RNA干扰沉默HDAC1基因对大肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究下调HDAC1的表达对大肠癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响.方法:设计合成HDAC1的特异性shRNA,将其插入至pSilencer载体中,并将重组后的pSilencer质粒载体经脂质体包裹转染SW480细胞株.用RT-PCR和Westernblot检测shRNA对细胞内HDAC1基因表达的影响,同时采用Westernblot对细胞周期相关基因进行检测.采用MTT法检测生长抑制作用.运用流式细胞术检测细胞的凋亡情况和细胞周期分布.结果:成功构建和筛选出HDAC1特异性的shRNA质粒载体,与空白对照组相比,转染HDAC1-shRNA的大肠癌细胞HDAC1mRNA蛋白质表达水平明显下降(30.4%±4.5%vs64.6%±4.4%,P<0.01;27.4%±4.5%vs58.1%±3.3%,P<0.01),p21/WAF-1/CIP-1表达增加(97.4%±2.6%vs62.6%±3.4%,P<0.01),CdK2和CyclinE蛋白下降(CdK2:27.7%±6.0%vs42.6%±4.1%,P<0.01;CyclinE:42.0%±8.5%vs82.8%±3.7%,P<0.01),细胞生长抑制率增加(24h:35.9%±4.9%vs1.2%±0.6%,P<0.01;48h:47.5%±7.0%vs1.3%±0.6%,P<0.01;72h:45.7%±6.2%vs1.0%±0.5%,P<0.01;96h:48.2%±4.7%vs1.2%±0.7%,P<0.01),凋亡率明显增加(31.3%±2.8%vs3.9%±0.7%,P<0.01),G0/G1期和G2/M期细胞比例增加(G0/G1:64.5%±0.9%vs57.8%±1.8%,P<0.01;G2/M:17.4%±1.3%vs14.5%±0.6%,P<0.05),S期细胞比例相应下降(17.5%±1.0%vs27.7%±1.5%,P<0.01).结论:HDAC1特异的shRNA能够有效下调HDAC1基因,诱导大肠癌细胞发生凋亡和细胞周期阻滞,从而抑制细胞的增殖.

中国南阳黄牛HDAC1基因SNP检测及与生长性状的相关性分析

采用DNA测序比对和PCR-SSCP分析技术,以15头南阳黄牛为样本,探讨HDAC1基因第5外显子、第11外显子、3'-UTR序列的单核苷酸多态性以及与南阳黄牛经济性状的关联性。结果显示,南阳黄牛HDAC1基因纯合子TT型频率比例最小,纯合子CC型频率比例最大;C等位基因占多数。南阳黄牛HDAC1基因第5外显子没有多态性位点;第11外显子在第110 bp处存在A/G突变位点,为同义突变。南阳黄牛HDAC1基因mRNA 3'-UTR非翻译区存在2个突变:199 bp处的T/C多态性位点,其中TT型基因型频率> TG型;以及49 bp处的A/C多态性位点,其中AA型基因型频率> AC型。南阳黄牛HDAC1基因第11外显子基因多态性位点与其生长性状关联分析显示:AG和AA基因型群体中腰角宽、体长有显著性差异(P <0. 05),GG基因型比AG基因型群体在日增质量水平有显著提高(P <0. 05);在腰角宽、体长、日增质量上加性效应及显性效应水平显著(P <0. 05);其余性状均值在不同基因型群体中差异不显著。南阳黄牛HDAC1基因mRNA 3'-UTR非翻译区T/C(199 bp)处位点多态性与生长性状关联性分析发现,各性状在不同基因型群体的均值均无显著差异;A/G(49 bp)处位点多态性与其生长性状关联分析表明:AC和AA基因型群体中在体高、尻长、十字部高和日增质量经济性状上差异显著(P <0. 05),体长性状二者差异极显著(P <0. 01)。研究结果证实了南阳黄牛经济性状与其HDAC1基因片段中的一些SNP位点差异或多态性有关,这些SNP位点可以考虑为潜在的南阳黄牛分子育种目标位点。

大白猪群中HDAC1基因多态性与重要经济性状的相关性研究

该研究利用PCR-RFLP技术检测343头法系大白猪HDAC1基因酶切位点多态性,并对乳头数、达100 kg体重日龄、校正背膘厚、初生重和体长等性状进行关联分析。结果显示:在法系大白群体中检测到HDAC1基因3种基因型(分别为AA、AG和GG基因型)的存在。HDAC1基因HinfⅠ位点与大白猪达100 kg体重日龄显著相关,G等位基因具有显著降低达100 kg体重日龄的遗传效应,而GG基因型个体的初生重要高于AA基因型个体,GG基因型个体的生长性能有着明显优势。

青黄散联合健脾补肾方对骨髓增生异常综合征患者HDAC1基因去甲基化的影响

目的探讨青黄散联合健脾补肾方提高骨髓增生异常综合征(MDS)患者外周血红蛋白机制。方法选择2016年2月-2018年2月在中国中医科学院西苑医院及首都医科大学附属北京中医医院血液科就诊的30例MDS患者,采用青黄散联合健脾补肾方治疗6个月。采用血细胞分析仪检测患者治疗前后血常规,亚硝酸氢盐测序法(BSP)检测治疗前后骨髓HDAC1基因甲基化变化,Real-time PCR检测治疗前后HDAC1 mRNA及缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)mRNA变化,采用自身前后对照的方法比较治疗前后上述指标的差异。结果治疗前MDS骨髓标本中,HDAC1基因启动子区CpG1、CpG5、CpG12、CpG23位点呈高甲基化,分别为58.67%、85.67%、63.89%、71.63%,治疗后,上述HDAC1基因启动子区4个甲基化位点呈低甲基化状态,分别为0.67%、0、1.33%、1.33%;治疗后HDAC1 mRNA相对表达量较治疗前增加了4.9倍(P<0.01),HIF-1αmRNA相对表达量较治疗前增加了7.5倍(P<0.05)。结论青黄散联合健脾补肾方可通过降低HDAC1基因高甲基化增加下游HIF-1αmRNA表达,发挥提高外周血红蛋白作用。

牙鲆胚后发育阶段HDAC1基因的空间表达

组蛋白去乙酰化酶(HDACs)可通过调节染色质结构和抑制特异性转录因子活性来调控细胞生长和分化。鉴于HDACs在蝌蚪变态发育过程中的作用,本研究克隆了牙鲆(Paralichthys olivaceus)HDAC1基因全长cDNA序列,并调查了其在牙鲆变态前和变态阶段的空间表达。牙鲆HDAC1全长cDNA序列为2 540 bp,包含长度为126 bp的5'UTR,1 470 bp的ORF和944 bp的3'UTR。HDAC1基因在牙鲆变态前以及变态阶段均有表达,这和蝌蚪中仅在变态前表达的现象不同。HDAC1在冠状幼鳍上的表达是随着幼鳍原基的生长发育逐渐增强的,直至冠状幼鳍分化成形后,基因表达减弱;随着牙鲆仔鱼肠道的变粗变短,HDAC1在肠壁的表达强度逐渐增强,孵化后第16天(16DAH)开始减弱并最终消失;鳍褶中HDAC1在9DAH开始表达,18DAH时主要在鳍褶基部表达,进入变态阶段,HDAC1可见在支鳍骨上表达,在变态高峰期表达最为强烈。在整个变态发育期HDAC1在鳃上均表达,变态开始后表达逐渐增强,而到变态后期表达减弱。牙鲆变态前及变态阶段的HDAC1基因表达模式表明,HDAC1参与了牙鲆冠状幼鳍、鳍条、肠道等多种器官的发育调控以及变态阶段眼睛移动的过程。

淡水养殖凡纳滨对虾生长相关基因HDAC1克隆及其表达分析

【目的】分析组蛋白去乙酰基酶1基因(HDAC1)在不同淡水生长特性家系凡纳滨对虾中的表达情况,明确HDAC1基因在对虾淡水养殖过程中的功能作用,为揭示凡纳滨对虾生长调控的分子机制提供参考依据。【方法】通过RACE克隆凡纳滨对虾HADC1基因cDNA序列,利用DNAMAN、ProtParam、ProtScale、PSORT等在线软件进行生物信息学分析,以实时荧光定量PCR检测凡纳滨对虾HDAC1基因组织表达特征;选取4个家系凡纳滨对虾在1‰盐度下进行淡水养殖,养殖70 d后统计对虾存活率(RS)、日增重率、体长日增率、特定生长率(SGR)及饲料转化率(FCR),并利用实时荧光定量PCR检测凡纳滨对虾肠道中的HDAC1基因表达情况。【结果】凡纳滨对虾HDAC1基因c DNA全长3230 bp,包括67 bp的5’非编码区(5’-UTR)、1711 bp的3’非编码区(3’-UTR)及1452 bp的开放阅读框(ORF),共编码483个氨基酸残基;HDAC1基因DNA全长4692 bp,含有8个外显子和7个内含子。凡纳滨对虾HDAC1基因编码蛋白分子量为54640.22 Da,理论等电点(p I)为5.59,属于稳定的亲水性蛋白,具有1个Histone deacetylase 1结构域,无跨膜结构。凡纳滨对虾HDAC1氨基酸序列与斑节对虾HDAC1氨基酸序列的相似性最高,达99.79%。HDAC1基因在凡纳滨对虾各组织中均有表达,以在肠道中的相对表达量显著高于在其他组织中的相对表达量(P<0.05);在4个家系群体中,无论是大虾还是小虾,生长慢的群体中HDAC1基因相对表达量较低,生长快的群体中HDAC1基因相对表达量较高。【结论】HDAC1基因在凡纳滨对虾各组织中均有表达,以肠道中的相对表达量最高,且HDAC1基因相对表达量与凡纳滨对虾的生长速度成正比,故推测其参与凡纳滨对虾的生长调节过程。

Cdyl、G9a、及HDAC1在肾阳虚大鼠睾丸组织中的表达

目的观察Cdyl、G9a、HDAC1在肾阳虚大鼠睾丸组织中的表达,探讨Cdyl及相关因子引起雄性大鼠肾阳虚的机制。方法 20只健康雄性SD大鼠随机分为空白组与模型组,模型组采用环磷酰胺50mg/kg·d腹腔注射,空白组给予等量生理盐水注射。大鼠造模后第6天,将大鼠取血处死,分离睾丸、附睾进行相关指标检测。结果与空白组比较,模型组大鼠精子浓度、活力及活率明显降低;模型组大鼠睾丸组织Cdyl、G9a表达明显降低(P<0.01),HDAC1表达明显升高(P<0.01)。结论 Cdyl、G9a表达降低,HDAC1表达升高与雄性大鼠肾阳虚相关。

RNA干扰组蛋白去乙酰化酶1对人胰腺癌细胞增殖、凋亡的调控机制研究

目的观察沉默组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)基因对人胰腺癌PaTu8988细胞增殖、凋亡的影响及可能机制。方法胰腺癌PaTu8988细胞株分为空白对照组(不予任何处理)、阴性对照siRNA组(予以30nmol/L阴性siRNA)、siRNA1组(予以15nmol/LHDAC1siRNA)和siRNA2组(予以30nmol/LHDAC1siRNA)。siRNA转染48h后,用相对实时定量RT-PCR法和West-ernblotting检测HDAC1基因表达情况;相对实时定量RT-PCR法检测细胞增殖凋亡相关基因p21、Bcl-2、Bax的表达;WST-8法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡变化。结果转染HDAC1siRNA48h后人胰腺癌PaTu8988细胞中HDAC1mRNA表达量在siRNA1组和siRNA2组分别为46.1%±6.1%和32.3%±1.4%,均显著低于空白对照组(100.0%±3.4%)和阴性对照siRNA组(87.4%±28.3%,P<0.05)。Westernblotting显示HDAC1蛋白表达量亦明显下降,以siRNA2组表达量最低(P<0.05)。WST-8法检测显示4组细胞存活率分别为100%±17.1%、87.1%±5.0%、68.7%±4.7%、61.6%±2.0%,siRNA1组和siRNA2组与其他各组相比差异显著(P<0.05)。流式细胞术检测显示上述4组胰腺癌细胞凋亡率分别为4.20%±0.95%,4.59%±1.26%,10.09%±1.36%,11.19%±6.07%,与空白对照组和阴性对照siRNA组相比,siRNA1组和siRNA2组凋亡率显著增高(P<0.05)。siRNA1组和siRNA2组p21、BaxmRNA相对表达量明显高于其他各组(P<0.05),而Bcl-2mRNA相对表达量明显低于其他各组(P<0.05)。结论HDAClsiRNA能特异、有效地抑制人胰腺癌PaTu8988细胞HDACl的表达,同时抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡,其机制可能与上调p21、Bax表达,下调Bcl-2表达有关。