HCVC区基因在SP2/0细胞及荷瘤小鼠瘤内的表达

目的 观察HCVC区基因在SP2 / 0细胞及荷瘤小鼠瘤内的表达情况 .方法 构建pEF HCVC重组质粒 ,转染SP2 / 0细胞 ,经G4 18进行筛选 ,建立稳定转染pEF HCVC的SP2 / 0细胞系 .并将转染后的SP2 / 0细胞接种于BALB/c小鼠皮下产生浆细胞瘤 .结果 用斑点杂交方法检测转染后的细胞 ,有HCVmRNA .免疫组化检测瞬时转染以及稳定转染的SP2 / 0细胞涂片均发现存在有阳性信号 .另外 ,对瘤组织进行免疫组化检测 ,发现有HCVC蛋白表达 .结论 pEF HCVC重组质粒可以在SP2 / 0细胞中长期稳定表达 ,也可以在BALB/c小鼠浆细胞瘤内表达 .

慢性丙型病毒性肝炎患者肝组织HCVC33c检测

应用免疫组织化学检查了68例慢性丙型肝炎患者肝组织HCVC33c,阳性率为69.2％,其中CPH为41.18％(7/17),CAH71.42％(15/21),CAH.LC76.92％(10/13),LC86.66％(13/15),LC合并HCC100％(2/2)。HCVC33c抗原主要定位于肝细胞浆内,HCVC33c抗原阳性肝细胞呈散在、灶状及弥漫三种形式分布,与肝组织学类型和血清ALT无明显相关。HCVC33c阳性肝细胞周围见较多的淋巴细胞和单核细胞浸润,提示HCV在肝细胞浆内持续复制引起宿主免疫反应,在慢性丙型肝炎发病机理中起着重要的作用。

HCVC基因真核表达重组体的构建

丙型肝炎病毒是丙型肝炎的病原体,对该病毒的研究已取得了很大的进展.但是在丙型肝炎的发病机理、防治研究上仍存在着许多困难,主要原因是缺乏理想的丙型肝炎的模型,其中包括细胞模型.本文将1693bp的Hcv的结构区基因构建于哺乳动物细胞表达载体,为进一步建立HCV的细胞模型奠定基础.

HCVC区DNA疫苗的研究现状

1974年Golafield首先报告输血后非甲非乙型肝炎,1989年Choc et al应用分子克隆技术获得本病毒基因克隆,并命名本病及其病毒为丙型肝炎(Hepatitis C)和丙型肝炎病毒(HCV),由于至今尚未分离到病毒颗粒,使得必须以可得到的病毒核酸成分进行重组、表达蛋白,进而进行疫苗研究。本文详细阐述了HCVC区基因结构、HCVC蛋白功能以及HCV-C区DNA疫苗方面的内容及进展,以期为将来进一步的研究提供帮助。

重组质粒pEGFP-C3-HCVc的构建及在RBE细胞中的表达

目的构建重组p EGFP-C3-HCVc真核表达载体,并建立稳定表达HCVc基因的肝内胆管癌细胞株RBE-core。方法采用PCR钓取目的基因HCVc,并克隆入p EGFP-C3的多克隆位点,构建p EGFP-C3-HCVc重组质粒。经过双酶切及测序验证后,采用脂质体将p EGFP-C3-HCVc质粒转染到RBE细胞中,经2周G418(200μg/m L)筛选后进行单克隆挑选及扩大培养,建立稳定表达HCVc的胆管癌细胞株RBE-core。采用RT-PCR和Western blot验证HCVc在RBE-core中的表达情况。结果 PCR成功钓取HCVc基因,大小约573 bp,并插入p EGFP-C3载体HindⅢ和Bam HⅠ多克隆位点;双酶切及测序证实目的基因HCVc正确连接到p EGFP-C3的多克隆位点。RT-PCR和Western blot分别在573 bp处和34 KD左右检测到相应的阳性条带。结论成功构建重组质粒p EGFP-C3-HCVc,并在胆管癌细胞RBE中获得稳定表达。

丙型肝炎病毒核心蛋白对HePG_2细胞增殖和细胞周期的影响

目的 观察核心蛋白对细胞增殖和细胞周期调控的影响。方法 观察表达HCV核心蛋白的细胞株HePG2 C和作为对照的细胞株HePG2 CMV的细胞形态 ;绘制细胞生长曲线 ;检测细胞周期 ;用流式细胞仪、免疫组化染色检测PCNA ,P16 ,P2 7,P5 3;半定量RT PCR检测P16 ,P2 7,P5 3mRNA。结果 转染重组质粒PBK HVCC的HePG2 C细胞与转染空载体PBK CMV的HePG2 CMV细胞相比细胞形态未见明显变化。生长曲线显示HePG2 细胞在转染PBK HCVC和空载体PBK CMV后 ,生长速度无明显变化。检测转染空载体的细胞HePG2 CMV 81.3%进入G0 /G1期 ,7.7%进入S期 ;而转染PBK HCVC的细胞HePG2 C 73%进入G0 /G1期 ,13.7%进入S期。在进一步分子机制的探讨中发现HePG2 C细胞PCNA、P5 3表达显著增加 ,P16、P2 7表达显著降低。同样的变化也发生在转录水平。结论 HCV核心蛋白可能通过调节某些基因的转录与表达 ,增加细胞DNA合成 ,扰乱细胞周期 ,进而参与致癌过程。

基于PIR控制的MMC环流抑制策略

模块化多电平换流器(MMC)在中高压领域备受关注,由于具有本身高度模块化的结构、良好的输出波形及冗余容错控制能力强等特点,在柔性直流输电系统中得到广泛的应用,但是在实际中MMC的三相电流并不平衡,因为桥臂间有环流的存在,而且会导致系统的损耗增大.本文提出了一种控制策略,该策略在正负序坐标变换下,利用复合电流控制器(HCVC)来改善谐波特性.最后在EMTDC/PSCAD中搭建了MMC仿真模型,仿真结果证实了提出的控制策略切实可行.