)D水平与HCV-RNA载量、糖脂代谢指标水平的相关性,logistics回归分析CHC合并NAFLD的危险因素。结果 CHC-NAFLD组、CHC组患者中BMI≥28kg/m^(2)比率、HbA1c、FBG、INS、IR、TG和LDL-C水平显著高于健康组(P<0.05),血清25(OH)D水平显著低于健康组(P<0.05)。CHC-NAFLD组BMI≥28kg/m^(2)比率、HbA1c、FBG、INS、IR、TG、LDL-C水平和HCV-RNA载量显著高于CHC组(P<0.05),血清25(OH)D水平显著低于CHC组(P<0.05)。25(OH)D水平与HbA1c、FBG、IR、TG水平呈负相关(r=-0.426、-0.387、-0.406、-0.514,P<0.001)。25(OH)D<42 nmol/L、BMI≥28 kg/m^(2)、TG≥1.72 mmol/L、HCV-RNA载量≥3.5×10^(6) IU/mL是CHC患者合并NAFLD的危险因素(P<0.05)。结论 CHC合并NAFLD患者血清25(OH)D水平降低,25(OH)D水平与HbA1c、FBG、IR、TG呈负相关且其水平升高会增加CHC患者发NAFLD发生风险。

25羟基维生素D_(3)水平HCV-RNA载量及MPR对HCV感染患者抗病毒治疗效果的影响

目的探讨25羟基维生素D_(3)[25-(OH)D_(3)]水平、HCV-RNA载量、平均血小板体积和血小板计数比率(MPR)对丙型肝炎病毒(HCV)感染患者抗病毒治疗效果的影响。方法回顾性分析104例HCV感染患者的病例资料,根据抗病毒治疗效果分为持续应答组47例和非持续应答组57例。比较持续应答组和非持续应答组患者的临床资料,以及治疗前血清25-(OH)D_(3)水平、HCV-RNA载量、MPR的差异。采用多因素Logistic回归分析探讨抗病毒治疗效果的影响因素,并采用受试者工作特征(ROC)曲线分析影响因素对治疗效果的联合预测价值。结果持续应答组患者年龄、体质量指数、HCV-RNA载量和MPR低于非持续应答组,血清25-(OH)D_(3)水平高于非持续应答患者(P<0.01)。Logistic回归分析结果显示,年龄、HCV-RNA载量和MPR是HCV感染患者抗病毒治疗效果的危险因素(P<0.01),血清25-(OH)D_(3)水平是保护因素(P<0.01)。ROC曲线分析结果显示,年龄、血清25-(OH)D_(3)水平、HCV-RNA载量、MPR联合预测HCV感染患者抗病毒治疗效果的曲线下面积为0.850(P<0.05),灵敏度和特异度分别为77.00%和86.00%。结论血清25-(OH)D_(3)水平、HCV-RNA载量、MPR在预测HCV感染患者抗病毒治疗效果方面有一定的价值,值得临床进一步研究。

国产高敏HCV-RNA定量试剂与国产普敏及进口高敏试剂一致性分析

目的分析国产高敏HCV-RNA核酸检测试剂与国产普敏、进口高敏HCV-RNA核酸检测试剂的一致性。方法选取2021年1月至9月中国科学技术大学附属第一医院感染病医院检验科收录的丙肝患者临床样本165例,分别采用国产高敏HCV-RNA核酸检测试剂A与国产普敏HCV-RNA核酸检测试剂B进行HCV-RNA定量检测,对两种HCV-RNA定量检测试剂定量结果均为阳性的样本(≥500 IU/mL,87例)进行Bland-Altman一致性分析;选择稀释样本(15~500 IU/mL,60例),采用国产高敏HCV-RNA核酸检测试剂A与进口高敏HCV-RNA核酸检测试剂C进行HCV-RNA平行定量检测,对两种HCV-RNA定量检测试剂定量结果进行Bland-Altman一致性分析。结果Bland-Altman分析显示试剂A与试剂B定量值差值均值为(-0.0326)log_(10)IU/mL,95%置信区间为(-0.4626~0.3974)log_(10)IU/mL,95.4%(83/87)的样本检测值在95%置信区间内。试剂A与试剂C定量值差值均值为0.1800 log_(10)IU/mL,95%可信区间为(-0.0907~0.4506)log_(10)IU/mL,96.67%(58/60)的样本检测值在95%置信区间内。结论国产高敏定量试剂A与国产普敏定量试剂B在≥500 IU/mL检测结果具有一致性,国产高敏定量试剂A与进口高敏定量试剂C在15~500 IU/mL具有检测结果高度一致性。

Gentier96全自动医用PCR分析系统检测HBV-DNA及HCV-RNA的性能验证

目的 对实验室新购入设备Gentier96全自动医用PCR分析系统使用HBV-DNA及HCV-RNA定量检测项目进行性能验证。方法 通过检测HBV-DNA及HCV-RNA定量检测项目,对精密度、正确度、线性范围及抗干扰能力进行验证和评价。结果 该系统检测低水平和高水平HBV-DNA的实验室变异系数(CV)分别为4.12%、1.27%。低水平和高水平HCV-RNA的实验室变异系数(CV)分别为4.75%、1.46%。HBV-DNA国家标准物质GBW(E)090137(浓度编号S5)靶值的对数值3.15、GBW(E)090139(浓度编号S2)靶值的对数值6.66。HCV-RNA国家标准物质GBW(E)090140(浓度编号S5)靶值的对数值3.34、GBW(E)090142(浓度编号S3)靶值的对数值5.64,实测值与靶值的差异均在±0.4对数值范围内。该分析系统HBV-DNA定量检测在4.69×10~2.04×109范围内呈线性,线性回归方程为Y=0.9884X+0.1452,R2=0.9994。HCV-RNA定量检测在3.47×10~2.33×107范围内呈线性,线性回归方程为Y=0.9548X+0.3302,R2=0.9997。干扰物质血红蛋白(Hb)样本与对照组样本偏倚<±7.5%,表明常见抗干扰物质血红蛋白(Hb)浓度≤2g/dL时对HBV-DNA和HCV-RNA定量检测结果无影响。结论 Gentier96全自动医用PCR分析系统检测HBV-DNA及HCV-RNA已达到相关标准要求,可用于样本检测。

抗HCV及HCV-RNA在丙型肝炎中的变化对丙型肝炎特异性诊断的影响

抗HCV及HCV-RNA是目前诊断丙型肝炎常用的方法,本文用PCR方法及第二代ELISA试剂动态观察100例疑诊丙型肝炎患者HCV-RNA及抗HCV,结果提示,上述两种方法仍为目前敏感性和特异性较高的方法,同时发现动态观察可避免因抗HCV产生较晚、HCV-RNA在血液中的阶段性及病毒基因变异对诊断的影响,从而提高诊断可靠性。

丙型病毒性肝炎患者唾液、尿液、精液HCV-RNA的检测

有确切输血史、血丙肝抗体及核酸均阳性的５０例急、慢性丙肝（急性肝炎２２例、慢性肝炎２３例、肝炎肝硬变５例）患者的唾液、尿液及精液中的ＨＣＶ－ＲＮＡ（ＰＣＲ）检测的阳性率分别为９００％、５００％及６００％。５例肝炎肝硬变患者均并发腹水，２例尚合并胸水，检测腹水８例次、胸水３例次，ＨＣＶ－ＲＮＡ均阳性。１例行胆道造瘘术的急性丙肝患者瘘管中流出的胆汁检测ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性。２例患者于急性肝炎期，唾液ＨＣＶ－ＲＮＡ阴性，随病情的演变，转变为慢性肝炎后，再次检测，转呈阳性。３例病程在２年以上的男性慢性丙肝患者精液中检出丙肝核酸，采集其女性配偶的血液、唾液和尿液，ＨＣＶ－ＲＮＡ均阳性，血抗－ＨＣＶ亦阳性。该组急性丙肝中７例（２７２％）患者，于入院之初，血抗－ＨＣＶ阴性，而唾液ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性。说明部分急性丙肝的早期，唾液中ＨＣＶ－ＲＮＡ的出现，早于血抗－ＨＣＶ。

慢性丙型肝炎患者自身抗体与HCV-RNA检测结果的分析比较

目的对慢性丙型肝炎患者的自身抗体和HCV-RNA进行检测,分析2者的关联。方法 2017年1月至2018年7月,以在本院治疗的162例慢性丙型肝炎患者作为研究对象。首先对慢性丙型肝炎患者的自身抗体进行检测,检测项目包括ANA、AMA、抗ENA抗体、抗SLA抗体、RF、LC-1和LKM等。同时检测患者的HCV-RNA,然后根据患者自身抗体和HCV-RNA的检测结果,分析两者之间的联系。结果在162例慢性丙型肝炎患者中,91例患者自身抗体检测呈阳性,阳性率为56.17%。118例患者HCV-RNA检测结果呈阳性,阳性率为72.84%。在HCV-RNA检测结果呈阳性的患者中,ANA和抗ENA抗体2项自身抗体的阳性率高于HCV-RNA检测结果呈阴性的患者,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HCV-RNA检测结果呈阳性的患者中,ANA和抗ENA抗体2项自身抗体的阳性率更高,提示慢性乙型肝炎患者自身的免疫反应,与丙肝病毒的复制能力具有一定关联。

实时荧光定量PCR检测血清中HCV-RNA

目的:通过实时荧光定量PCR(FQ-PCR)与逆转录PCR(RT- PCR)两种方法检测血清HCV-RNA的结果比较,评价FQ- PCR法的临床应用价值. 方法:样本为经ELISA法筛选抗HCV阳性血清401份,其中221份采用实时荧光定量PCR法检测,180份采用RT- PCR法检测. 结果:FQ-PCR法检测HCV-RNA,阳性率(≥102拷贝/mL) 68.3%(151/221),定量范围在102-107拷贝/mL之间,但≤106拷贝/ml占98.1%(148/151);RT-PCR法检测阳性率为30%(54/180). 结论:FQ-PCR检测HCV-RNA较RT-PCR是一种省时、简便、敏感、特异和防污染的体外基因扩增与定量检测方法,其结果对临床诊断和疗效观察有重要的指导意义.

荧光定量PCR与RT-PCR技术检测HCV-RNA的比较观察

目的 比较荧光定量 ＰＣＲ与ＲＴ－ＰＣＲ（定性）检测不同检材中的 ＨＣＶ－ＲＮＡ，评价荧光定量ＰＣＲ技术测定ＨＣＶ－ＲＮＡ水平的价值。方法 采用荧光定量ＰＣＲ及 ＲＴ－ＰＣＲ（定性）技术同时检测了７１例血液透析患者的血清、血浆、淋巴细胞、尿液标本中 ＨＣＶ－ＲＮＡ。结果 血清、淋巴细胞、尿液标本中 ＨＣＶ－ＲＮＡ的荧光定量 ＰＣＲ检出率（４６．３８％、８５．５１％、８０．００％），分别高于相应标本中ＨＣＶ－ＲＮＡ的ＲＴ－ＰＣＲ（定性）阳性率（２４．６４、２８．９９％、２０．００％），有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。血清、淋巴细胞中同时检出ＨＣＶ－ＲＮＡ的一致率，荧光定量ＰＣＲ法（３９．１３％）显著高于ＲＴ－ＰＣＲ定性法（８．７０％）（Ｐ＜０．００１）。ＨＣＶ－ＲＮＡ的ＲＴ－ＰＣＲ定性阳性率不随 ＲＮＡ定量水平均高而增高。结论与 ＲＴ－ＰＣＲ（定性）相比，荧光定量ＰＣＲ技术检测

丙型肝炎患者外周血单个核细胞中HCV-RNA含量检测的临床意义

目的:了解丙型肝炎(丙肝)患者外周血单个核细胞(PBMC)中丙肝病毒核酸(HCV-RNA)的存在情况并探讨其临床意义。方法:应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法,对65例丙肝患者的血清和PBMC中HCV-RNA进行检测。结果:65例丙肝患者血清和PBMC中HCV-RNA阳性分别为41例(63.1%)和35例(53.8%),其中34例急性丙肝患者血清、PBMC中HCV-RNA阳性分别为21例(61.8%)、13例(38.2%),31例慢性丙肝患者血清、PBMC中HCV-RNA阳性分别为20例(64.5%)、22例(71.0%),慢性丙肝患者PBMC中HCV-RNA检出率与急性相比,差异有统计学意义(2χ=5.74,P<0.05)。3例(2例慢性、1例急性)丙肝患者PBMC中HCV-RNA阳性,但血清HCV-RNA阴性。9例(全为急性)丙肝患者PBMC中HCV-RNA阴性,但血清HCV-RNA阳性。32例(12例急性、20例慢性)丙肝患者血清和PBMC中HCV-RNA均阳性,且PBMC中HCV-RNA的含量均低于血清,两者含量呈正相关。结论:PBMC为HCV肝外贮存场所,其HCV含量依赖血清中HCV的含量;PBMC中HCV在丙肝患者的病情慢性化过程中可能起一定作用;实验室可以通过浓聚血液中PBMC的浓度来提高其HCV-RNA的检出率,故临床医生在对丙肝患者进行血清HCV-RNA定量检测的同时开展PBMC中HCV-RNA检测可以减少漏诊,可作为慢性丙肝患者的选择治疗及预后判断的重要指标。

慢性丙型肝炎患者HCV-RNA含量与CD4^+CD25^+调节性T细胞的相关性研究

目的探讨慢性丙型肝炎(CHC)患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞含量与HCV-RNA的相关性。方法用流式细胞仪检测80例CHC患者和30例健康对照者外周血CD4+CD25+Treg细胞表达,荧光定量PCR检测HCV-RNA含量。结果 CHC患者外周血中CD4+CD25+Treg细胞明显高于健康对照组(P<0.01),且随HCV-RNA载量增高,患者外周血中CD4+CD25+Treg细胞的含量逐渐升高(P<0.01)。CD4+CD25+Treg细胞与HCV-RNA取对数后呈正相关(r=0.588,P<0.01),与ALT呈正相关(r=0.306,P<0.01)。结论 CHC患者外周血中CD4+CD25+Treg细胞增高,且与HCV-RNA含量及ALT升高具有一致性。

北京地区慢性丙型肝炎患者血清HCV-RNA定量检测与基因分型的研究

目的:探讨北京地区慢性丙型肝炎患者血清HCV-RNA定量检测和HCV基因分型的相关性。方法:用荧光定量PCR法检测310例北京地区慢性丙型肝炎患者血清HCV-RNA标本,应用RT-PCR和型特异性引物法对310例标本进行基因分型。结果:在310例标本中,HCV1b型有217例(70%),2a型74例(23.9%),2b型8例(2.6%),1b/2a混合型5例(1.6%),未分型6例(1.9%)。对299例HCV单基因型患者的基因型与性别的相关性进行统计学分析,结果显示没有统计学差异(χ2=0.028,P<0.978)。299例患者的首次血清病毒RNA定量测定与基因型之间有明显的统计学差异(F=16.525,P<0.01)。结论:北京地区丙型肝炎病毒感染以1b型为主,基因型在性别上的分布没有差异。治疗前HCV基因型与体内病毒的含量密切相关。

丙型肝炎患者HCV-RNA感染与血清自身抗体的相关性分析

目的研究丙型肝炎患者HCV-RNA感染与血清自身抗体产生的相关性,进一步探讨丙型肝炎的发病机理。方法对本院消化科220例丙型肝炎抗体IgG（＋）患者进行HCV-RNA检测及抗肝抗原自身抗体谱检测。结果220例患者中,有122例HCV-RNA阳性,阳性率为55.4%,98例患者HCV-RNA阴性,阴性率为44.6%。将其分为两组,丙型肝炎抗体IgG（＋）,HCV-RNA阳性组,测得抗线粒体抗体M2（AMA-M2）阳性9例（7.3%）,抗可溶性肝抗原抗体（SLA）14例（11.47%）,肝抗肾微粒体抗体（LKM-1）阳性26例（21.3%）,抗肝细胞溶质抗原1型（LC-1）阳性7例（5.7%）;丙型肝炎抗体IgG（＋）,HCV-RNA阴性组,测得AMA-M2阳性3例（2.46%）,SLA阳性4例（3.28%）,LKM-1阳性13例（10.65%）,LC-1阳性3例（2.46%）。两组肝抗原抗体谱阳性率差异有统计学意义（χ-2=93.4,P〈0.05）。结论丙肝患者抗肝抗原自身抗体谱检测阳性率与丙肝患者HCV-RNA阳性呈正相关。

实时荧光定量PCR法检测HCV-RNA测量不确定度评价

目的探讨对实时荧光定量PCR法测HCV-RNA测量不确定度评定的合理方式。方法依据Nordtest准则,利用实时荧光定量PCR法检测HCV-RNA室内质控及室间质评标本,收集2012年4～9月的HCV-RNA室内质控数据及2010～2012年室间质评结果。计算其批内及批间变异系数、系统偏倚变异系数,确定其相应的标准不确定度分量,进而计算出其扩展不确定度。结果同一天内12次HCV-RNA室内质控的检测批内变异系数为2.55%,2012年4～9月共155个工作日的HCV-RNA检测批间变异系数为5.80%;2010～2012年卫生部临检中心室间质评共30个检测数据的系统偏倚变异系数为5.04%,剔除8个检测为零的数据后重新计算变异系数为5.97%。批内、批间及系统偏倚的因素合成后,扩展不确定度为16.18%,剔除8个检测为零的数据后为17.16%。结论对实时荧光定量PCR法测HCV-RNA测量不确定度的评价,利用现有室内外质控数据,无须额外测试,简单易行,是医学检验实验室较为实用的一种测量不确定度评价方式,但数据的纳入应考虑方法的特殊性。

保存温度和保存时间对血清HCV-RNA定量检测结果的影响

目的:探索不同保存温度和保存时间对血清HCV-RNA荧光定量检测结果的影响。方法:收集HCV阳性血清标本16份并平均分成6份分别置于室温、4℃和-20℃保存1d和1周后用荧光定量PCR法检测结果,利用SPSS13.0软件对数据进行处理。结果:HCV阳性患者血清在室温(25±2)℃、4℃和-20℃保存1d,各组荧光定量结果无统计学差异(F=0.012,0.447,0.230;P=0.913,0.507,0.796);保存1周,各组结果无统计学差异(F=0.059,0.308,0.184;P=0.808,0.582,0.833);根据温度分组后血清保存1d和保存1周结果无统计学差异(F=0.055,0.000,0.103;P=0.816,0.990,0.751)。结论:血清在室温、4℃和-20℃条件下保存1周对HCV-RNA的荧光定量检测结果无显著影响。

HCV抗体阳性者血清B族载脂蛋白中HCV-RNA表达及与脂质的关系

目的:探讨慢性丙型肝炎患者HCV感染与脂类代谢的关系及特点。方法:采用免疫沉淀法,以羊抗人载脂蛋白B(Apo-B)抗血清沉淀HCV抗体阳性者血清Apo-B,再以PCR技术进行扩增检测Apo-B中HCV-RNA,并设多组阴性对照。结果:实验组15例HCV抗体阳性者血清Apo-B中,14例有HCV-RNA表达,且载量较高,而对照组26例血清及其Apo-B中却没有HCV-RNA表达。结论:HCV抗体阳性者血清Apo-B中检出HCV-RNA,进一步证实了HCV感染与脂质密切相关。

RT-PCR检测HCV-RNA及基因分型的研究

目的研究HCV基因分型的临床意义。方法应用RT－PCR方法检测HCV－RNA。结果150例献血员中抗-HCV6例阳性占40％，应用RT－PCR方法检测HCV－RNA10例阳性占6．6％，对其进行基因分型，其中HCV－Ⅱ型占89％，HCV-Ⅲ型占11％。结论说明我国人群HCV感染以Ⅱ型为主。12例抗-HCV阳性母亲及新生儿的HCV基因分型同属Ⅱ型，证明HCV母婴垂直传播存在。基因分型诊断为选择药物治疗提供科学依据。

血清中HCV抗体与HCV-RNA检测在临床中的应用

丙型病毒性肝炎(丙肝)是由丙型肝炎病毒(HCV)感染所致,是一种世界性的有严重并发症的传染性疾病。丙型肝炎病毒是单链正股RNA病毒,主要在肝脏中复制,感染1~2周内即可在血清中检出HCV-RNA,而3~4周可检出免疫血清标志物(抗-HCV)[1]。目前,临床上常通过检测抗-HCV(IgG)判断是否为丙肝感染,但抗-HCV(IgG)

丙型肝炎病人骨髓单个核细胞中HCV-RNA的检测及其意义

采用逆转录套式PCR法，对20例慢性丙型肝炎患者骨髓单个核细胞中HCV－RNA进行了检测。在20例血清抗NCV阳性及HCV－RNA阳性的患者中，16例骨髓单个核细胞HCV－RNA呈阳性反应，4例为阴性反应，阳性率达80％。结果表明，骨髓单个核细胞中存在HCV，提示骨髓可能是HCV肝外又一感染复制及贮存的场所。并对肝外HCV感染、复制与丙肝慢性化的致病关系，以及临床治疗进行了讨论。