一种海洋来源的ETP类化合物HDN-1诱导K562细胞凋亡作用及机制初探

目的探讨南极土壤来源真菌的次级代谢产物HDN-1对人慢性粒细胞白血病K562细胞的增殖抑制,诱导凋亡作用及其机制。方法采用MTT法检测HDN-1对K562细胞的增殖抑制作用;DNA结合染料Hoechst 33342染色,Western Blotting以及DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡以及凋亡相关蛋白的变化。结果 HDN-1能显著抑制K562细胞的增殖,并呈剂量-时间依赖性;HDN-1作用后,细胞核形态发生明显变化并且出现了基因组DNA的梯状剪切条带;Caspase-9、8、3逐渐被激活,Caspase3的作用底物PARP被活化裂解出现89kD的剪切条带,并且Caspase蛋白的激活可被特异性抑制剂所阻断;抑凋亡蛋白Bcl-2,Mcl-1的表达降低,促凋亡蛋白Bax的表达量增高。另外,融合蛋白Bcr-Abl的表达被HDN-1抑制并呈剂量依赖性。结论来源于南极土壤来源真菌的次级代谢产物HDN-1可能是通过抑制Bcr-Abl融合蛋白的表达进而诱导K562细胞凋亡,并且凋亡是通过Caspase依赖的线粒体途径和死亡受体途径共同介导发生的。

Hsp90抑制剂HDN-1诱导急性早幼粒细胞白血病NB4细胞凋亡的研究

目的探讨南极土壤来源真菌的次级代谢产物HDN-1对人急性粒细胞白血病NB4细胞的增殖抑制,诱导凋亡作用及其机制。方法采用MTT法检测HDN-1对NB4细胞的增殖抑制作用;DNA结合染料Hoechst 33324染色,Western Blot实验,流式细胞仪检测细胞凋亡以及凋亡相关蛋白的变化。结果 HDN-1能显著抑制NB4细胞的增殖,并呈剂量-时间依赖性;HDN-1作用后,细胞核形态发生明显变化且流式细胞仪分析表明NB4细胞凋亡数量明显增加;HDN-1可引起Caspase-3,8,9激活,bid减少,线粒体中凋亡蛋白Bcl-2,Mcl-1的表达降低,以及γ-H2AX、Parp剪切带增加。但是NB4细胞中融合蛋白PML-RARα的表达不能被HDN-1所抑制。结论 HDN-1诱导凋亡是通过Caspase依赖的线粒体途径和死亡受体途径共同介导的,PML-RARα不是Hsp90的客户蛋白,其诱导凋亡机制可能是通过抑制Hsp90的其他蛋白表达进行的。

孕妇孕晚期血浆t-PA和PAI-1对HND的预测价值

目的探讨孕妇孕晚期血浆组织纤溶酶原激活物(t-PA)和组织纤溶酶原抑制物(PAI-1)对新生儿溶血病(HND)的预测价值。方法以76例夫妇血型不合的O型RhD(+)孕妇及其新生儿为研究对象,依据溶血3项检查和临床表现诊断为NHD新生儿30例,健康新生儿46例。比较健康与NHD新生儿及其母亲孕晚期血浆中t-PA、PAI-1及t-PA/PAI-1水平,并分别以健康新生儿母亲组t-PA、PAI-1和t-PA/PAI-1均值的95%可信区间上限值7.48μmol/L、50.46μg/L和0.19μmol/μg为临界值,分析t-PA、PAI-1及t-PA/PAI-1对HND的预测灵敏度、特异度和准确度。结果 NHD新生儿及其母亲的t-PA、PAI-1和t-PA/PAI-1均高于健康新生儿及其母亲(P <0.05)。孕晚期母体t-PA、PAI-1和t-PA/PAI-1各单项指标对HND的预测灵敏度均低于50%,准确度均低于60%,特异度均>70%上;但三者联合检测的灵敏度(56.67%)、特异度(86.96%)和准确度(75.00%)均高于各单项指标(P <0.05)。结论孕妇孕晚期t-PA、PAI-1和t-PA/PAI-1的升高对于预测HND有一定的提示作用,但各单项指标及联合检测的预测灵敏度均较低,仍需借助其他指标做更准确的判断。

新生儿溶血病患儿血浆t-PA和PAI-1变化的研究

目的探讨新生儿ABO血型不合溶血病患儿血浆纤溶酶原激活物（t-PA）、纤溶酶原激活物抑制物（PAI-1）以及t-PA／PAI-1水平的变化。方法选择我院儿科病房收治的新生儿溶血病（HDN）患儿28例、非溶血性非感染性高胆红素血症患儿26例、健康新生儿30例，分别检测3组的血浆t-PA、PAI-1、总胆红素以及血小板数量（PLT）。结果HDN组患儿t-PA、PAI-1以及t-PA／PAI-1水平显著高于非溶血性非感染性高胆红素血症组和健康对照组儿童，其中t-PA升高更明显，有统计学意义（t值分别为5．48、4．98、5．59、5．43，均P〈0．05）。重度溶血病组儿童t-PA、PAI-1以及t-PA／PAI-1水平显著高于轻度溶血病组（t=3．93、4．01、3．77，P〈0．05）；而非溶血性非感染性高胆红素血症组和健康对照组相比，无统计学意义（t值分别为0．83、0．2l、0．17，均P〉0．05）。重度溶血病组患儿PLT水平显著低于轻度溶血病组（t=4．56，P〈0．05）。结论HDN患儿体内纤溶与抗纤溶平衡失调，溶血程度越重失调越明显；HDN患儿存在血管内皮损伤的发病机制；HDN患儿凝血功能方面，检测t-PA、PAI-1水平变化较PLT敏感性更高。

罕见抗-JK3引起新生儿溶血病及家系Kidd血型基因研究

目的研究Kidd系统稀有血型Jk(a-b-)产生抗-JK3引起的新生儿溶血病,Jk(a-b-)表型的分子机理及其家系Kidd血型的基因遗传。方法对患儿血样做新生儿溶血病三项检测:直接抗人球蛋白试验、血清游离抗体和红细胞放散试验;患儿母血样做抗体鉴定及Kidd血型鉴定;患儿父血样做Kidd血型鉴定;采用PCR-SSP方法对患儿及其父母做Kidd血型的基因检测,并对Jk4-11外显子及其侧翼区域扩增后测序,分析其序列信息。结果患儿为B型RhD阳性、Kidd表型为Jk(a-b+)、基因型为JKB/JKB(IVS5-1);患儿母为O型RhD阳性,Kidd表型为Jk(a-b-)、基因型为Jkb(IVS5-1)/JKb(IVS5-1);患儿父为B型RhD阳性,Kidd表型为Jk(a-b+)、基因型为Jkb/Jkb;患儿母血浆中存在抗-Jk3,患儿为抗-Jk3引起的新生儿溶血病。结论患儿母在Jk^b等位基因第5内含子3’端保守区剪切结合位点处发生了G到A的突变,导致mRNA转录本中从第6外显子开始缺失,致其Kidd表型为J k(a-b-),其因妊娠免疫产生了抗-JK3并导致患儿发生新生儿溶血病。