硫氢化钠增加高糖高脂条件下小鼠心房肌细胞系HL-1谷胱甘肽合成

目的研究硫氢化钠(NaHS)是否通过调节谷胱甘肽(GSH)的合成,降低活性氧自由基(ROS)产生,改善小鼠2型糖尿病心肌病(DCM)。方法将小鼠心房肌细胞系HL-1分为对照组、高葡萄糖(HG:40 mmol/L)和棕榈酸(Pal:500μmol/L)处理组;以及硫氢化钠(NaHS,100μmol/L)、DL-炔丙基甘氨酸[PPG,胱硫醚γ裂解酶(CSE)抑制剂,1 mmol/L]和N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC,ROS抑制剂,5 mmol/L)处理72 h组。Western blot检测CSE和谷胱甘肽合成酶(GSS)的表达;二氢乙锭(DHE)和二氯氟甲烷(DCFH)检测ROS含量;免疫共沉淀检测核因子红细胞系2相关因子2(Nrf2)泛素化水平及Nrf2与肌肉特异性环指蛋白1(Murf1)的相互作用。结果与对照组比高糖高脂处理HL-1细胞后CSE、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基C(GCLC)、谷氨酸半胱氨酸连接酶修饰亚基M(GCLM)、谷胱甘肽合成酶(GSS)的表达水平下降,而NaHS能恢复其表达。高糖高脂组ROS含量高于NaHS组。与NaSH组比高糖高脂条件下Murf1与Nrf2的相互作用增加,Nrf2泛素化水平明显增加。结论硫氢化钠减轻Nrf2的泛素化,增加GSH合成关键酶的表达。

人子宫内膜癌细胞系HECCL-1的建立及其生物学特性的初步观察

目的 :建立人子宫内膜癌细胞系 ,并研究其生物学特性。方法 :将传代稳定后的人子宫内膜癌裸小鼠移植瘤标本用贴壁培养法建立细胞系 ,用光学显微镜、电子显微镜观察细胞系的形态 ,研究细胞系的生长及生物学特性。结果 :成功建立 1株人子宫内膜癌细胞系 ,已传代 6 0代 ,命名为HECCL 1。其生物学特征为 :形态学具有腺上皮癌细胞的特点 ,细胞生长旺盛 ,DNA为非整倍体 ,连续传代后仍保留人类肿瘤染色体的特点 ,异种动物移植阳性 ,雌、孕激素受体表达均阴性。结论 :HECCL 1细胞系的建立 ,为开展人类子宫内膜癌的基础及临床研究提供了理想的实验工具。

稳定表达猪BRD4-BD1/2蛋白的猪肺泡巨噬细胞传代细胞系的构建及其用于ASFV增殖的效果观察

前期研究发现宿主表观遗传调控蛋白——含溴结构域蛋白质4(bromodomain-containing protein 4,BRD4)有助于非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的复制,为了深入研究BRD4对ASFV复制的影响,通过筛选出显著促进ASFV复制的BRD4-BD1/2结构域,利用慢病毒表达系统成功构建稳定表达BRD4-BD1/2结构域的3D4/21细胞系,分析ASFV在3D4/21-BRD4-BD1/2细胞系与WT细胞系之间的复制差异。首先,以家猪基因BRD4-BD1/2为靶标,构建了含有3x Flag标签的重组质粒pLVX-IRES-puro-3x Flag-BRD4-BD1/2,并将其与质粒pMD2.G和pSPAX2共同转染至HEK-293T细胞进行慢病毒包装,获得具有感染能力的慢病毒。使用慢病毒感染3D4/21细胞后通过嘌呤霉素药物筛选,成功获得了稳定表达BRD4-BD1/2结构域的3D4/21细胞系。利用RT-qPCR和Western blot技术分别检测了ASFV感染3D4/21-BRD4-BD1/2细胞后CP204L和B602L基因的转录水平以及相应蛋白表达水平,并通过HAD50测定评价ASFV的复制能力。研究结果表明:成功构建了稳定表达BRD4-BD1/2结构域的3D4/21细胞系。与3D4/21-WT细胞系相比,BRD4-BD1/2稳定表达细胞系能够显著促进ASFV复制。本研究提供了深入研究BRD4蛋白在ASFV复制中功能的生物材料,并为ASFV疫苗候选株的开发提供了理论基础。

RNA结合蛋白RBPMS调控急性髓系白血病细胞系THP-1增殖与迁移

目的研究具有多重剪接功能的RNA结合蛋白(RBPMS)对携带MLL-AF9融合基因的急性髓系白血病细胞系THP-1功能的影响。方法使用GEO数据库分析造血系统中RBPMS的表达情况;通过慢病毒感染THP-1细胞,RT-qPCR和Western blot检测RBPMS过表达效率;通过高通量测序检测RBPMS过表达后对THP-1细胞转录组的影响。分别用CCK-8法和流式细胞仪检测RBPMS过表达对白血病细胞增殖以及迁移能力的影响。结果RBPMS在携带MLL-AF9融合基因的急性髓系白血病干细胞中异常低表达。RBPMS过表达后THP-1细胞的增殖和迁移能力显著降低(P<0.0001,P<0.05)。结论RBPMS可以抑制携带MLL-AF9融合基因的急性髓系白血病细胞系的细胞增殖与迁移。

PPP2R1A对Hela细胞系中调节癌症相关基因表达的影响

目的分析PPP2R1A对Hela细胞系中调节癌症相关基因表达的影响。方法以未干预的Hela细胞系作为对照组,以克隆并过表达PPP2R1A的Hela细胞系作为过表达组。通过RNA测序分析对照组和过表达组细胞中PPP2R1A的表达和选择性剪接(AS)。通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)实验验证PPP2R1A参与调控的肿瘤转移相关基因和选择性剪接基因(ASGs)。结果与对照组比较,过表达PPP2R1A可显著抑制Hela细胞的增殖。PPP2R1A调控细胞黏附、病毒应答、细胞生长调节等数百个基因的表达水平,同时还调节参与细胞周期、连接黏附、子宫内膜癌和RNA转运基因的AS。结论PPP2R1A可能通过AS调控潜在转录来调控肿瘤的进展。

利用CRISPR/Cas9技术构建Pmepa1基因敲除的TCMK1小鼠肾小管上皮细胞系

【目的】利用CRISPR/Cas9技术构建Pmepa1基因敲除的TCMK1小鼠肾小管上皮细胞系,并探讨Pmepa1敲除对TGF-β刺激下TCMK1细胞纤维化的影响,为研究Pmepa1在纤维化模型中的作用提供细胞模型。【方法】根据CRISPR/Cas9设计原则设计靶向小鼠Pmepa1基因组序列的sgRNA序列,构建pX333载体并转染进入TCMK1细胞,采用流式分选m Cherry阳性细胞、单克隆细胞扩增和测序鉴定Pmepa1敲除细胞,Western blot验证Pmepa1基因敲除情况。采用RT-PCR和Western blot分析Pmepa1敲除对TGF-β1诱导的R-Smad的活化和纤维化的影响。【结果】将sgRNA设计在Pmepa1第2个外显子,pX333-Pmepa1质粒转染TCMK1细胞48 h后,观察到mCherry荧光蛋白的表达,流式细胞分析转染效率约为17%,pX333-Pmepa1质粒转染阳性细胞经流式分选和单克隆扩增培养,得到19个细胞克隆,对Pmepa1基因位点上sgRNA靶点序列PCR扩增测序分析发现2个双等位基因移码突变细胞,Western blot验证Pmepa1蛋白表达缺失,表明Pmepa1基因敲除TCMK1细胞株构建成功,与未敲除细胞相比,Pmepa1敲除细胞在TGF-β1刺激下,p-Smad2和p-Smad3的表达显著升高,并且促进纤维化基因Fibronectin和Collagen I的表达。【结论】利用CRISPR/Cas9技术成功构建Pmepa1基因敲除TCMK1小鼠肾小管上皮细胞系,为Pmepa1蛋白的功能研究建立了细胞模型以及Pmepa1在纤维化中的重要作用。

肺癌组织和肿瘤细胞系中BRG1的表达分析

BRG1(brahma-related gene1)是进化上高度保守的SWI/SNF染色质重塑复合物的成员之一.研究表明:BRG1具有抑瘤基因的特征,可能与肿瘤的发生发展有关.我们采用RT-PCR、Northern杂交和Westernblotting证实:肺腺癌细胞系A549和鼻咽癌细胞系HNE2、HNE3、CNE1中无BRG1的表达,而肺鳞癌细胞系NCI-H520、永生化正常人支气管上皮细胞系HBE和鼻咽癌细胞系HONE1、HNE1、CNE2中有BRG1的表达.同时,通过RT-PCR检测10例肺癌组织标本,发现60%(6/10)的肺癌组织中BRG1的mRNA水平明显下调,而配对正常肺组织中BRG1的mRNA表达未见改变.对29例肺癌组织和10例配对正常肺组织切片进行免疫组化染色,结果显示:肺癌组织中BRG1蛋白表达的阳性率为37.9%(11/29),配对正常肺组织中BRG1蛋白表达的阳性率为90%(9/10),两者的差异有显著性(P<0.05).这提示BRG1确实在肺癌组织及多种肿瘤细胞系中表达下调或缺失,在肺癌发病过程中可能起一定的作用.

人鼻咽癌细胞系HONE1的蛋白质双向凝胶电泳分析

目的 :研究人鼻咽癌细胞系HONE1的蛋白质表达特征。方法 :抽提鼻咽癌细胞系HONE1总蛋白 ,双向凝胶电泳 (2 DE)分离、银染显色 ,用凝胶成像仪和PDQUEST软件获取HONE1总蛋白的 2 DE图像 ;根据获得的 2 DE凝胶图像 ,从胶上切取分辨良好、染色较浓的蛋白质点 ,用胰蛋白酶原位水解 ,所获酶解肽段经基质辅助激光解吸飞行时间质谱 (MALDI TOF MS)测定Mr;以测得的肽段Mr为肽质量指纹 (PMF) ,通过PepIdent软件搜索SWISS PROT和TrEMBL数据库而识别该点对应的蛋白质。结果 :建立了双向凝胶电泳分离总蛋白、质谱鉴定银染蛋白质点的方法 ,并鉴定出人鼻咽癌细胞系HONE1中表达较强的 10个点相应的蛋白质。结论 :本研究为建立人鼻咽癌细胞HONE1的 2 DE参考图和蛋白质数据库提供了有用的基础性研究资料 ,为进一步识别鼻咽癌特异性的蛋白质奠定了实验基础。

转移潜能不同人肝癌细胞系差异蛋白Annexin1的功能解析

解析比较蛋白质组学筛出的差异蛋白Annexin1的生物学功能,证实其是否在肝癌转移复发中发挥作用.分别以RT-PCR、蛋白质印迹及细胞免疫化学对差异蛋白Annexin1在转移潜能不同人肝癌细胞系中的表达情况进行再验证,然后构建Annexin1反义表达质粒,转染高转移潜能人肝癌细胞系MHCC97H,通过对MHCC97H细胞的运动、侵袭、凋亡、生长周期、MMPs分泌、克隆形成等系列检测,观察目的蛋白表达降低对其生物学行为的影响,特别是转移特性的影响.验证结果均证实Annexin1在有转移潜能人肝癌细胞系MHCC97L、MHCC97H中呈高表达.转染Annexin1反义重组表达质粒后,MHCC97H细胞中Annexin1的表达被成功抑制.依据MHCC97H/pcDNA3.1(+)ASAnnexin1,MHCC97H/pcDNA3.1(+),MHCC97H的检测排序,转染反义重组质粒后的MHCC97H细胞穿过上室底膜的细胞数(运动实验)分别为:11.13±3.31,18.88±2.03,21.86±3.38;穿过人工基底膜细胞数(侵袭实验)分别是:16.43±2.23,16.40±1.57,16.86±1.52;细胞平均集落形成率(克隆形成实验)分别为:(14.33±0.46)%,(19.35±0.49)%,(20.25±0.35)%;MHCC97H细胞凋亡比例(FCM分析)依次为22.2%,6.44%,6.97%;细胞周期各时相的比例依次为:G0-G1期79.5%/76.34%/80.5%,S期13.26%/14.4%/9.69%,G2-M期7.25%/9.26%/9.81%;细胞培养上清MMP9的定量结果依次为:26.37!g/L,28.00"g/L,31.90#g/L;MMP2定量结果依次为29.46$g/L,26.37%g/L,26.53&g/L.明胶酶谱分析细胞培养上清显示,转染Annexin1反义重组表达质粒的MHCC97H细胞分泌的MMP9活性与对照比变化不明显.综合上述结果发现,转染Annexin1反义表达质粒MHCC97H细胞运动能力及集落形成率明显降低,凋亡细胞的比例增加,而侵袭潜能,细胞周期时相,细胞分泌MMP2、MMP9的量均变化不明显.提示,差异蛋白Annexin1可能通过影响细胞凋亡和细胞运动在肝癌细胞侵袭转移过程中发挥作用.

幽门螺杆菌对肝细胞系HepG2 cyclinD1,PCNA mRNA表达的影响

目的:研究幽门螺杆菌(H pylori)处理对肝细胞系HepG2 cyclinD1,PCNA mRNA表达的影响. 方法:将H pylori与HepG2共同培养1 h、3 h、6 h、12 h 和24 h,采用半定量RT-PCR方法分析共培养不同时间后HepG2 cyclinD1,PCNA mRNA的表达水平. 结果:CagA+ H pylori与HepG2细胞共同孵育1 h后,即可见cyclinD1 mRNA表达升高,3h达高峰,约为对照的4.0倍(P<0.01);共同孵育3 h后即可见PCNA mRNA表达升高,6 h达高峰,约为对照的2.0倍(P<0.05).而CagA- H pylori 和HepG2细胞共同孵育后,未见两基因的表达升高. 结论:CagA+ H pylori能诱导HepG2 cyclinD1,PCNA mRNA表达升高,提示其在肝癌的发生中起一定作用.

小窝蛋白-1和E-钙黏蛋白在食管癌TE1细胞系中的表达及其意义

目的:检测小窝蛋白-1(Cav-1)和E-钙黏蛋白(E-cad)在食管癌TE1细胞系中的表达水平,探讨Cav-1在食管癌转移中可能的作用及机制。方法:化学合成针对Cav-1基因3个不同靶点的siRNA(Cav-1 siRNAl,Cav-1 siRNA2和对照siRNA),分别转染食管癌TE1细胞系,以未转染细胞为空白对照,转染对照siRNA细胞为阴性对照。采用Western blot法检测RNA干扰后TE1细胞中Cav-1和Ecad的表达情况;Transwell方法检测各组细胞的迁移和侵袭能力。结果:Western blot检测结果提示,与空白对照组比较,Cav-1siRNA使食管癌TE1细胞系中Cav-1表达水平降低(P<0.01),E-cad表达水平升高(P<0.01);Transwe迁移及侵袭试验结果提示转染Cav-1siRNA后细胞的迁移、侵袭能力较空白对照组显著减弱(P<0.05)。结论:Cav-1可能通过调节E-cad的表达影响食管癌的转移。

应用辐射杂种细胞系对猪CACNA1S基因的定位研究

CACNA1S是钙离子通道α1亚单位的编码基因,该基因突变会导致人低钾性周期性麻痹和猪恶性高温综合征。根据人CACNA1S基因3′端非翻译区序列设计引物,对猪基因组DNA进行PCR扩增、测序,与人相应序列作同源性比较;然后采用IMpRHpanel将CACNA1S基因定位于猪10p11-12。

mdr1基因在多药耐药相关的几种人胃癌细胞系的表达

目的探讨mdr1在多药耐药相关的几种人胃癌细胞系中的转录、翻译、P-gp功能变动趋势。方法培养SGC7901/VCR(人胃癌多药耐药细胞亚系)、SGC7901和BGC823(人胃腺癌细胞系)于RPMI1640,用RT-PCR和原位杂交检测mdr1mRNA的表达,用免疫印迹和免疫组化检测P-gp的表达,用流式细胞仪检测阿霉素在细胞内的蓄积。结果半定量RT-PCR显示,SGC7901/VCRmdr1和β-actin吸收峰面积之比为5.63,SGC7901为0.61,BGC823为0.85。杂交信号呈紫蓝色颗粒,分布于胞质。免疫印迹显示SGC7901/VCRP-gp的表达最强,SGC7901最弱。P-gp阳性呈棕黄色颗粒,位于细胞膜上。SGC7901中,少数细胞P-gp表达极强。SGC7901/VCR平均光密度为(1.8310±0.8401),SGC7901为(0.3590±0.2512),BGC823为(0.6260±0.4996)(P<0.05)。SGC7901/VCR阿霉素特异荧光强度为(6.59±50.30),SGC7901为(35.88±14.55),BGC823为(27.44±7.06)(P<0.001)。结论在多药耐药相关的人胃癌细胞系SGC7901/VCR、SGC7901和BGC823中,mdr1基因均表达,P-gp具有药物外排功能,SGC7901/VCR的mdr1表达最强,SGC7901最弱,BGC823居中。

产藏红花素1(crocin)愈伤组织的诱导及其细胞系的筛选(英文)

对藏红花(Crocus sativus L.) 愈伤组织的诱导条件进行了优化。结果表明:MS 是藏红花芽愈伤组织的最佳诱导培养基,而 B5是 叶子和花愈伤组织的最佳培养基。藏红花芽、叶和花愈伤组织的最佳诱导温度分别是18℃、25℃和21℃。光照是叶子愈伤组织诱导的有利因素,但不利于芽和花愈伤组织的诱导。1.5～2.0 mg.L-1 NAA和 0.25 mg.L-1 6-BA是愈伤组织诱导的最佳激素组合。通过目视法和HPLC方法, 从229株细胞系中筛选出细胞系Corm1,其藏红花素1 的含量是1 677 mg.g-1,生长较快,且不易褐化。为采用植物细胞工程法解决藏红花素1资源短缺问题打下了基础。

酪氨酸蛋白激酶受体EphA2及其配体EFNA1在23种肿瘤细胞系中的表达及其意义

背景与目的:酪氨酸蛋白激酶受体EphA2及其配体EFNA1可能在肿瘤的发生发展过程中起着重要的作用。本研究探讨EphA2/EFNA1在不同肿瘤细胞中的表达及其意义。方法:用RT-PCR方法,检测了23种人类肿瘤细胞系中EphA2/EFNA1在mRNA水平上的表达。并用Western blot方法检测了EphA2蛋白在不同肿瘤细胞系中的表达水平。结果:RT-PCR结果显示,除白血病细胞K562和HL60,以及视网膜母细胞瘤RB几乎检测不到EphA2/EFNA1外,EphA2/EFNA1高表达于肝癌、肺癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、胃腺癌、脑胶质瘤、膀胱癌、成骨肉瘤及恶性黑色素瘤等20种细胞系中。Western blot结果显示,除K562外,EphA2蛋白在不同肿瘤细胞系中均有表达。结论:EphA2/EFNA1高表达于人类多种肿瘤细胞中,并且EFNA1的表达水平相对低于EphA2的表达。E-phA2/EFNA1可作为一个较为广谱的肿瘤标记,并有可能成为肿瘤治疗的靶点。

HCAP1两种基因型对肝癌细胞系Hep3B基因表达的影响

背景与目的:HCAP1(HCC-associatedprotein1)基因是我们室克隆的一个新基因,HCAP1基因有N和M两种基因型,本研究旨在探讨HCAP1N和HCAP1M基因型对肝癌细胞基因表达的影响。方法:用脂质体转染试剂,将HCAP1M与HCAP1N分别转染Hep3B-Tet-on肝细胞性肝癌细胞株;为了获得高诱导表达HCAP1N或HCAP1M的细胞株,通过Westernblot方法筛选被转染的细胞。然后,通过人cDNAarray膜片杂交技术分析HCAP1N或HCAP1M诱导表达前后的细胞基因表达谱。杂交结果用复日Smartview2001图像分析软件进行分析比较。结果:建立了HCAP1N和HCAP1M过表达前后的差异基因表达谱。结果表明HCAP1M过表达引起参与细胞增殖的基因表达上调(如c-erbB2受体和转录因子DP2),以及起凋亡作用基因(caspase9)及DNA切割修复蛋白基因(ERCC5)的表达下调;而HCAP1N过表达引起抑制细胞生长基因(如snoN和WAF1)和DNA切割修复蛋白基因(ERCC5)的表达上调,以及抗凋亡基因(HSPs)的表达下调。结论:HCAP1M基因过表达可能促进细胞过度增殖,HCAP1N过表达可能抑制细胞生长。

诱导剂作用时间对3T3-L1前脂肪细胞系分化的影响

目的观察不同诱导剂作用时间对3T3-L1前脂肪细胞系分化的影响。方法参照传统鸡尾酒法,分别在作用时间为2 d(A组,传统法),3 d(B组)、4 d(C组,改良法)条件下诱导分化,采用倒置显微镜观察细胞形态,油红O染色及三酰甘油检测脂肪含量,台盼蓝染色鉴定细胞活力。结果 A组3T3-L1前脂肪细胞转化率在80%以上的样本数(n=12)占该组所有样本数(n=18)的66%,而B、C两组中所有样本(n=18)的3T3-L1前脂肪细胞转化率均在80%以上。油红O染色定量检测结果显示,C组510nm处的OD值为2.59±0.17,明显高于A组的2.12±0.47(F=6.62,P=0.0001)和B组的2.20±0.17(F=5.15,P=0.0001),A、B两组间差异无统计学意义(F=1.14,P=0.74)。C组的三酰甘油含量为(1351.04±119.01)ng/ml,明显高于A组的(1077.88±272.75)ng/ml(F=6.73,P=0.001)和B组的(1089.38±115.39)ng/ml(F=5.78,P=0.001),A、B两组间差异无统计学意义(F=0.27,P=0.64)。台盼蓝染色结果显示,A、B、C 3组细胞的活力分别为(98.3±1.2)%、(98.5±1.8)%、(98.9±2.1)%,3组间差异无统计学意义(F=0.18,P=0.83)。结论改良法3T3-L1前脂肪细胞诱导法能提高脂肪细胞转化率,可作为高效诱导脂肪细胞模型的方法之一。推荐作用时间为3 d的改良法诱导方案。

KiSS-1基因转染子宫内膜癌HEC-1B细胞系及其意义的研究

目的:构建KiSS-1基因质粒并将KiSS-1基因质粒导入子宫内膜癌细胞HEC-1B中,建立稳定、高效和低毒的转染方法,观察其转染率及表达情况。方法:采用基因转染技术用阳离子脂质体介导将高纯度的KiSS-1质粒转染到子宫内膜癌细胞株中。用RT-PCR和Western blot技术检测转染前后肿瘤细胞的KiSS-1 mRNA、MMP-9 mRNA和蛋白Metastine的表达。结果:1)使用重组的真核表达载体,将KiSS-1基因转染到子宫内膜癌细胞中,并获得稳定表达。2)子宫内膜癌细胞KiSS-1基因转染前后表达水平有明显差异,空白对照组、空质粒组和质粒转染组HEC-1B细胞中KiSS-1 mRNA蛋白的相对表达量分别为0.1231±0.0366、0.1486±0.0287和0.5060±0.0198,Metastin蛋白的相对表达量分别为0.1549±0.0189、0.1497±0.0029和0.4469±0.0078,质粒转染组与其他两组相比,差异有统计学意义,F=161.547,P=0.000;F=607.993,P=0.000。3)转染后的子宫内膜癌细胞的MMP-9 mR-NA表达下调,空白对照组、空质粒组和质粒转染组HEC-1B细胞中MMP-9 mRNA的相对含量分别为0.3576±0.0501、0.3500±0.0254和0.1677±0.0014,质粒转染组与其他两组相比,差异有统计学意义,F=32.963,P=0.001。结论:利用脂质体作为载体将KiSS-1基因转染到子宫内膜癌HEC-1B细胞是可行、有效和稳定的;转染后细胞的KiSS-1 mRNA表达明显增强,MMP-9 mRNA的表达明显降低;KiSS-1基因可能参与抑制子宫内膜癌细胞的侵袭和转移,可考虑为子宫内膜癌基因治疗的一个有意义的基因。

骨髓基质细胞系QXMSC_1体外促进造血及其作用机理的研究

本实验研究了骨髓基质细胞系QXMSC_1体外对CFU-F,CFU-GM,BFU-E及CFU-E集落形成的影响,并通过建立QXMSC_1基质细胞与骨髓造血细胞的长期共培养体系,研究了QXMSC-1在体外促进造血的机理。结果表明,QXMSC_1基质细胞条件培养上清液可促进小鼠CFU-F,CFU-GM,BFU-E及CFU-E集落的生长。在无GM-CSF和Epo存在的情况下,QXMSC_1细胞能维持CFU-GM,BFU-E和CFU-E集落生长。表明QXMSC_1细胞本身可分泌GM-CSF和Epo。QXMSC_1细胞与骨髓造血细胞共培养时,可明显提高CFU-GM集落数。共培养体系中,用微孔滤膜隔断QXMSC_1与造血细胞的直接接触,也能促进CFU-GM集落生成,但比混合培养时低,说明QXMSC_1通过直接接触和分泌细胞因子促进造血的过程。

4-1BBL分子在人急性单核细胞白血病细胞系U937和SHI-1的表达及促生长作用

目的研究4-1BBL分子在人急性单核细胞白血病细胞系U937和SHI-1的表达及促生长作用。方法用流式细胞术(FCM)和RT-PCR法检测4-1BBL分子在U937、SHI-1细胞系的表达;将激发型4-1BBL单抗(1F1)与U937、SHI-1细胞系分别进行培养,细胞计数分析2个细胞系的生长情况;收集U937细胞的培养上清,ELISA法检测细胞因子。结果FCM测得U937和SHI-1细胞有4-1BBL分子表达,RT-PCR法测得4-1BBLmRNA;细胞计数表明,1F1明显促U937、SHI-1细胞系生长(P<0·01);ELISA示1F1与U937细胞共培养48h,其上清液中IL-6含量(55·91±10·23)pg/ml,显著高于IgG1同型对照组的(12·14±3·8)pg/ml(P<0·01)。结论U937和SHI-1细胞系组成性表达4-1BBL分子;1F1与U937、SHI-1细胞的4-1BBL分子交联后,可促进U937、SHI-1细胞系生长,诱导U937细胞分泌细胞因子IL-6。