细胞HE染色涂片与细胞蜡块检测晚期非小细胞肺癌胸腔积液标本中表皮生长因子受体基因突变

目的:伴发胸腔积液的晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者已失去手术机会,表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitors,TKIs)是EGFR敏感突变的晚期NSCLC患者的一线用药。但EGFR-TKIs治疗时或治疗后出现的疾病进展以及药物的更新迭代给临床诊治带来了挑战,需要对存档的胸腔积液细胞样本进行EGFR复检或比对研究。本研究采用细胞HE染色涂片与细胞蜡块两种制作方法对NSCLC胸腔积液样本的EGFR突变基因进行检测,分析两种保存方式、保存时间对胸腔积液细胞DNA质量的影响,以期探索出一条保存细胞学资料及充分利用细胞学档案资料的可靠途径。方法:选取2014年10月—2021年4月航天中心医院病理科接收的胸腔积液样本57例,所有样本同时制作细胞HE染色涂片与细胞蜡块。将57例配对的细胞HE染色涂片与细胞蜡块采用扩增阻碍突变系统-聚合酶链反应(amplification refractory mutation system-polymerase chain reaction,ARMS-PCR)技术进行EGFR基因突变检测。DNA检测浓度为2 ng/μL,细胞HE涂片与配对细胞蜡块DNA样本并排进行扩增。结果判读按试剂说明书要求,待测样本的8号孔外控循环阈值(cycle threshold,Ct值)在13~21之间为样本合格,EGFR基因突变Ct值<26时,判断为阳性;26≤Ct值<29为临界阳性,Ct值≥29为阴性。ΔCt值为突变Ct值与外控信号Ct值的差值。比较细胞HE染色涂片与细胞蜡块检测为阳性的ΔCt值。同时将57例患者按时间段分为4组:2014—2015年(n=10),2016—2017年(n=20),2018—2019年(n=17),2020—2021年(n=10)。比较不同时间段的检测结果。结果:57例晚期NSCLC患者中以胸腔积液为首发症状入院者42例,占73.7%;57例中37例发生EGFR突变,突变率64.9%;19del突变和L858R突变为主要的突变类型,分别占37.8%(14/37)和48.6%(18/37);37例突变患者中女性占56.7%(21/37);细胞涂片与配对的细胞蜡块突变一致率为100%;细胞HE染色涂片的ΔCt值小于配对细胞蜡块的ΔCt值(t=4.526,P<0.001)。37例配对细胞蜡块与细胞HE染色涂片的突变Ct值均<26。4个时间段中,2014—2015年、2016—2017年、2018—2019年的细胞蜡块突变基因Ct均值均高于2020—2021年(P<0.05);4个时间段的细胞HE染色涂片突变Ct均值差异无统计学意义(P>0.05)。57例配对细胞蜡块与细胞HE染色涂片的外控Ct值均在13~21之间。2014—2015年、2016—2017年的细胞蜡块与细胞HE染色涂片的外控Ct值均高于2018—2019年、2020—2021年(均P<0.05)。结论:细胞HE染色涂片与细胞蜡块检测NSCLC胸腔积液样本EGFR突变具有极好的一致性,且细胞HE染色涂片的DNA质量优于细胞蜡块,但细胞HE染色涂片的局限在于不可复制性,建议在胸腔积液标本制作中进行多张涂片,以满足多次检测的需求。

HE染色涂片上精子DNA的提取与HLA—DQa基因扩增分型

本文对ＨＥ染色涂片上精子ＤＮＡ的提取、ＰＣＲ扩增分型的可行性与可靠性进行了研究。２０张ＨＥ染色涂片的实验结果表明：ＨＥ染色涂片上的精子是可以被回收并提取到ＤＮＡ进行ＨＬＡ－ＤＱａ基因的ＰＣＲ扩增分型的，其分型结果准确可靠。这说明精子的ＨＥ染色涂片也是进行ＤＮＡ分析的一种很好的检材来源。

HE染色涂片退色后原位免疫染色在肿瘤诊断中的应用价值

目的:探讨HE染色涂片退色后原位免疫染色在肿瘤诊断中的应用价值。方法:随机选取2012年11月--2013年11月在我院进行肿瘤细胞诊断的180例细胞涂片作为研究对象。所有涂片均经过HE染色。其中,确定为肿瘤或可疑肿瘤的38例涂片经退色后行原位免疫染色处理,并将其中30例存在对应组织学检测的涂片检测结果与其组织学检查结果进行对比,以分析免疫染色细胞的确诊率。结果:1 HE染色的细胞确诊率为80.56%,免疫染色的细胞确诊率为89.47%,HE染色联合免疫染色的细胞确诊率为97.78%。HE染色和免疫染色细胞确诊率间的差异无统计学意义(P>0.05),而HE染色联合免疫染色的细胞确诊率高于HE染色和免疫染色的细胞确诊率,且组间差异具有统计学意义(P<0.05)。2 30例进行退色原位免疫染色处理的涂片其检测阳性率与组织学检测阳性率间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在肿瘤细胞诊断中进行HE染色后的免疫染色操作可以有效提升肿瘤细胞的阳性确诊率,从而有利于确定肿瘤细胞的来源。