人卵巢癌相关候选基因HE4(WFDC2)的转录调控主要由Sp1与位于-71和-48的Egr-1位点结合所介导

目的 阐明HE4基因转录调控机制的细节。方法 1.用半定量RT PCR的方法评估HE4基因在肿瘤细胞株中的表达情况 ;2 .以荧光素酶报告基因载体为基础 ,对HE4基因的上游顺序构建了 3′、5′缺失突变和一系列连接体扫描突变 ;3.通过瞬时转染 /体外双荧光素酶报告系统对这些重组质粒中插入片段进行启动子活性的分析 ;4 .针对蛋白和关键顺式区域的结合的特异性和能力 ,开展泳动滞后和抗体介导的超迁移分析。结果 通过对 ( 186 0 /+ 2 9)的HE4基因上游片段及其剪切体的分析 ,将HE4基因最小启动子确定为 10 7/+ 15的DNA片段。通过对连接体扫描突变体的分析 ,将关键的顺式作用元件确定在W4 5 ( 71/ 4 8)片段 ,生物信息学提示该区存在两个Egr 1位点。通过用已知的反式作用因子与报告基因质粒分别进行共转染 ,提示Sp1是最为有效的反式作用因子 ,而不是Egr 1。通过泳动滞后和抗体介导的超迁移实验 ,证实Sp1确实是参与作用的转录因子。结论 HE4基因的转录活性主要是由转录因子Sp1与位于 ( 71/ 4 8)区域的两个Egr 1位点结合所介导的。

HE4基因表达载体的构建及对卵巢癌细胞HO8910生长侵袭的影响

目的探讨卵巢癌基因HE4对卵巢癌细胞增殖及侵袭能力的影响。方法构建针对HE4基因的PcDNA3.1/HE4载体,脂质体法介导PcDNA3.1/HE4载体转染人浆液性卵巢癌细胞系HO8910,WESTERN-BLOT检测转染前后细胞内HE4蛋白的表达效果。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、平板克隆形成实验观察HE4基因对细胞增殖能力的影响,经细胞粘附实验、体外侵袭力实验比较转染前后细胞侵袭能力的变化。结果Western-blot结果显示PcDNA3.1/HE4载体成功转染HO8910细胞并显著提高该细胞HE4基因的表达,细胞增殖能力较前无明显变化,侵袭能力明显下降。结论通过增强HE4基因表达,可降低其侵袭能力,有望成为卵巢癌基因治疗的新的候选基因。

卵巢癌相关基因HE4在杆状病毒表达系统的表达与鉴定

目的:使卵巢癌相关基因HE4在杆状病毒表达系统中获得表达。方法:将卵巢癌相关基因HE4克隆到pMagic-his-HE4中,通过转化E.coliDH10B筛选克隆,阳性克隆通过接合转移的方式与杆状病毒框架质粒体外重组,构建Bac-phes-HE4杆状病毒表达载体,后者经Lipofectamine2000介导转染Sf9细胞,获取重组病毒,扩增病毒并感染Sf9细胞进行表达,SDS-PAGE、Western blot分析鉴定表达蛋白。结果:经HE4抗体、6×His单抗鉴定,成功通过杆状病毒表达系统获得重组卵巢癌相关基因HE4。结论:卵巢癌相关基因HE4通过接合转移的方法在杆状病毒表达系统中成功表达。

骨桥蛋白及人附睾蛋白4基因在上皮性卵巢癌中的表达及临床价值

目的研究卵巢癌中骨桥蛋白(OPN)与人附睾蛋白4 (HE4)表达与临床病理因素之间的关系,并分析其对患者预后的影响。方法选择本院2015年1月至2016年7月收治的21例卵巢上皮交界性肿瘤患者、16例卵巢上皮性良性肿瘤患者以及55例上皮性卵巢癌患者作为本次研究对象,应用免疫组织化学S-P法分别对其肿瘤组织中的OPN与HE4蛋白的表达情况进行检测与分析,并观察蛋白表达与临床病理因素之间的相关性及预后影响。结果上皮性卵巢癌OPN、HE4的阳性表达率明显高于卵巢上皮交界性肿瘤及卵巢上皮性良性肿瘤(P<0.05),OPN、HE4的阳性表达率随着临床分期与病理分级的增高而增高,Ⅲ期、Ⅳ期明显高于Ⅰ期(P<0.05);病理分级3级明显高于1级(P<0.05);淋巴结转移者显著高于无淋巴结转移者(P<0.05)。结论 OPN、HE4基因蛋白高表达与上皮性卵巢癌浸润、侵袭与淋巴结转移存在明显相关性,且对患者预后有促进作用。