丙型肝炎病毒5’NCR转基因细胞模型及在反义核酸药物筛选和评价中的应用

为了进行以基因为靶的抗丙型肝炎病毒(HCV)药物的筛选及评价,将HCV5＇NCR-C基因与荧光素酶基因的融合基因片段插入pCI-neo表达载体,通过PCR扩增、酶切反应及荧光素酶瞬间表达活性鉴定,获得HCV 5＇NCR调控荧光素酶的稳定表达质粒pHCV-neo4,将其转染HepG2细胞,经C418筛选,从150个克隆中获得一个高荧光素酶活性表达的细胞株HepG2.9706.该株细胞内HCV片段的DNA及mRNA检测均呈阳性,转基因拷贝数为140.利用该细胞株,通过脂质体介导,对3条针对HCV调控基因的反义寡核苷酸(ASODNs)即HCV363,HCV349,HCV279进行了活性评价,结果显示,三种ASODNs均具有特异性的剂量依赖性抑制活性,浓度在0.5μmol/L时,三者对HCV 5＇NCR调控荧光素酶表达抑制率分别为61％,55％及48％.该研究提示反义寡核苷酸有可能成为治疗HCV的新途径.