STUDIES ON THE HDL RECEPTORS I：EVIDENCE FOR THE EXISTENCE OF HDL RECEPTORS IN BEIJING DUCK LIVER

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人血浆HDL对动脉粥样硬化家兔肝细胞膜LDL受体活性影响的研究

高胆固醇饲料喂养造成的动脉粥样硬化（Ａｓ） 模型家兔通过静脉注射人血浆ＨＤＬ 制剂， 观察ＨＤＬ 对Ａｓ家兔肝细胞膜ＬＤＬ受体活性的影响． 结果发现， 摄取高胆固醇饲料的Ａｓ 家兔， 其肝细胞膜ＬＤＬ 受体 Ｋｄ 值虽无明显变化但Ｂｍａｘ 值显著减小（ Ｐ＜ ０－０１ ， 与正常对照组比较） ； 注射ＨＤＬ 制剂后， Ａｓ 家兔肝细胞膜ＬＤＬ受体Ｋｄ 值仍无明显改变， 但Ｂｍａｘ 值却显著回升（ Ｐ＜ ０－０１ ， 与高脂组比较） ． 表明人血浆ＨＤＬ 具有增加Ａｓ 家兔肝细胞膜ＬＤＬ 受体活性的作用．

绞股蓝总皂苷对HDL-CE诱导的HepG2细胞SR-B Ⅰ受体表达的影响

目的研究绞股蓝总皂苷(GPS)对HepG2细胞B型Ⅰ类清道夫受体(SR-BⅠ)表达的影响,分析绞股蓝总皂苷抗动脉粥样硬化的机制。方法体外培养人HepG2肝癌细胞,用不同浓度的GPS和HDL-CE与细胞共孵育24 h。通过油红O染色观察细胞内脂质堆积情况和酶比色法定量检测细胞内总胆固醇含量的变化,运用Real-time PCR、Western免疫印迹法分别检测绞股蓝总皂苷对细胞膜受体SR-BⅠmR-NA和蛋白的表达。结果 0～120 mg·L-1浓度的GPS对HepG2源性荷脂细胞增殖无影响,HDL-CE单独处理及HDL-CE和不同浓度GPS共孵育细胞处理后HepG2细胞中脂滴堆积增加,总胆固醇和胆固醇酯的含量明显增加,但后者SR-BⅠmRNA和SR-BⅠ蛋白的表达量却下调,并具有一定的量效关系。结论绞股蓝总皂苷对肝细胞具有保护作用,在高脂环境中,绞股蓝总皂苷能抑制肝细胞无限制的摄入脂质。

高糖膳食对大鼠肝实质及非实质细胞VLDL HDL及载脂蛋白CⅢ受体的影响

对高糖膳食诱发的内源性高甘油三酯血症大鼠肝脏VLDL、HDL及载脂蛋白(apo)CⅢ的受体功能进行了研究。发现肝非实质细胞VLDL受体存在下降调节机理;VLDL及HDL的受体除了受血浆脂蛋白浓度的下降或上升调节外,还可能与apoCⅢ受体活性的增加有关。

大鼠肝实质及非实质细胞VLDL和HDL受体的研究

作者以^(125)I-标记的人VLDL和不含apo E的HDL_3为配体,研究了大鼠肝实质细胞(PC)及非肝实质细胞(NPC)的VLDL和HDL受体的生物学特性。结果显示:VLDL受体和HDL受体均可介导肝PC和NPC结合、摄取及降解相应的脂蛋白;肝NPC上该二受体的活性分别为PC的10倍和4倍;肝NPC上VLDL受体HDL受体的解离常数分别为15.0～34.2μg/ml和10.1～17.7μg/ml,最大结合容量分别为2170～2607ng/mg和1004～2738ng/mg细胞蛋白;VLDL受体活性受EDTA抑制及胆固醇的下降调节,HDL受体不受EDTA抑制但受胆固醇的上升调节。发现apoCⅢ对VLDL受体结合功能有明显抑制作用。

人动脉平滑肌细胞HDL受体酶联测定法

Using horseradish peroxidase (HRP)-HDL3, instead of the classical 125 I-HDL3, an enzyme linked assay for measuring HDL recptor on cultured human arterial smooth muscle cells (SMC )was developed. Horseradish peroxidase labeled HDI3, was prepared by periodate method.Human arterial SMC were fixed on 96-wells plastic plates by glutaraldehyde mehtod. The results showed that Scatchard plot of high affinity binding of high affinity binding of HRP-HDL3 to SMC was significantly linear,r=—0.987. The Kd and Bmax were 13.12±0.8μg/ml and 106±9.3 ng/mg cell protein, respectively. HDL3 competed effectively for binding of HRP-HDL3 to SMC. On the contrary,LDL and albumin did not compete with HRP-HDL binding. The binding was Ca2+ independent and not sensitive to trypsin. These results indieated that human arterial smooth muscle cells possess specific binding sites for HDL with high affinity.

普罗布考对动脉粥样硬化兔HDL功能的影响及其调控机制

目的观察普罗布考对动脉粥样硬化兔巨噬细胞、肝细胞HDL功能的影响,并进一步探讨普罗布考抗动脉粥样硬化的机制。方法18只新西兰大白兔随机分为:(1)正常对照组(n=6):给予普通饮食喂养;(2)动脉粥样硬化组(n=6):饲以高脂饲料;(3)普罗布考组(n=6):在饲以高脂饮食基础上给予普罗布考[400mg/(kg·d)]。12周后取血以酶法测定血脂;利用流式细胞仪检测腹腔巨噬细胞、肝细胞细胞表面ABCA1、SR-BⅠ表达量;液闪计数仪检测其[3H]胆固醇转出率。结果实验12周后,普罗布考组血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、非高密度脂蛋白(NHDL-C)水平明显下降。普罗布考上调动脉粥样硬化兔腹腔巨噬细胞及肝细胞ABCA1及SR-BⅠ蛋白质表达水平。普罗布考组腹腔巨噬细胞、肝细胞[3H]胆固醇转出率较动脉粥样硬化组明显上升。结论虽然普罗布考降低HDL-C,但是其通过上调腹腔巨噬细胞、肝细胞SR-BⅠ及ABCA1的表达及增加其[3H]胆固醇转出率,改善HDL功能,具有促进动脉粥样硬化兔胆固醇逆转运(RCT)作用。

高密度脂蛋白(HDL)抗动脉粥样硬化研究进展

血浆高密度脂蛋白(high-density lipoprotein,HDL)通过其载脂蛋白A-I(apolipoprotein A-I,ApoA-I)介导胆固醇逆向转运,呈现抗动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)功能。近来大量研究结果显示高密度脂蛋白的多种抗AS、抗炎功能与胆固醇代谢无关,而是由其联结的鞘氨醇-1-磷酸(sphingosine 1-phosphate,S1P)和ApoA-I分别通过S1P受体和清道夫受体B-I(scavenger receptor class BI,SR-BI)介导的细胞内信号通路来实现。

北京鸭apoA－Ⅰ溴化氰裂解片段的分离纯化、性质及其与鸭肝HDL受体结合研究

本文对北京鸭ａｐｏＡ－Ⅰ溴化氰裂解片段的理化性质、部分结构和抗原性以及其与鸭肝细胞膜ＨＤＬ受体的结合进行了研究。ａｐｏＡ－Ⅰ用溴化氰裂解后经ＨＰＬＣ分离得两个纯的肽段Ｐ５和Ｐ６，对二肽段作了氨基酸组成分析，并分别测定了Ｐ５，Ｐ６Ｎ端的１４和９个氨基酸残基序列。通过与鸡ａｐｏＡ－Ⅰ的比较，根据同源性及肽段大小，定出Ｐ５、Ｐ６分别位于鸭ａｐｏＡ－Ⅰ的第１３８－１７０ａａ和第７５－１３６ａａ的区域。Ｉｍｍｕｎｏ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ法测定结果表明，Ｐ５、Ｐ６都含有鸭ａｐｏＡ－Ⅰ的抗原决定簇；用Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ免疫检测，发现鸭ａｐｏＡ－Ⅰ的Ｐ５、Ｐ６二片段都能与鸭肝细胞膜ＨＤＬ受体结合，提示鸭ａｐｏＡ－Ⅰ的中间区域即第７５－１７０ａａ区域可能参予鸭ａｐｏＡ－Ⅰ与鸭肝ＨＤＬ受体的结合。

家兔主动脉平滑肌细胞HDL_3受体及配体特性的探讨

应用同位素标记高密度脂蛋白_3(HDL_3),探讨家兔主动脉平滑肌细胞HDL_3的结合部位及其影响因素。结果表明,在平滑肌细胞表面存在具有特异性、高亲和力的HDL_3受体(Bmax=0.31μg/mg细胞蛋白,KD=5.6×10^(-8)mol/L)。培养液中的高浓度apoA_1可抑制^(125)I-HDL_3结合量的50％;用大鼠抗apoA_2抗体封闭^(125)I-HDL_3,其结合量可下降70％,而^(125)I-HDL_3与胆固醇预孵育,其与平滑肌细胞的结合率不受影响,提示apoA_1在HDL_3与受体结合过程中起着主要作用。培养液的pH在6.0～8.0之间,不影响HDL_3的结合;HDL_3结合部位对胰酶和裂解蛋白酶(pronase)处理均不敏感,且不依赖于Ca^(2+);4℃时其结合量最大。这些特性均与LDL受体不同,提示在平滑肌细胞表面存在着不同于apoB、E、apoE受体的HDL_3受体。

兔肝细胞膜高密度脂蛋白受体酶联免疫检测法的研究

用辣根过氧化物酶标记羊抗人ａｐｏＡＩＩｇＧ， 建立了检测兔肝细胞膜ＨＤＬ受体的酶联免疫吸附检测法． 测定时，ＨＤＬ结合量按抗体配体抗配体抗体酶交联物反应制作的标准曲线确定； 膜蛋白非特异吸附则用与酶交联的抗体来源相同的同种动物血浆ＨＤＬ平行抑制试验消除． 实验测得正常家兔肝细胞膜ＨＤＬ受体Ｋｄ 值为７１７ ±１１８ ｍｇ／Ｌ， Ｂｍａｘ值为（６２２５±１４６１） ｍｇ／ｇ （ｎ＝ ７）．

高密度脂蛋白对其动脉粥样硬化家兔肝细胞膜受体活性的影响

为了研究高密度脂蛋白对抗动脉粥样硬化的作用机理，采用酶联免疫受体分析法对注射高密度脂蛋白的动脉粥样硬化家兔肝细胞膜高密度脂蛋白受体活性进行了检测。结果表明，人血浆高密度脂蛋白虽不能降低高脂饲养的家兔血脂含量，但可显著降低其肝脏脂质水平和显著升高胆囊胆汁脂质水平。受体分析发现，高脂对照组动物肝细胞膜高密度脂蛋白受体Ｋｄ值显著降低，而高密度脂蛋白试验组动物Ｋｄ值未见明显变化，但Ｂｍａｘ却显著降低。提示长期高脂饲养有使动脉粥样硬化模型动物肝细胞膜高密度脂蛋白受体Ｋｄ值显著降低的作用。

大鼠肝细胞膜高密度脂蛋白受体的研究

以~125碘标记不含apoE的人HDL_3为配体,采用简便的聚乙二醇沉淀分离法,建立了纯化的大鼠肝细胞膜HDL受体分析法,并对膜HDL受体的性质进行了研究。

HMG-CoA还原酶抑制剂对肾病综合征大鼠肝脏高密度脂蛋白受体表达的影响

目的:在大鼠肾病模型中观察使用3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂洛伐他汀治疗对肝脏高密度脂蛋白(HDL)受体表达的影响,探讨他汀类药治疗肾病综合征高脂血症的机制.方法:给予大鼠2次尾静脉注射阿霉素建立肾病综合征大鼠模型;采用灌胃法给予大鼠洛伐他汀治疗2wk;采用Western Blot和RT-PCR技术分别检测HDL受体蛋白和其mRNA在肝脏的表达,同时检测大鼠相关血生化指标.结果:给予肾病综合征大鼠洛伐他汀治疗2wk后,血清总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇和三酰甘油以及尿蛋白均显著降低,血清白蛋白显著升高(P<0.05);血肌酐与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);肝脏HDL受体蛋白与肾病综合征组比较显著增加(治疗组和肾病综合征组吸光度分别为334.35±13.20和121.93±7.99,P<0.01);肝脏HDL受体mRNA与肾病综合征组比较无统计学意义(治疗组和肾病综合征组mRNA相对系数分别为0.54±0.03和0.50±0.02,P>0.05).结论:肾病综合征大鼠经洛伐他汀治疗后,肝脏HDL受体的缺乏得到明显改善,同时大鼠高胆固醇血症降低.

过氧化体增殖物激活型受体γ和δ在高密度脂蛋白介导细胞胆固醇流出中的作用

为探讨过氧化体增殖物激活型受体γ和δ在高密度脂蛋白介导的细胞胆固醇流出中的作用。取新鲜抗凝血浆 ,用超速离心机进行密度梯度离心 ,收集密度为 1 .0 6 3～ 1 .2 1 0组分。U937细胞用 5 0～ 4 0 0nmol L反义过氧化体增殖物激活型受体γ和δ预处理细胞 1 2h。培养U937细胞与 0 .2 8mCi L [3H] 胆固醇乙醇液共孵育 2 4h ,15 0 0r min离心 1 0min ,收集细胞 ,PBS漂洗 2次 ,RPMI 1 6 4 0重悬细胞 ,加HDL继续培养 0～ 4 8h。液体闪烁计数仪测细胞相对放射活性。Westernblot检测过氧化体增殖物激活型受体γ和δ蛋白表达水平。不同浓度HDL处理后细胞胆固醇流出具有明显差异 ,呈剂量 -效应关系。用 1 0 0nmol L反义过氧化体增殖物激活型受体γ处理 2 4h后 ,HDL介导的细胞胆固醇流出减少 (4 5 78± 2 0 6 ) ,与对照组 (4 0 2 4± 385 )比较差别有显著性。过氧化体增殖物激活型受体γ激动剂ciglitizone预处理后 ,HDL介导的细胞胆固醇流出增加 ,用 0、2 5、5 0、1 0 0、2 0 0 μmol Lciglitizone处理的放射活性分别为 4 371± 2 4 3、386 9± 2 1 2、346 9± 2 0 9、31 5 6± 31 5和 30 2 0± 2 96。反义过氧化体增殖物激活型受体δ处理后 ,HDL介导的细胞胆固醇流出略有增加 ,处理浓度达 4 0 0nmol

外显子8基因变异及高密度脂蛋白胆固醇与老年冠心病的关系

目的 探讨B族Ⅰ型清道夫受体(SR-B1)外显子8基因变异及HDL-C水平与老年冠心病发病风险的关系。方法 选取我院2020年4月~2022年4月收治的220例老年冠心病患者(研究组)以及同期185例健康体检者(对照组)。采用TaqMan法检测SR-B1外显子8基因多态性,分析SR-B1外显子8基因多态性、HDL-C水平与冠心病发病风险的关系,采用logistic回归分析基因型与冠心病危险因素间的相互作用。结果 SR-B1外显子8基因存在3种基因型:CC、CT、TT,研究组C和T等位基因频率分别为74.32%和25.68%,对照组C和T等位基因频率分别为82.43%和17.57%。研究组的TT基因型、T等位基因频率均高于对照组(P<0.05,P<0.01)。研究组CC基因型的HDL-C水平高于CT、TT基因型,CC基因型的LDL-C水平低于CT、TT基因型(P<0.05)。研究组高血压、糖尿病比例、LDL-C水平显著高于对照组,HDL-C显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。多因素logistic回归分析显示,SR-B1外显子8基因(OR=0.581,95%CI:0.411~0.820,P=0.002)、高血压(OR=1.904,95%CI:1.137~3.188,P=0.014)、糖尿病(OR=1.774,95%CI:1.093~2.878,P=0.020)、HDL-C(OR=0.495,95%CI:0.320~0.764,P=0.002)、LDL-C(OR=1.960,95%CI:1.063~3.613,P=0.031)均是冠心病发病的影响因素。结论 SR-B1外显子8基因多态性及血清HDL-C水平是老年冠心病发病风险的影响因素,其中SR-B1外显子8基因C→T突变可能引起血清HDL-C水平的降低。

高密度脂蛋白对THP-1巨噬细胞B类Ⅰ型清道夫受体的表达及胆固醇流出的影响

目的:观察高密度脂蛋白(HDL)对THP-1巨噬细胞B类Ⅰ型清道夫受体(SR-BI)的表达及胆固醇流出的影响。方法:用HDL及氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)处理THP-1细胞,采用RT-PCR、Western印迹及液体闪烁计数法观察细胞SR-BI的表达及细胞内胆固醇流出的变化。结果:ox-LDL下调THP-1巨噬细胞中SR-BI的表达,而HDL则上调THP-1巨噬细胞中SR-BI的表达;液体闪烁计数法检测发现ox-LDL减少细胞中胆固醇的流出,HDL可以增加细胞胆固醇的流出,且HDL的效应呈浓度依赖性。结论:HDL可能通过上调THP-1巨噬细胞SR-BI的表达,促进巨噬细胞内胆固醇流出。

脱氧新羟曲霉酸的分离纯化和结构鉴定

目的研究曲霉菌2101发酵液中上调高密度脂蛋白受体表达的活性成分。方法利用大孔吸附树脂对发酵液中活性成分进行吸附和分步洗脱,用制备高效液相色谱进行精制,紫外、红外、高分辨质谱和核磁共振进行波谱分析。结果分离得到一个纯化合物2101C。结论经波谱分析,2101C为一新结构的化合物脱氧新羟曲霉酸。

T淋巴细胞白血病L615系小鼠脂蛋白代谢特点

在研究Ｌ６１５小鼠血浆脂蛋白代谢变化中，所观察的各项检测指标均明显高于正常对照组。其中ＴＣ、ｖＬＤＬｃ升高最明显；ＨＤＬｃ／ＴＣ比值明显降低，并随外周白细胞数升高而降低；而ｖＬＤＬｃ／ＴＣ比值升高则随外周血白细胞数升高而升高。应用放射受体分析法研究发现，Ｌ６１５小鼠外周血淋巴细胞ＬＤＬ受体对其特异配基的最大结合量（Ｂｍａｘ）及结合位点数均随外周血白细胞数升高而增加，最高可达正常的９．８倍，但各组解离常数表明，其亲和力则逐渐下降，内吞亦相对降低，ＨＤＬ受体的Ｂｍａｘ及结合位，点数均明显高于对照组，亲和力较正常降低，但随外周血白细胞数升高而逐渐升高，乃至与对照组无显著差异。

小鼠肝细胞膜载脂蛋白CⅢ受体特性的进一步研究

目的 研究小鼠肝细胞膜载脂蛋白 (apo) C 受体与 apo C 、C 、C 及 E的结合特性。方法 用受体的放射性配基结合分析法 (RBA )观察血浆脂蛋白 (VL DL、L DL及 HDL )以及纯化的 apo C 、C 、C 及 E与小鼠肝细胞膜 apo C 受体结合的活性。结果 apo C 受体与 1 2 5I- apo C 的结合能被非标记 apo C 、C 、C 、E及 VL DL抑制 ,其中 apo C 、C 、C 及 VL DL抑制曲线相似 ,以 apo C 的抑制作用最强 ,apo C 次之 ,apo C 最弱 ,apo E与 apo C 受体亦有一定结合 ;而含 apo B10 0的 L DL以及含 apo A 及 apo A 的 HDL和人血清白蛋白则对结合无影响。结论 小鼠肝细胞膜上存在 apo C 受体 ,除能特异结合 apo C 及 VL DL外 ,亦能在一定程度上与apo C 、C 及 E结合。