HDL3氧化修饰后对人脐静脉内皮细胞t-PA表达的影响

目的探讨HDL3氧化修饰后对人脐静脉内皮细胞株HUVEC-12细胞组织型纤溶酶原激活物(tissue plasminogen activator;t-PA)表达的影响以及相关信号转导机制。方法 HUVEC-12细胞分别经不同浓度(0、20、40和80 mg/L)、不同时间(0、6、12、24和48 h)HDL3、ox-HDL3孵育,采用实时定量PCR、ELISA和免疫细胞化学法检测t-PA表达情况。用Western blot检测HDL3、ox-HDL3对Phospho-p38 MAPK、细胞核内NF-κB p65的影响。分别用p38 MAPK和NF-κB的特异性抑制剂SB203580(0.1μmol/L)和BAY11-7085来探讨HDL3、ox-HDL3影响HUVEC细胞t-PA表达的机制。结果与0 mg/L组细胞比较,ox-HDL3呈剂量和时间依赖性下调t-PAmRNA的表达,以80 mg/L浓度组减少最明显,较0 mg/L ox-HDL3下降了30%(P<0.05),其中以24 h组细胞中减少最明显,较0 h ox-HDL3组下降了19%(P<0.05);ELISA结果显示,ox-HDL3也呈剂量和时间依赖性减少了细胞培养液中t-PA的含量,以80 mg/L浓度处理组减少最明显,较0 mg/L ox-HDL3下降了34%(P<0.05),而时效以24 h组细胞中减少最明显,较0 h ox-HDL3组下降了35%(P<0.05);免疫细胞化学的结果显示,与对照组和HDL3(80 mg/L)组相比,ox-HDL3(80 mg/L)组t-PA的表达有所下降,较对照组下降了40%,而较HDL3(80 mg/L)组下降了15%(P<0.05)。与对照组和HDL3组相比、ox-HDL3(40 mg/L和80 mg/L)组Phospho-p38 MAPK的水平增加且细胞核内NF-κBp65的量也有所增加,与对照组相比ox-HDL3(80 mg/L)组Phospho-p38 MAPK的水平增加了40%,核内NF-κB p65的量增加了45%(P<0.05)。采用p38 MAPK抑制剂(SB203580)与NF-κB抑制剂(BAY11-7085)预先处理后,ox-HDL3抑制t-PAmR-NA及蛋白表达的作用有所下降,与ox-HDL3(80 mg/L)组相比,t-PA mRNA的表达分别增加了11%和13%,而t-PA蛋白表达分别增加了9%和11%(P<0.05)。结论 HDL3氧化修饰后对内皮细胞t-PA的表达具有下调作用且与p38 MAPK、NF-κB信号途径相关。

HDL3抗脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤

目的:研究高密度脂蛋白3(HDL3)预处理对脂多糖(LPS)损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用,并探讨其可能机制。方法:以不同浓度(50、100和200μg/L)HDL3预处理HUVECs 18 h,再加入1mg/L LPS作用6 h。MTT法检测细胞活力,Annexin V/PI双标后流式细胞术检测细胞凋亡,荧光显微镜观察单核细胞与HUVECs黏附,ELISA法检测培养液中VCAM-1含量,细胞免疫组织化学及Western blotting法检测细胞核内NF-κB p65的水平。结果:与对照组相比,LPS作用后HUVECs增殖活力降低,细胞凋亡及单核细胞黏附显著增加,VCAM-1和核内NF-κB p65水平增加;HDL3预处理可以恢复HUVECs增殖活力,降低细胞凋亡及单核细胞与HUVECs的黏附,减少VCAM-1分泌,并抑制NF-κB p65的核转位,且呈浓度依赖性。结论:HDL3可拮抗LPS对HUVECs的损伤作用,其机制可能与抑制NF-κB所介导的炎症反应有关。

早发冠心病患者血清MCP-1与HDL2、HDL3水平及其相关性分析

【目的】研究早发冠心病患者血清单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及HDL2、HDL3水平并分析MCP-1与HDL2、HDL3的相关性,探讨炎症因子与HDL颗粒大小在早发冠心病中的作用。【方法】搜集2011年3月至2012年12月于中山大学孙逸仙纪念医院心血管内科住院经冠状动脉造影诊断为冠心病的患者共236例,其中男性≤55岁,女性≤65岁的患者共108例为早发冠心病组;男性>55岁,女性>65岁患者共128例为晚发冠心病组。另外搜集同期男性≤55岁,女性≤65岁健康体检者96例为年轻冠脉正常组。所有患者均抽取空腹外周静脉血并分离血清,应用聚乙二醇沉淀法测定HDL2和HDL3水平,应用酶联免疫法测定MCP-1水平。【结果】1早发冠心病组HDL2显著低于晚发冠心病组及年轻冠脉正常组,早发冠心病组MCP-1水平显著高于年轻冠脉正常组(P均<0.05)。2以MCP-1为因变量,以HDL、HDL2、HDL3为自变量进行多重线性回归分析:早发冠心病组MCP-1与HDL2水平呈负相关(P<0.05),而与HDL、HDL3无关。3应用非条件Logistic回归分析示体质量指数(BMI)、糖尿病史、冠心病家族史与早发冠心病呈正相关,而HDL、HDL2与早发冠心病呈负相关(P均<0.05)。【结论】早发冠心病患者大颗粒的HDL2水平下降,MCP-1水平升高,MCP-1与HDL2呈负相关,提示早发冠心病患者炎症反应增加,大颗粒的HDL2抗炎功能下降,促进了动脉粥样硬化的进展,这可能为早发冠心病发病的主要危险因素。

oxHDL3对人脐静脉内皮细胞t-PAmRNA表达的影响

目的:探讨oxHDL3对人脐静脉内皮细胞株HUVEC-12细胞组织型纤溶酶原激活物(tissue type plasminogen activator,t-PA)表达的影响。方法 HUVEC-12细胞分别经不同浓度(0、20、40、80 mg/L)HDL3、oxHDL3孵育,采用RT-PCR的方法检测t-PAmRNA表达情况。结果与0mg/L oxHDL3组比较,oxHDL3呈剂量依赖性下调t-PA mRNA的表达,以80 mg/L oxHDL3浓度组减少最明显,较0mg/LoxHDL3组下降了30%(<0.05)。结论 oxHDL3呈剂量依赖性下调人脐静脉内皮细胞t-PA mRNA的表达。

Insulin reverses MCP-1 suppressed cholesterol efflux to HDL3/ApoA1 through up-regulation of ABCA1,ABCG1 and SR-BI in differentiated 3T3-L1 adipocytes

Objective Insulin has been reported to influence cholesterol removal from different cells,but the Results have been controversial.Based on our previous study,which we found that insulin promote cholesterol efflux from HepG2 cells and can reverse the decreased cholesterol efflux to HDL though PI3K-Akt pathway,we further investigate the effects of insulin on damaged cholesterol efflux by MCP-1 in this report.

类风湿性关节炎患者血清HDL2-c、HDL3-c水平及其临床意义

目的探讨类风湿性关节炎(RA)患者和健康群众高密度脂蛋白亚组份2(HDL2-c)和高密度脂蛋白亚组份3(HDL3-c)水平,并分析HDL2-c、HDL3-c水平与RA疾病活动的关系。方法选取2018年1月—2018年12月于电子科技大学医学院附属成都市妇女儿童中心医院收治的45例RA患者作为RA组。并选取同期该院健康体检群众45例作为对照组。从两组体内采集空腹血液样本。患者均无心血管疾病或糖尿病病史,也未服用任何降血脂药物。采用超速离心法提取HDL2-c和HDL3-c浓聚物。比较两组间高密度脂蛋白亚组份水平,分析疾病活性度对HDL2-c和HDL3-c的影响。使用独立样本t检验分析两组间HDL2-c、HDL3-c及其他脂蛋白水平(TC、TG、LDL-c、HDL、ApoA-I和ApoB)的差异。采用方差分析年龄和性别对HDL2-c和HDL3-c水平的影响。结果RA组TG、ApoB较对照组高(P<0.05),HDL、HDL2-c、HDL3-c、HDL2/HDL3和Apo A-1较对照组低(P<0.05)。对照组女性HDL2-c、HDL3-c水平较男性高(P<0.05)。DAS28分值为RA患者HDL2-c水平的影响因素(P<0.05)。校正年龄、性别、病程和糖皮质激素使用后,DAS28分值每增加1分,HDL2-c水平降低0.061 mmol/L。长病程组HDL2-c、HDL3-c水平较短病程组高(P<0.05)。结论RA患者体内HDL2-c、HDL3-c水平下降。HDL亚组份水平降低,尤其是HDL2-c水平降低,可能导致女性RA患者心血管疾病发病风险增加。

磷脂对HDL_3介导大鼠皮肤成纤维细胞内胆固醇流出能力的影响

目的 研讨磷脂对HDL3 介导大鼠皮肤成纤维细胞内胆固醇流出能力的影响。方法 在卵磷脂 (PC)或鞘磷脂 (SPM )存在条件下 ,观察HDL3 介导细胞胆固醇流出量的变化、细胞内磷脂含量变化及游离胆固醇 /胆固醇酯平衡的变化。结果 ①BSA组 (对照组 )、HDL3 组、PC组、SPM组、PC +HDL3 组和SPM +HDL3 组分别介导 4.70 %、31.5 5 %、7.35 %、8.0 6 %、42 .95 %和 46 .98%细胞胆固醇流出 ;②BSA、HDL3 、HDL3 +SPM和HDL3 +PC组细胞培育后胞内卵磷脂磷含量 (PC p)和鞘磷脂磷含量 (SPM p)分别为 2 0 .0 2、5 .5 6 ,17.5 6、5 .2 8,18.6 2、7.0 0和 2 2 .5 0、5 .5 2 μg/皿 ;③PC和SPM与细胞培育后 ,胞内游离胆固醇 /总胆固醇比值分别为 49.6 5和 5 9.5 7。培育前此比值为 48.6 4。结论 ①PC和SPM本身无介导细胞胆固醇流出能力 ,但它们能显著提高HDL3 介导的细胞胆固醇流出能力 ,且后者强于前者 ;②随着细胞胆固醇流出 ,部分胞内PC也流出胞外 ,而胞内SPM无明显变化 ;③SPM促进细胞内胆固醇酯向游离胆固醇转化。

基于肠源性高密度脂蛋白调控脂多糖介导Kupffer-肝细胞Cross-Talk探讨脾虚膏脂转输障碍的分子生物学基础

脾虚膏脂转输障碍是血脂异常的关键病机。脾失健运引起肝脏代谢功能障碍可能导致血脂异常。肠道功能紊乱是脾虚膏脂转输障碍的启动因素,以其介导“炎症-代谢”紊乱为切入点,深入揭示血脂异常疾病发病机制以提高中西医结合防治水平逐渐成为基础和临床研究焦点和热点。从肠源性高密度脂蛋白(high-density lipoprotein 3,HDL3)调控脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)介导Kupffer-肝细胞cross-talk的角度,深入分析脾虚膏脂转输障碍的分子生物学机制,揭示健脾化浊法的效应机制,为临床防治血脂异常提供科学依据。

原发性甲状腺功能减退症患者血脂谱变化的特点

目的探讨原发性甲状腺功能减退症患者的血清脂蛋白胆固醇亚组分的变化。方法原发性甲状腺功能减退症患者38例分为临床甲状腺功能减退组(甲减组,20例)、亚临床甲状腺功能减退组(亚甲减组,18例),另选择20例健康体检者作对照(对照组)。留取患者空腹静脉血5 ml,分离血清取上清液-80℃冰箱保存,配置密度液,在不同背景密度下超速离心,采用胆固醇氧化酶法测定血清小而密低密度脂蛋白胆固醇(sd LDL-C)、高密度脂蛋白2胆固醇(HDL2-C)、高密度脂蛋白3胆固醇(HDL3-C)的水平。同时检测三碘甲状原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)和促甲状腺素(TSH),统计分析其与血清脂蛋白胆固醇亚组分的相关性。结果 (1)甲减组和亚甲减组患者总胆固醇、三酰甘油、LDL胆固醇水平高于对照组,HDL水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);(2)甲减组和亚甲减组患者sd LDL-C水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);甲减组和亚甲减组血清HDL2-C低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);HDL3-C组间比较差异无统计学意义;甲减组与亚甲减组sd LDL-C、HDL2-C、HDL3-C比较差异无统计学意义;(3)原发性甲状腺功能异常发生时,sd LDL-C水平与TSH呈正相关性(r=0.287,P=0.026),与T4呈负相关性(r=-0.267,P=0.039);与T3无相关性;HDL2-C与T3、T4呈正相关性(r=0.271、0.270,P=0.036、0.037);HDL3-C与TSH、T3、T4无明显相关性。结论甲状腺功能减退症患者的临床血脂谱及脂蛋白胆固醇亚组分产生变化,并与甲状腺功能相关。

老年2型糖尿病并发冠心病与高密度脂蛋白亚组分相关性分析

目的探讨老年2型糖尿病人群冠心病发病与高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)亚组分的相关性。方法随机选择老年2型糖尿病患者62例(其中并发冠心病30例),冠心病无糖尿病患者30例,无糖尿病和冠心病的健康对照组30例。测定血糖、糖化血红蛋白、血脂等指标,并用硫酸葡聚糖-镁法测定HDL-C亚组分(HDL2-C和HDL3-C),分析各组HDL亚组分代谢特点及其与糖尿病并发冠心病的相关性。结果与对照组及单纯冠心病组比较,2型糖尿病并发冠心病患者HDL3-C水平显著降低(P<0.001和P<0.05)。2型糖尿病组内比较显示,合并冠心病亚组的HDL-C及其亚组分HDL3-C水平亦显著降低(P<0.05和P<0.01),HDL2-C虽有下降但差异无显著性。偏相关分析显示,仅HDL3-C与冠心病呈负相关。结论老年2型糖尿病患者HDL-C及其亚组分水平均下降,尤以HDL3-C下降明显,HDL3-C与冠心病呈负相关。提示HDL-C的抗冠状动脉疾病作用主要是通过HDL3-C实现的,HDL3-C可能是老年2型糖尿病并发冠心病的较好预测因子。

氧化修饰与丙二醛修饰的低密度脂蛋白对巨噬细胞高密度脂蛋白结合量及胆固醇酯聚集的影响

本文用Cu^(2+)(引发氧化修饰)和脂质过氧化降解产物丙二醛(MDA)对低密度脂蛋白(LDL)进行修饰,观察了两种修饰的LDL对巨噬细胞高密度脂蛋白_3(HDL_3)结合量及细胞内胆固醇酯聚集的影响。结果说明:1.Cu^(2+)和MDA修饰的LDL都可使巨噬细胞HDL_3结合量下降,细胞内脂质过氧化物(LPO)含量升高,但当处理细胞在含10％无脂血清(LPDS)培养液中继续培养时,由MDA修饰的LDL(MDA-LDL)导致的HDL_3结合量降低又有一定的恢复,细胞内LPO含量不再升高,而Cu^(2+)修饰的LDL(Cu^(2+)-LDL)处理的细胞继续培养时,HDL_3结合量则继续下降,细胞LPO含量则继续升高。2.由Cu^(2+)-LDL导致的巨噬细胞HDL_3结合量下降与细胞LPO含量升高之间呈负相关(r=-0.81,P<0.01)。3.MDA-LDL和Cu^(2+)-LDL都可造成巨噬细胞胆固醇酯聚集,但MDA-LDL造成的胆固醇酯可被HDL_3大量清除而Cu^(2+)-LDL造成的胆固醇酯聚集则不能。

家兔主动脉平滑肌细胞HDL_3受体及配体特性的探讨

应用同位素标记高密度脂蛋白_3(HDL_3),探讨家兔主动脉平滑肌细胞HDL_3的结合部位及其影响因素。结果表明,在平滑肌细胞表面存在具有特异性、高亲和力的HDL_3受体(Bmax=0.31μg/mg细胞蛋白,KD=5.6×10^(-8)mol/L)。培养液中的高浓度apoA_1可抑制^(125)I-HDL_3结合量的50％;用大鼠抗apoA_2抗体封闭^(125)I-HDL_3,其结合量可下降70％,而^(125)I-HDL_3与胆固醇预孵育,其与平滑肌细胞的结合率不受影响,提示apoA_1在HDL_3与受体结合过程中起着主要作用。培养液的pH在6.0～8.0之间,不影响HDL_3的结合;HDL_3结合部位对胰酶和裂解蛋白酶(pronase)处理均不敏感,且不依赖于Ca^(2+);4℃时其结合量最大。这些特性均与LDL受体不同,提示在平滑肌细胞表面存在着不同于apoB、E、apoE受体的HDL_3受体。

ox-HDL_3对人脐静脉内皮细胞的损伤作用

目的：探讨氧化高密度脂蛋白3（ox-HDL3）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的损伤作用。方法：体外培养HU-VECs与不同浓度（50~200mg/L）ox-HDL3共孵育,用普通光镜和荧光显微镜分别观察HUVECs形态及核形态的变化,用噻唑兰（MTT）比色法检测细胞存活状况。结果：ox-HDL3使内皮细胞数目减少,形态改变;Hoechst 33258染色后可见大量的细胞核浓缩呈高亮度蓝色荧光的凋亡细胞;MTT结果显示,细胞存活率下降,且呈剂量依赖性。结论：ox-HDL3可导致内皮细胞受损,从而促进动脉粥样硬化的发生发展。

用聚乙二醇作沉淀剂的 HDL_2/HDL_3定量法

现已知血清高密度脂蛋白（HDL）及其亚组份HDL2与动脉粥样硬化呈负相关。HDL 及HDL2/HDL3的分离常采用化学沉淀剂,本文以超速离心法（UC）为参考方法,对下述三种沉淀剂的分离效果进行了比较研究。认为聚乙二醇20000（PEG）具有简单实用,特异准确等优点,不受脂血干扰,且适用于胆固醇及磷脂的酶法分析。

血清高密度脂蛋白3亚型胆固醇水平与冠心病严重程度及支架内再狭窄的关系

目的探讨血清高密度脂蛋白3亚型胆固醇(HDL3-C)水平与冠状动脉病变严重程度及冠心病支架内再狭窄的关系。方法回顾性病例对照研究。选取2020年11月至2021年11月南京大学医学院附属金陵医院冠心病患者124例和健康对照者62例,其中冠心病患者包括急性冠状动脉综合征患者28例和稳定性冠心病患者96例;检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和HDL3-C水平。根据冠心病患者入院时冠状动脉造影结果,计算Gensini积分,并将其分为支架内再狭窄(22例)、支架内未狭窄(23例)和无支架(79例)3个亚组;HDL3-C水平与其他参数间相关性采用Pearson或Spearman相关性分析;采用多因素Logistic回归分析HDL3-C水平与冠心病支架内再狭窄的关系。结果与对照组比较,冠心病组的血清HDL3-C、HDL-C水平均较低(P均<0.05);且血清HDL3-C水平与Gensini积分呈负相关(r=-0.201,P=0.043)。冠心病患者中,支架内再狭窄亚组的血清HDL3-C、TC、TG水平均低于支架内未狭窄亚组和无支架亚组(P均<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,在校正了年龄、性别、调脂药物和TC、TG、LDL-C的影响后,血清HDL3-C(OR=0.885,95%CI 0.791~0.990,P=0.033)、HDL-C(OR=0.018,95%CI 0.001~0.426,P=0.013)均与冠心病发生相关;且仅HDL3-C(以支架内未狭窄亚组为参考,OR=0.833,95%CI 0.698~0.994,P=0.042;以无支架亚组为参考,OR=0.812,95%CI 0.685~0.963,P=0.017)与冠心病支架内再狭窄相关。结论冠心病尤其是支架内再狭窄患者的血清HDL3-C水平降低,且HDL3-C与冠状动脉病变严重程度、冠心病及支架内再狭窄的发生相关。