HE切片中苏木素沉渣去除方法探讨

目的:探讨去除HE染色切片中苏木素沉渣的方法。方法:采用下列三种方法去除HE染色切片中的苏木素沉渣并比较其效果:(1)陈旧苏木素染色液加热至40℃;(2)滤纸过滤陈旧苏木素染色液;(3)石蜡切片经1.0%NaOH浸泡8min、1.0%NaHCO3浸泡2min、200U/ml糜蛋白酶浸泡8min后在陈旧苏木素染色液中染色。此外,在AB/PAS染色前和染色后用1.0%NaOH、1.0%NaHCO3、200U/ml糜蛋白酶浸泡切片,观察该化学处理对粘液染色效果的影响。结果:经过1.0%NaOH、1.0%NaHCO3或200U/ml糜蛋白酶浸泡的切片,HE染色后无苏木素沉渣附着;陈旧苏木素染色液加热后染色,切片中仍有大量苏木素沉渣附着,过滤后染色则切片中苏木素沉渣消失。在AB/PAS染色后、苏木素衬染前1.0%NaOH、1.0%NaHCO3或200U/ml糜蛋白酶处理切片,粘液区呈强阳性染色;AB/PAS染色前用上述方法处理切片,粘液染色强度略有减弱。结论:陈旧苏木素染色液过滤经1.0%NaOH、1.0%NaHCO3、200U/ml糜蛋白酶浸泡均可有效去除HE染色切片中的苏木素沉渣。

山羊骨髓间充质干细胞与纤维蛋白胶修复椎间盘纤维环缺损的组织学比较

背景:目前,腰椎间盘摘除术后纤维环破口仍继续存在,容易形成复发型腰椎间盘突出,如何修复纤维环破口是组织工程学的热点问题。目的:比较以明胶海绵为载体的山羊骨髓间充质干细胞移植与纤维蛋白粘合剂修复椎间盘纤维环缺损的能力。方法:从山羊髂骨中提取和分离出骨髓间充质干细胞,并将其进行传代培养。将15只山羊随机分为对照组、粘合组、移植组,每组5只(30个椎间盘)。采用手术器械制备0.75 cm×0.75 cm椎间盘纤维环缺损,粘合组利用纤维蛋白粘合剂对破损的纤维环进行粘合,移植组将负载骨髓间充质干细胞悬液(细胞浓度为5×10^(9) L^(-1),体积为10μL)的明胶海绵(0.75 cm×0.75 cm)放入纤维环缺损中,然后逐层进行缝合。术后6,12周,取出纤维环组织进行苏木精-伊红染色、Masson三色明胶染色、AB-PAS染色和Ⅱ型胶原染色。结果与结论:苏木精-伊红染色观察到移植组中软骨细胞、胶原细胞与骨细胞的数量相比其他两组增多,细胞成熟,修复能力更强;Masson三色明胶染色观察到移植组有更多的成纤维细胞和纤维组织;AB-PAS染色观察到移植组有更多的软骨细胞参与修复;Ⅱ型胶原免疫组化染色发现移植组Ⅱ胶原含量最高;上述结果证实了山羊骨髓间充质干细胞对纤维环缺损有更好的修复能力。