miR-375在子宫内膜癌HEC-1-B细胞中的生物学功能

目的:探讨miR-375在Ⅱ型子宫内膜癌中的表达及对HEC-1-B细胞增殖、凋亡的影响。方法:miRNA芯片分析Ⅱ型子宫内膜癌miRNA表达谱。利用lipofectamine 2000转染HEC-1-B细胞。实时荧光定量PCR检测转染后miR-375的表达。CCK-8检测转染后细胞增殖能力的改变。流式细胞仪检测细胞转染效率及转染后细胞凋亡情况。结果:miR-375在Ⅱ型子宫内膜癌组织中低表达。转染效率达73.43%。转染后实验组miR-375表达量较NC组和对照组明显增加(P<0.05)。实验组较NC组生长明显受抑(P<0.05)。实验组较NC组、对照组凋亡明显增加(P<0.05)。结论:初步证明miR-375抑制Ⅱ型子宫内膜癌细胞增殖并促进凋亡,可能成为Ⅱ型子宫内膜癌基因治疗的靶点。

miR-449b通过E2F3-p53途径抑制子宫内膜腺癌细胞HEC-1-B的生长

目的探讨miR-449b对子宫内膜腺癌细胞HEC-1-B增殖和凋亡的影响及其作用的分子途径。方法脂质体lipofectamine 2000包被miR-449b并转染入HEC-1-B细胞,实时荧光定量PCR检测转染前后细胞内miR-449b的表达水平,CCK-8试验检测转染前后细胞活性,流式细胞仪来检测转染前后细胞凋亡情况。细胞克隆形成实验观察转染前后细胞克隆形成能力。Western blot方法检查转染前后细胞内E2F3蛋白和p53的表达情况。结果转染后实验组miR-449b表达量较NC组增加,细胞增殖能力和克隆能力减弱,而细胞凋亡增加(P<0.05)。miR-449b使E2F3表达下调,p53表达上调(P<0.05)。结论 miR-449b通过E2F3-p53途径抑制HEC-1-B细胞增殖并促进凋亡,可能作为治疗子宫内膜腺癌的新分子靶标。

真核表达质粒EX-Y2069-M 29的构建及LRP16基因在人子宫内膜癌HEC-1-B细胞中的表达

目的构建LRP16基因真核表达质粒EX-Y2069-M29,检测LRP16基因在人子宫内膜癌HEC-1-B细胞中的表达。方法体外培养人子宫内膜癌HEC-1-B细胞,提取总RNA,应用PCR技术,扩增获得LRP16基因编码序列片段,克隆入真核表达载体EX-Y2069-M29,对重组质粒进行酶切和测序鉴定后,采用脂质体法将LRP16真核表达载体EX-Y2069-M29和EX-NEG-M29空质粒转染细胞,利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和Western blot法分析LRP16基因的表达情况。结果经LRP16基因真核表达质粒EX-Y2069-M29转染的HEC-1-B细胞中检测到LRP16基因的表达。结论构建的LRP16基因重组真核表达质粒EX-Y2069-M29转染HEC-1-B细胞后,可在HEC-1-B细胞中稳定表达,为进一步研究LRP16基因奠定了基础。

白细胞介素17诱导子宫内膜癌HEC-1-B细胞对单核细胞趋化的研究

目的:探讨白细胞介素17(IL-17)诱导人子宫内膜癌HEC-1-B细胞对单核细胞的趋化作用,及其对趋化因子CCL2、CCL5表达的影响。方法:分别采用0ng/ml(对照组)、1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml浓度的IL-17诱导人子宫内膜癌HEC-1-B细胞,24h后收集细胞上清液置于transwell小室的下室,上室放入THP-1细胞,计数进入下室的THP-1细胞并计算趋化指数;采用荧光定量PCR方法和ELISA方法检测1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml IL-17对HEC-1-B细胞CCL2、CCL5 mRNA基因表达以及蛋白表达水平的影响。结果:单核细胞的趋化能力与IL-17呈浓度依赖性,趋化指数在对照组及1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml 3个实验组分别为2.05±0.17、2.93±0.22、3.53±0.28及4.57±0.37,4组的差异有统计学意义(P<0.01)。各实验组细胞CCL2及CCL5 mRNA和蛋白表达水平与对照组比较明显升高(P<0.05),表达水平均随着IL-17浓度增加而增高。结论:IL-17诱导后的子宫内膜癌细胞液可以促进单核细胞的趋化作用,其机制可能与IL-17促进HEC-1-B细胞分泌趋化因子CCL2、CCL5的表达上调有关。

二烯丙基二硫化物对人子宫内膜癌HEC-1-B细胞增殖抑制和凋亡诱导作用

目的研究二烯丙基二硫化物(DADS)对人子宫内膜癌HEC-1-B细胞增殖和凋亡的影响。方法 MTT法检测DADS对HEC-1-B细胞的增殖抑制作用,采用AnnexinV/PI双标记流式细胞术检测DADS对HEC-1-B细胞的凋亡诱导作用;Hoechst-33528染色,观察细胞凋亡形态。结果用100、200、400μmol/L DADS处理HEC-1-B细胞24、48 h,在100μmol/L剂量即可抑制细胞的增殖,随着剂量和时间的增加,DADS对细胞的抑制作用明显增强。DADS对HEC-1-B细胞的增殖抑制存在时间-剂量依赖关系。用200μmol/LDADS处理48 h后,流式细胞术检测细胞凋亡率达40.91%。Hoechst-33528染色可见细胞出现明显的凋亡形态学改变。结论 DADS对HEC-1-B细胞具有增殖抑制并诱导凋亡的作用,提示DADS对子宫内膜癌的治疗可能具有重要价值。

塞来昔布对子宫内膜癌细胞株HEC-1-B生长及其VEGF表达的影响

目的研究塞来昔布对子宫内膜癌细胞株HEC-1-B的生长及其血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法应用不同浓度的塞来昔布作用于HEC-1-B细胞,MTT法检测塞来昔布作用于HEC-1-B细胞24、48、72h后,对HEC-1-B细胞增殖的影响。用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析其对HEC-1-B细胞VEGF mRNA表达的影响,同时用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测HEC-1-B细胞上清中VEGF蛋白表达量。结果塞来昔布对HEC-1-B细胞的生长有抑制作用,且呈剂量和时间依赖性;与对照组相比,塞来昔布能降低HEC-1-B细胞VEGF mRNA及蛋白的表达。结论塞来昔布能抑制HEC-1-B细胞的生长及VEGF的分泌。

真核表达质粒EX-Y2069-M29的构建与LRP16在人子宫内膜癌HEC-1-B细胞中的表达及作用

目的构建真核表达质粒EX-Y2069-M29,检测其在人子宫内膜癌HEC-1-B细胞中的表达,并观察LRP16对细胞增殖的影响。方法从HEC-1-B细胞中提取总RNA,应用PCR技术,扩增获得LRP16基因编码序列片段,克隆入真核表达载体EX-Y2069-M29,对重组质粒进行酶切和测序鉴定后,以脂质体介导法转染至HEC-1-B细胞,采用Westernblot法检测LRP16蛋白的表达,用WST-1法检测细胞增殖情况。结果酶切和测序结果证明真核表达质粒EX-Y2069-M29的DNA序列完全正确,将其转染HEC-1-B细胞后,LRP16蛋白表达明显增加;转染后HEC-1-B细胞在体外能继续增殖,但增殖能力明显下降。结论 LRP16基因重组真核表达质粒EX-Y2069-M29构建成功,并能在HEC-1-B细胞中表达,为进一步研究LRP16基因奠定了基础;转染LRP16后并没有促进HEC-1-B细胞体外增殖,LRP16基因用于子宫内膜癌基因治疗可能具有潜在价值。

竹节香附素通过抑制JAK/STAT3信号转导通路抑制人子宫内膜癌HEC-1-B细胞的侵袭转移

目的:探讨竹节香附素对人子宫内膜癌HEC-1-B细胞的侵袭转移影响,以及JAK/STAT3信号转导通路在此过程中发挥的作用。方法:选取正常贴壁生长的对数期人子宫内膜癌HEC-1-B细胞,分成两组,一组用竹节香附素处理,为观察组;另一组用生理盐水处理,作为对照组。划痕实验比较两组的细胞在不同时间点的迁移情况;Transwell实验比较两组细胞的侵袭能力;CCK-8检测两组细胞的增殖能力;荧光定量PCR和Western blot检测细胞中Janus激酶(JAK)、信号转导子和转录激活子(STAT3)基因的表达情况。结果:48 h后,观察组的迁移距离小于对照组(P<0.05),Transwell实验观察组侵入下方小室的细胞数量低于对照组(P<0.05)。两组细胞在48 h内的细胞增殖结果差异并无统计学意义(P>0.05)。相比较对照组,荧光定量PCR和Western blot的结果均显示观察组的JAK和STAT3基因表达量下降(P<0.05)。结论:竹节香附素可显著抑制人子宫内膜癌HEC-1-B细胞的侵袭和转移能力,其机制可能通过调控JAK/STAT3信号通路而发挥作用。

四种人子宫内膜癌细胞系中IGFBP-rP1的定位及表达

目的:检测不同子宫内膜癌细胞系中胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1(IGFBP-r P1)的定位及表达情况。方法:体外培养子宫内膜癌细胞Ishikawa、RL95-2、HEC-1B和HEC-1A,细胞免疫荧光法检测IGFBP-r P1在4种子宫内膜癌细胞中的定位;实时荧光定量PCR法与Western blot法检测4种子宫内膜癌细胞中IGFBP-r P1 mRNA及蛋白的表达水平。结果:细胞免疫荧光染色示IGFBP-r P1主要定位于4种子宫内膜癌细胞的胞浆。子宫内膜癌Ishikawa、RL95-2细胞中IGFBP-r P1 mRNA及蛋白表达水平明显高于HEC-1A、HEC-1B细胞(P<0.001)。HEC-1A细胞中IGFBP-r P1 mRNA及蛋白表达量最低,Ishikawa细胞中表达量最高(P均<0.05)。结论:4种子宫内膜癌细胞系中均表达IGFBP-r P1。

白细胞介素-17对子宫内膜癌细胞株HEC-1-B基质金属蛋白酶-2,-9基因表达及肿瘤细胞侵袭转移的影响

目的探讨白细胞介素(interleukin,IL)-17对子宫内膜癌细胞株HEC-1-B基质金属蛋白酶(matric metalloproteinases,MMP)-2,-9基因表达及肿瘤细胞侵袭转移能力的影响。方法选择对数生长期人子宫内膜癌细胞株HEC-1-B,在无血清培养基中加入白细胞介素-17终浓度分别为1 ng/mL,10 ng/mL,100 ng/mL和无血清培养(空白对照)进行干扰处理后,分别纳入干扰组(干扰组1、干扰组2、干扰组3)及对照组。采用免疫荧光细胞化学方法检测子宫内膜癌细胞株HEC-1-B是否表达白细胞介素-17特异性受体C(IL-17RC)蛋白。采用逆转录荧光定量PCR法检测不同浓度白细胞介素-17对子宫内膜癌细胞株HEC-1-B基质金属蛋白酶-2,-9 mRNA基因表达水平的影响。采用transwell小室检测不同浓度白细胞介素-17干预后,子宫内膜癌细胞株HEC-1-B侵袭转移能力的变化。结果人子宫内膜癌细胞株HEC-1-B高表达特异性白细胞介素-17受体C。白细胞介素-17各浓度干扰组(干扰组1,干扰组2,干扰组3)与对照组比较,干扰组基质金属蛋白酶-9 mRNA表达增加,差异有显著意义(P<0.01),且各浓度干扰组表现呈浓度依赖;而干扰组基质金属蛋白酶-2 mRNA表达无明显变化;干扰组穿膜细胞数明显增多,与对照组比较,差异有显著意义(P<0.01),且各浓度干扰组表现呈浓度依赖;而干扰组2与干扰组3穿膜细胞数较干扰组1增多,差异有显著意义(P<0.05)。结论白细胞介素-17能增强基质金属蛋白酶-9基因表达,促进子宫内膜癌细胞侵袭转移。

LRP16基因在子宫内膜癌组织中的表达及其对细胞增殖的作用

目的研究LRP16在子宫内膜癌组织中的表达变化及其对子宫内膜癌HEC-1-B细胞增殖的影响。方法应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测26例正常子宫内膜组织及10例子宫内膜癌组织中LRP16mRNA的表达;LRP16转染细胞,RT-PCR证实转染的成功性,WST-1法观察细胞增殖的变化。结果子宫内膜癌组织中LRP16mRNA的阳性表达率及表达水平(分别为83.33%、0.82±0.21)明显高于正常子宫内膜组织(分别为30.00%、0.47±0.18),二者比较差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR检测结果显示转染后细胞LRP16mRNA表达明显增加。转染组HEC-1-B细胞在体外能继续增殖,但增殖能力并没有增强。结论 LRP16的异常表达可能与子宫内膜癌的发生、发展密切相关,LRP16基因用于子宫内膜癌基因治疗可能具有潜在价值。

白血病相关基因LRP16真核表达质粒的构建及其在人子宫内膜癌HEC-1-B细胞中的表达

目的:构建白血病相关基因LRP16真核表达质粒,并检测其在人子宫内膜癌HEC-1-B细胞中的表达。方法:从人子宫内膜癌HEC-1-B细胞中提取总RNA,应用PCR技术,扩增获得LRP16基因编码序列片段,克隆入真核表达载体EX-Y2069-M29,对重组质粒进行酶切和测序鉴定后,以脂质体介导法转染至HEC-1-B细胞,采用Western blot法检测LRP16蛋白的表达。结果:酶切和测序结果证明LRP16基因真核表达质粒EX-Y2069-M29的DNA序列完全正确,将其转染HEC-1-B细胞后,LRP16蛋白表达明显增加。结论:LRP16基因重组真核表达质粒EX-Y2069-M29构建成功,并能在HEC-1-B细胞中表达,为进一步研究LRP16基因奠定了基础。

华蟾素对子宫内膜癌HEC-1-B细胞株凋亡和增殖的影响

目的:探讨华蟾素对体外培养子宫内膜癌HEC-1-B细胞凋亡、增殖以及侵袭能力的影响。方法:体外培养HEC-1-B细胞,经不同浓度华蟾素(0.2mg/ml、2mg/ml和20mg/ml)干预24h后,采用MTT法观察细胞生长情况,流式细胞术分析细胞凋亡,Transwell小室检测细胞体外侵袭能力。结果:华蟾素能有效抑制HEC-1-B细胞生长,诱导细胞凋亡。未经华蟾素处理的细胞凋亡率仅为2.5%,经0.2mg/ml、2mg/ml、20mg/ml的华蟾素作用24h后,细胞凋亡率分别为7.4%、44.3%和78.5%,趋势卡方检验x2=165.4983,P<0.0001。HEC-1-B细胞经华蟾素作用后,细胞侵袭能力降低。在高浓度时,华蟾素有可能存在细胞毒作用。结论:华蟾素能通过诱导HEC-1-B细胞凋亡,从而抑制HEC-1-B细胞生长,并且降低细胞的侵袭能力。

莪术油注射液诱导人子宫内膜癌HEC-1-B细胞凋亡机制研究

目的:研究莪术油注射液对人子宫内膜癌HEC-1-B细胞体外增殖及相关蛋白表达情况的影响。方法:将体外培养的HEC-1-B细胞随机分5组,对照组、莪术油Ⅰ组、莪术油Ⅱ组、莪术油Ⅲ组、莪术油Ⅳ组。分别给与不同浓度的莪术油注射液培养48 h、72 h。采用MTT法检测HEC-1-B生长抑制率、Hoechest33258荧光染色观察HEC-1-B细胞核形态的变化、Western blot法检测相关蛋白的表达水平。结果:不同浓度莪术油注射液均对HEC-1-B细胞增殖具有抑制作用,同时诱导HEC-1-B细胞凋亡,上调Caspase-3蛋白的表达,下调Survivin蛋白的表达,其强度随着药物作用浓度及时间的增加而增强,呈时间-剂量依赖性,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:不同浓度莪术油注射液在一定浓度范围内可抑制HEC-1-B细胞生长,且诱导其凋亡,其机制可能与下调子宫内膜癌HEC-1-B细胞Survivin蛋白的表达,上调Caspase-3蛋白的表达有关。

咪唑诱导的人子宫内膜癌细胞HEC-1B空泡化现象研究

咪唑作为一种弱碱性物质,处理动物子宫内膜细胞后,可诱导其产生空泡化现象,进而影响其生殖生理功能。本研究使用人子宫内膜癌细胞HEC-1B作为模型,使用咪唑处理导致细胞空泡化后探讨空泡化产生的生理机制。通过基因芯片分析、荧光定量PCR检测、激光共聚焦显微镜观察等方法进行研究。结果表明:咪唑处理人子宫内膜癌细胞HEC-1B后,空泡型质子泵(V-ATPase)亚基V0D2基因表达量上调。使用荧光定量PCR验证芯片结果,V-ATPase亚基V0D2 mRNA表达量有所上调。对V-ATPase另外一个亚基V1E1基因进行荧光定量PCR,其mRNA表达量也有所上调。使用V-ATPase抑制剂巴弗洛霉素A1和咪唑共同处理人子宫内膜癌细胞HEC-1B后,通过吖啶橙染色,激光共聚焦显微镜观察,咪唑诱导的空泡被显著抑制。上述结果证明了V-ATPase在咪唑诱导的细胞空泡化中的重要作用。

建立人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤模型及其生物学特性的探讨

目的:建立人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤模型,为人子宫内膜癌的诊断和治疗提供理想的在体研究工具。方法:体外培养人子宫内膜癌细胞株HEC-1B,采用皮下注射接种至裸鼠体内,待肿瘤直径达0.8～1.0cm时,将其切下剪成直径为1～2mm小块,再接种至另一裸鼠皮下进行传代。病理组织学检查,光镜、电镜、流式细胞术分析,检测皮下瘤组织和肿瘤细胞系ER、PR、CK表达。结果:成功建立了人子宫内膜癌细胞株HEC-1B裸鼠皮下移植瘤模型,并传至第二代,形成的肿瘤具备人肿瘤生物学特点。HEC-1B、皮下移植瘤DI(DNAindex)值分别为1.81±0.46、1.95±0.53,均示异倍体。可见裸鼠皮下移植瘤与HEC-1B细胞的恶性肿瘤生物学特性基本一致。结论:通过此细胞系建立的人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤模型的组织病理学免疫组化表型,超微结构,DNA倍体水平特点与来源肿瘤细胞相一致,而且肿瘤的移植生长率为100%,说明该模型系统的生物学特性是稳定的。建立的人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤模型具有人子宫内膜癌特征,可用于研究子宫内膜癌的生物学特性,为进一步开展子宫内膜癌的实验研究提供理想的动物模型。