丙型肝炎病毒E1基因的克隆、表达、序列分析及定点突变

目的 :为了获得具有完整框架的HCVE1基因。方法 :用RT PCR从HCV(+)血清中扩增出E1基因 ,在原核系统中进行表达、测序及定点突变 ,并对表达的E1蛋白进行纯化及初步的活性鉴定。结果 :在 86株阳性克隆中 ,11株表达了不完整的HCVE1蛋白 ;使用表达出来分子量最大的蛋白作为抗原 ,在HCV(+)血清中抗 E1的检出率为 16 .7% (2 / 12 ) ,对其插入的E1基因 (HCVe118)测序 ,表明 134 7位的C→T而形成终止密码 ,用“大引物”法对HCVe118作定点突变 ,使T→C ,从而获得具正确框架的HCVE1基因。结论 :在原核表达系统中 ,去除C末端的HCVE1基因可获得高效表达 ;表达的HCVE1蛋白抗原性很弱。“大引物”法用于基因改构工作简便而又快速。