HDLBP通过调控氧化应激水平和炎性因子表达参与鹅肥肝的形成

旨在利用活体与细胞模型探究高密度脂蛋白结合蛋白(HDLBP)的亚细胞分布、基因功能及其与鹅肥肝形成的关系。本研究选取70日龄健康朗德鹅公鹅14只,单笼饲养,随机均分为对照组(平均体重为3.71 kg,自由采食)和试验组(平均体重为3.72 kg,填饲20 d)进行活体模型试验。从23日龄朗德鹅胚胎中分离肝细胞并过表达HDLBP基因进行细胞模型试验。首先采用免疫印迹法、免疫荧光技术对鹅原代肝细胞中HDLBP蛋白质进行亚细胞定位分析,其次采用免疫印迹法检测填饲鹅和对照鹅肝脏全细胞HDLBP(wHDLBP)及线粒体中HDLBP(mHDLBP)的蛋白质丰度,然后在鹅原代肝细胞中过表达HDLBP,检测其对细胞中mHDLBP蛋白质丰度、丙二醛(MDA)含量、总超氧化物歧化酶(T-SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性、活性氧类物质(ROS)和线粒体膜电位水平的影响,最后通过转录组测序分析筛选HDLBP过表达影响的差异表达基因与相关信号通路,并在活体模型中对部分差异表达基因进行定量PCR验证。结果表明:HDLBP可结合到线粒体中;填饲组wHDLBP和mHDLBP蛋白质丰度均显著低于对照组(P<0.01);在鹅原代肝细胞中过表达HDLBP显著增加mHDLBP的蛋白质丰度(P<0.05),增加MDA(P<0.01)和ROS(P<0.05)含量,降低线粒体膜电位(P<0.05)及T-SOD(P<0.05)和GSH-PX(P<0.05)活性;HDLBP过表达所影响的上调差异表达基因主要富集于免疫/炎症相关通路。此外,相对于对照组,填饲组中炎症相关基因IL 1R1、TNFSF10、LTC 4S、NCF1、SFTPA 1及KDR的表达可能受到HDLBP的调控而显著减少(P<0.05,0.01或0.001)。HDLBP能够与线粒体结合,填饲显著降低鹅肝全细胞和线粒体样中HDLBP的蛋白水平,过表达HDLBP导致线粒体功能损伤、氧化应激和炎性因子的表达增强,因此HDLBP可能通过影响线粒体功能、调控氧化应激和炎症反应为鹅肥肝提供保护。

鸡HDLBP基因SNP鉴定及其与蛋用性能关联分析

从HDLBP转录本(NM205096.2)中鉴定6个同义突变的SNPs,在欣华鸡的关联分析发现C3381T和T387C与开产日龄(AFE)和蛋重(EW)显著关联(P<0.05),表明该基因可能是蛋用性状相关的候选基因。从小白卵泡(SWF)到小黄卵泡(SYF)中,HDLBP表达水平在膜层和颗粒层中逐渐升高。在排卵前期,F3到F2的颗粒层中HDLBP mRNA水平显著下降(P<0.05)。此外,EGF、VEGF、FSH在不同颗粒细胞生长阶段对HDLBP调控具有剂量依赖性,Follistatin对HDLBP mRNA表达没有明显影响。