miR-375在子宫内膜癌HEC-1-B细胞中的生物学功能

目的:探讨miR-375在Ⅱ型子宫内膜癌中的表达及对HEC-1-B细胞增殖、凋亡的影响。方法:miRNA芯片分析Ⅱ型子宫内膜癌miRNA表达谱。利用lipofectamine 2000转染HEC-1-B细胞。实时荧光定量PCR检测转染后miR-375的表达。CCK-8检测转染后细胞增殖能力的改变。流式细胞仪检测细胞转染效率及转染后细胞凋亡情况。结果:miR-375在Ⅱ型子宫内膜癌组织中低表达。转染效率达73.43%。转染后实验组miR-375表达量较NC组和对照组明显增加(P<0.05)。实验组较NC组生长明显受抑(P<0.05)。实验组较NC组、对照组凋亡明显增加(P<0.05)。结论:初步证明miR-375抑制Ⅱ型子宫内膜癌细胞增殖并促进凋亡,可能成为Ⅱ型子宫内膜癌基因治疗的靶点。

miR-449b通过E2F3-p53途径抑制子宫内膜腺癌细胞HEC-1-B的生长

目的探讨miR-449b对子宫内膜腺癌细胞HEC-1-B增殖和凋亡的影响及其作用的分子途径。方法脂质体lipofectamine 2000包被miR-449b并转染入HEC-1-B细胞,实时荧光定量PCR检测转染前后细胞内miR-449b的表达水平,CCK-8试验检测转染前后细胞活性,流式细胞仪来检测转染前后细胞凋亡情况。细胞克隆形成实验观察转染前后细胞克隆形成能力。Western blot方法检查转染前后细胞内E2F3蛋白和p53的表达情况。结果转染后实验组miR-449b表达量较NC组增加,细胞增殖能力和克隆能力减弱,而细胞凋亡增加(P<0.05)。miR-449b使E2F3表达下调,p53表达上调(P<0.05)。结论 miR-449b通过E2F3-p53途径抑制HEC-1-B细胞增殖并促进凋亡,可能作为治疗子宫内膜腺癌的新分子靶标。

真核表达质粒EX-Y2069-M 29的构建及LRP16基因在人子宫内膜癌HEC-1-B细胞中的表达

目的构建LRP16基因真核表达质粒EX-Y2069-M29,检测LRP16基因在人子宫内膜癌HEC-1-B细胞中的表达。方法体外培养人子宫内膜癌HEC-1-B细胞,提取总RNA,应用PCR技术,扩增获得LRP16基因编码序列片段,克隆入真核表达载体EX-Y2069-M29,对重组质粒进行酶切和测序鉴定后,采用脂质体法将LRP16真核表达载体EX-Y2069-M29和EX-NEG-M29空质粒转染细胞,利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和Western blot法分析LRP16基因的表达情况。结果经LRP16基因真核表达质粒EX-Y2069-M29转染的HEC-1-B细胞中检测到LRP16基因的表达。结论构建的LRP16基因重组真核表达质粒EX-Y2069-M29转染HEC-1-B细胞后,可在HEC-1-B细胞中稳定表达,为进一步研究LRP16基因奠定了基础。

白细胞介素17诱导子宫内膜癌HEC-1-B细胞对单核细胞趋化的研究

目的:探讨白细胞介素17(IL-17)诱导人子宫内膜癌HEC-1-B细胞对单核细胞的趋化作用,及其对趋化因子CCL2、CCL5表达的影响。方法:分别采用0ng/ml(对照组)、1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml浓度的IL-17诱导人子宫内膜癌HEC-1-B细胞,24h后收集细胞上清液置于transwell小室的下室,上室放入THP-1细胞,计数进入下室的THP-1细胞并计算趋化指数;采用荧光定量PCR方法和ELISA方法检测1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml IL-17对HEC-1-B细胞CCL2、CCL5 mRNA基因表达以及蛋白表达水平的影响。结果:单核细胞的趋化能力与IL-17呈浓度依赖性,趋化指数在对照组及1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml 3个实验组分别为2.05±0.17、2.93±0.22、3.53±0.28及4.57±0.37,4组的差异有统计学意义(P<0.01)。各实验组细胞CCL2及CCL5 mRNA和蛋白表达水平与对照组比较明显升高(P<0.05),表达水平均随着IL-17浓度增加而增高。结论:IL-17诱导后的子宫内膜癌细胞液可以促进单核细胞的趋化作用,其机制可能与IL-17促进HEC-1-B细胞分泌趋化因子CCL2、CCL5的表达上调有关。

HEC-1-B细胞培养上清液对子宫内膜癌树突状细胞成熟的影响

目的探讨子宫内膜癌细胞株HEC-1-B培养上清液对子宫内膜癌患者外周血单核细胞源性树突状细胞(DCs)成熟的影响。方法梯度离心法分离子宫内膜癌患者外周血单核细胞,在含重组人粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子和重组人白介素4的DCs培养液中培养,使其分化为DCs。实验组将收集的子宫内膜癌细胞株HEC-1-B培养上清液过滤后与DCs共同孵育48 h,对照组不给予任何干预措施。镜下观察DCs形态变化,采用流式细胞术检测DCs表型(CD1α、CD83、CD86)表达,ELISA法检测细胞上清液中白细胞介素10(IL-10)、IL-12含量。结果实验组细胞生长状态较好,具有典型的树枝状突起,数量不等、形态不一;实验组DCs表型CD1α、CD83、CD86分子的表达分别较对照组升高(P<0.01);实验组DCs分泌的细胞因子IL-10水平较对照组降低(P<0.01),IL-12水平较对照组升高(P<0.01)。结论子宫内膜癌细胞株HEC-1-B培养上清液能够在体外诱导子宫内膜癌患者外周血单核细胞源性DCs成熟。

二烯丙基二硫化物对人子宫内膜癌HEC-1-B细胞增殖抑制和凋亡诱导作用

目的研究二烯丙基二硫化物(DADS)对人子宫内膜癌HEC-1-B细胞增殖和凋亡的影响。方法 MTT法检测DADS对HEC-1-B细胞的增殖抑制作用,采用AnnexinV/PI双标记流式细胞术检测DADS对HEC-1-B细胞的凋亡诱导作用;Hoechst-33528染色,观察细胞凋亡形态。结果用100、200、400μmol/L DADS处理HEC-1-B细胞24、48 h,在100μmol/L剂量即可抑制细胞的增殖,随着剂量和时间的增加,DADS对细胞的抑制作用明显增强。DADS对HEC-1-B细胞的增殖抑制存在时间-剂量依赖关系。用200μmol/LDADS处理48 h后,流式细胞术检测细胞凋亡率达40.91%。Hoechst-33528染色可见细胞出现明显的凋亡形态学改变。结论 DADS对HEC-1-B细胞具有增殖抑制并诱导凋亡的作用,提示DADS对子宫内膜癌的治疗可能具有重要价值。

真核表达质粒EX-Y2069-M29的构建与LRP16在人子宫内膜癌HEC-1-B细胞中的表达及作用

目的构建真核表达质粒EX-Y2069-M29,检测其在人子宫内膜癌HEC-1-B细胞中的表达,并观察LRP16对细胞增殖的影响。方法从HEC-1-B细胞中提取总RNA,应用PCR技术,扩增获得LRP16基因编码序列片段,克隆入真核表达载体EX-Y2069-M29,对重组质粒进行酶切和测序鉴定后,以脂质体介导法转染至HEC-1-B细胞,采用Westernblot法检测LRP16蛋白的表达,用WST-1法检测细胞增殖情况。结果酶切和测序结果证明真核表达质粒EX-Y2069-M29的DNA序列完全正确,将其转染HEC-1-B细胞后,LRP16蛋白表达明显增加;转染后HEC-1-B细胞在体外能继续增殖,但增殖能力明显下降。结论 LRP16基因重组真核表达质粒EX-Y2069-M29构建成功,并能在HEC-1-B细胞中表达,为进一步研究LRP16基因奠定了基础;转染LRP16后并没有促进HEC-1-B细胞体外增殖,LRP16基因用于子宫内膜癌基因治疗可能具有潜在价值。

紫杉醇对HEC-1-B细胞凋亡诱导作用的实验研究

目的:探讨紫杉醇对体外培养的人子宫内膜腺癌细胞(HEC-1-B)细胞凋亡的诱导作用.方法:体外培养HEC-1-B细胞,用浓度2,4,8,16,20nmol/L的紫杉醇作用细胞12h,24h,48h后,提取细胞DNA片段进行琼脂糖凝胶电泳;消化HEC-1-B细胞并经碘化丙锭(PI)染色后,流式细胞仪(FCM)对细胞进行细胞周期分析;电子显微镜对紫杉醇作用后的HEC-1-B细胞进行形态学分析.结果:体外培养的HEC-1-B细胞经不同浓度的紫杉醇处理后,细胞生长明显受到抑制;于8nmol/L紫杉醇作用48h后可观察到细胞凋亡特异的DNA梯状电泳;流式细胞仪分析证实,细胞凋亡率达19.7%;且电镜下可观察到典型的凋亡早期形态学改变.结论:人子宫内膜腺癌细胞(HEC-1-B)细胞对紫杉醇具有药物敏感性,紫杉醇对HEC-1-B细胞的杀伤作用,是通过诱导细胞凋亡途径实现的.

竹节香附素通过抑制JAK/STAT3信号转导通路抑制人子宫内膜癌HEC-1-B细胞的侵袭转移

目的:探讨竹节香附素对人子宫内膜癌HEC-1-B细胞的侵袭转移影响,以及JAK/STAT3信号转导通路在此过程中发挥的作用。方法:选取正常贴壁生长的对数期人子宫内膜癌HEC-1-B细胞,分成两组,一组用竹节香附素处理,为观察组;另一组用生理盐水处理,作为对照组。划痕实验比较两组的细胞在不同时间点的迁移情况;Transwell实验比较两组细胞的侵袭能力;CCK-8检测两组细胞的增殖能力;荧光定量PCR和Western blot检测细胞中Janus激酶(JAK)、信号转导子和转录激活子(STAT3)基因的表达情况。结果:48 h后,观察组的迁移距离小于对照组(P<0.05),Transwell实验观察组侵入下方小室的细胞数量低于对照组(P<0.05)。两组细胞在48 h内的细胞增殖结果差异并无统计学意义(P>0.05)。相比较对照组,荧光定量PCR和Western blot的结果均显示观察组的JAK和STAT3基因表达量下降(P<0.05)。结论:竹节香附素可显著抑制人子宫内膜癌HEC-1-B细胞的侵袭和转移能力,其机制可能通过调控JAK/STAT3信号通路而发挥作用。

醋酸曲谱瑞林对人子宫内膜癌细胞株HEC-1-B的作用及对PCNA表达的影响

目的研究醋酸曲谱瑞林对人子宫内膜癌细胞株HEC-1-B的作用及其分子作用机制。方法以不同浓度醋酸曲谱瑞林(0,10-9,10-8,10-7,10-6,10-5mol/L)体外作用于中分化人子宫内膜腺癌细胞HEC-1-B(0mol/L组作为对照组,其余各组作为实验组),用MTT法检测细胞抑制率;免疫细胞化学检测HEC-1-B细胞PCNA蛋白表达,并用病理图像分析软件进行半定量分析。RT-PCR法检测HEC-1-B细胞PCNAmRNA的表达。结果①当醋酸曲谱瑞林浓度为10-9mol/L时,HEC-1-B细胞即受到抑制,抑制率为36.8%;随着浓度的增大,抑制率渐高,到浓度为10-5mol/L时抑制率上升至57.4%。与对照组比较,实验组抑制率差异有统计学意义(P<0.05)。②浓度从10-9-10-5mol/L的醋酸曲谱瑞林作用72h后,PC-NA蛋白和PCNAmRNA表达均有不同程度的下降,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论醋酸曲谱瑞林在体外对HEC-1-B细胞可能有直接的抑制作用,且呈剂量依赖关系。醋酸曲谱瑞林抑制HEC-1-B细胞增殖的分子机制可能与下调PCNA蛋白表达有关。

塞来昔布对子宫内膜癌细胞株HEC-1-B生长及其VEGF表达的影响

目的研究塞来昔布对子宫内膜癌细胞株HEC-1-B的生长及其血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法应用不同浓度的塞来昔布作用于HEC-1-B细胞,MTT法检测塞来昔布作用于HEC-1-B细胞24、48、72h后,对HEC-1-B细胞增殖的影响。用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析其对HEC-1-B细胞VEGF mRNA表达的影响,同时用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测HEC-1-B细胞上清中VEGF蛋白表达量。结果塞来昔布对HEC-1-B细胞的生长有抑制作用,且呈剂量和时间依赖性;与对照组相比,塞来昔布能降低HEC-1-B细胞VEGF mRNA及蛋白的表达。结论塞来昔布能抑制HEC-1-B细胞的生长及VEGF的分泌。

白细胞介素-17对子宫内膜癌细胞株HEC-1-B基质金属蛋白酶-2,-9基因表达及肿瘤细胞侵袭转移的影响

目的探讨白细胞介素(interleukin,IL)-17对子宫内膜癌细胞株HEC-1-B基质金属蛋白酶(matric metalloproteinases,MMP)-2,-9基因表达及肿瘤细胞侵袭转移能力的影响。方法选择对数生长期人子宫内膜癌细胞株HEC-1-B,在无血清培养基中加入白细胞介素-17终浓度分别为1 ng/mL,10 ng/mL,100 ng/mL和无血清培养(空白对照)进行干扰处理后,分别纳入干扰组(干扰组1、干扰组2、干扰组3)及对照组。采用免疫荧光细胞化学方法检测子宫内膜癌细胞株HEC-1-B是否表达白细胞介素-17特异性受体C(IL-17RC)蛋白。采用逆转录荧光定量PCR法检测不同浓度白细胞介素-17对子宫内膜癌细胞株HEC-1-B基质金属蛋白酶-2,-9 mRNA基因表达水平的影响。采用transwell小室检测不同浓度白细胞介素-17干预后,子宫内膜癌细胞株HEC-1-B侵袭转移能力的变化。结果人子宫内膜癌细胞株HEC-1-B高表达特异性白细胞介素-17受体C。白细胞介素-17各浓度干扰组(干扰组1,干扰组2,干扰组3)与对照组比较,干扰组基质金属蛋白酶-9 mRNA表达增加,差异有显著意义(P<0.01),且各浓度干扰组表现呈浓度依赖;而干扰组基质金属蛋白酶-2 mRNA表达无明显变化;干扰组穿膜细胞数明显增多,与对照组比较,差异有显著意义(P<0.01),且各浓度干扰组表现呈浓度依赖;而干扰组2与干扰组3穿膜细胞数较干扰组1增多,差异有显著意义(P<0.05)。结论白细胞介素-17能增强基质金属蛋白酶-9基因表达,促进子宫内膜癌细胞侵袭转移。

白血病相关基因LRP16真核表达质粒的构建及其在人子宫内膜癌HEC-1-B细胞中的表达

目的:构建白血病相关基因LRP16真核表达质粒,并检测其在人子宫内膜癌HEC-1-B细胞中的表达。方法:从人子宫内膜癌HEC-1-B细胞中提取总RNA,应用PCR技术,扩增获得LRP16基因编码序列片段,克隆入真核表达载体EX-Y2069-M29,对重组质粒进行酶切和测序鉴定后,以脂质体介导法转染至HEC-1-B细胞,采用Western blot法检测LRP16蛋白的表达。结果:酶切和测序结果证明LRP16基因真核表达质粒EX-Y2069-M29的DNA序列完全正确,将其转染HEC-1-B细胞后,LRP16蛋白表达明显增加。结论:LRP16基因重组真核表达质粒EX-Y2069-M29构建成功,并能在HEC-1-B细胞中表达,为进一步研究LRP16基因奠定了基础。

莪术油注射液诱导人子宫内膜癌HEC-1-B细胞凋亡机制研究

目的:研究莪术油注射液对人子宫内膜癌HEC-1-B细胞体外增殖及相关蛋白表达情况的影响。方法:将体外培养的HEC-1-B细胞随机分5组,对照组、莪术油Ⅰ组、莪术油Ⅱ组、莪术油Ⅲ组、莪术油Ⅳ组。分别给与不同浓度的莪术油注射液培养48 h、72 h。采用MTT法检测HEC-1-B生长抑制率、Hoechest33258荧光染色观察HEC-1-B细胞核形态的变化、Western blot法检测相关蛋白的表达水平。结果:不同浓度莪术油注射液均对HEC-1-B细胞增殖具有抑制作用,同时诱导HEC-1-B细胞凋亡,上调Caspase-3蛋白的表达,下调Survivin蛋白的表达,其强度随着药物作用浓度及时间的增加而增强,呈时间-剂量依赖性,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:不同浓度莪术油注射液在一定浓度范围内可抑制HEC-1-B细胞生长,且诱导其凋亡,其机制可能与下调子宫内膜癌HEC-1-B细胞Survivin蛋白的表达,上调Caspase-3蛋白的表达有关。

华蟾素对子宫内膜癌HEC-1-B细胞株凋亡和增殖的影响

目的:探讨华蟾素对体外培养子宫内膜癌HEC-1-B细胞凋亡、增殖以及侵袭能力的影响。方法:体外培养HEC-1-B细胞,经不同浓度华蟾素(0.2mg/ml、2mg/ml和20mg/ml)干预24h后,采用MTT法观察细胞生长情况,流式细胞术分析细胞凋亡,Transwell小室检测细胞体外侵袭能力。结果:华蟾素能有效抑制HEC-1-B细胞生长,诱导细胞凋亡。未经华蟾素处理的细胞凋亡率仅为2.5%,经0.2mg/ml、2mg/ml、20mg/ml的华蟾素作用24h后,细胞凋亡率分别为7.4%、44.3%和78.5%,趋势卡方检验x2=165.4983,P<0.0001。HEC-1-B细胞经华蟾素作用后,细胞侵袭能力降低。在高浓度时,华蟾素有可能存在细胞毒作用。结论:华蟾素能通过诱导HEC-1-B细胞凋亡,从而抑制HEC-1-B细胞生长,并且降低细胞的侵袭能力。

姜黄素调节Bcl-2、Bax蛋白表达诱导子宫内膜癌(HEC-1-B)细胞凋亡

目的:研究姜黄素诱导人子宫内膜癌(heC-1-B)细胞凋亡的分子机制。方法:将体外培养的heC-1-B细胞随机分5组,对照组、姜黄素i、姜黄素ii、姜黄素iii、姜黄素iV。分别给与不同浓度的姜黄素(0,10,20,40,80)μmol/l处理heC-1-B继续培养48h、72h。mTT法检测姜黄素对细胞增殖的影响,WeSTern BloT法检测BCl-2、Bax蛋白表达。结果:mTT结果显示姜黄素对(heC-1-B)细胞具有抑制作用,抑制率随姜黄素浓度和作用时间的增加而上升(p<0.05);WeSTern BloT结果显示BCl-2蛋白表达下降,Bax蛋白表达升高,Bax/BCl-2比值增大,差异有统计学意义(p<0.05)。结论:姜黄素对(heC-1-B)细胞有抑制作用并能诱导其凋亡,其机制与下调BCl-2蛋白表达、上调Bax蛋白表达有关。

染料木黄酮抑制子宫内膜癌细胞HEC-1B增殖作用的研究

目的研究染料木黄酮(Gen iste in,GST)对人子宫内膜癌细胞株HEC-1B的作用。方法应用MTT法测定染料木黄酮对HEC-1B的生长抑制率,流式细胞术检测是否发生细胞凋亡。结果染料木黄酮能够明显抑制人子宫内膜癌细胞株HEC-1B细胞增殖,其作用随时间的延长和剂量的增加而增强,并引起HEC-1B的凋亡。结论染料木黄酮抑制HEC-1B的增殖,诱导凋亡。

LRP16基因在子宫内膜癌组织中的表达及其对细胞增殖的作用

目的研究LRP16在子宫内膜癌组织中的表达变化及其对子宫内膜癌HEC-1-B细胞增殖的影响。方法应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测26例正常子宫内膜组织及10例子宫内膜癌组织中LRP16mRNA的表达;LRP16转染细胞,RT-PCR证实转染的成功性,WST-1法观察细胞增殖的变化。结果子宫内膜癌组织中LRP16mRNA的阳性表达率及表达水平(分别为83.33%、0.82±0.21)明显高于正常子宫内膜组织(分别为30.00%、0.47±0.18),二者比较差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR检测结果显示转染后细胞LRP16mRNA表达明显增加。转染组HEC-1-B细胞在体外能继续增殖,但增殖能力并没有增强。结论 LRP16的异常表达可能与子宫内膜癌的发生、发展密切相关,LRP16基因用于子宫内膜癌基因治疗可能具有潜在价值。

四种人子宫内膜癌细胞系中IGFBP-rP1的定位及表达

目的:检测不同子宫内膜癌细胞系中胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1(IGFBP-r P1)的定位及表达情况。方法:体外培养子宫内膜癌细胞Ishikawa、RL95-2、HEC-1B和HEC-1A,细胞免疫荧光法检测IGFBP-r P1在4种子宫内膜癌细胞中的定位;实时荧光定量PCR法与Western blot法检测4种子宫内膜癌细胞中IGFBP-r P1 mRNA及蛋白的表达水平。结果:细胞免疫荧光染色示IGFBP-r P1主要定位于4种子宫内膜癌细胞的胞浆。子宫内膜癌Ishikawa、RL95-2细胞中IGFBP-r P1 mRNA及蛋白表达水平明显高于HEC-1A、HEC-1B细胞(P<0.001)。HEC-1A细胞中IGFBP-r P1 mRNA及蛋白表达量最低,Ishikawa细胞中表达量最高(P均<0.05)。结论:4种子宫内膜癌细胞系中均表达IGFBP-r P1。

苏拉明对人子宫内膜癌细胞增殖和乙酰肝素酶表达的影响

目的通过用苏拉明(suramin)处理体外培养的人子宫内膜腺癌细胞系HEC-1-B,观察其对子宫内膜癌细胞增殖和乙酰肝素酶(heparanase,HPSE)表达的影响,探讨苏拉明治疗子宫内膜癌的可能性。方法用不同浓度的苏拉明处理体外培养的人子宫内膜腺癌细胞HEC-1-B,分别在处理后的不同时间点,以MTT法检测HEC-1-B细胞增殖的情况,倒置相差显微镜观察细胞形态改变,免疫细胞化学染色法检测HPSE表达水平的改变。结果苏拉明处理HEC-1-B细胞5 d后HEC-1-B的增殖活性与时间剂量呈负相关(P<0.01)。免疫细胞化学染色法结果表明不同浓度的苏拉明处理细胞96 h后HPSE的表达无明显变化。结论苏拉明能够抑制人子宫内膜腺癌细胞系HEC-1-B的增殖。苏拉明对HEC-1-B细胞HPSE的蛋白表达无影响。苏拉明能否用于人子宫内膜癌的治疗,有待于进一步的研究。