急性脑梗死病人血清circ_HECTD1表达与病情严重程度的关系

目的:探讨急性脑梗死(ACI)病人血清环状RNA HECT结构域E3泛素蛋白连接酶1(circ_HECTD1)表达情况,分析circ_HECTD1与病情严重程度的关系。方法:选取2020年9月—2021年11月开滦总医院收治的ACI病人122例为ACI组,另选同期于本院体检的健康志愿者122名为对照组。收集基本临床资料,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测血清circ_HECTD1水平。Pearson法分析ACI病人血清circ_HECTD1水平与临床资料及美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分的相关性;多因素Logistic回归分析ACI严重程度的影响因素。结果:ACI组高血压比例、空腹血糖、白介素(IL)-6、IL-1β、C反应蛋白(CRP)、白细胞计数(WBC)及circ_HECTD1水平均高于对照组(P<0.05);中度组、重度组年龄、IL-6、IL-1β、空腹血糖、CRP、WBC及circ_HECTD1水平均高于轻度组(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示,糖尿病、IL-6、IL-1β及circ_HECTD1均是ACI病人中重度神经缺损的危险因素(P<0.05);血清circ_HECTD1水平与空腹血糖、WBC、IL-6、IL-1β、CRP及NIHSS评分均呈正相关(P<0.05)。结论:ACI病人血清circ_HECTD1水平升高,且随病情加重而增加,是中重度神经缺损的危险因素。

HECTD1调控PI3K/AKT信号通路对低氧诱导的脑微血管内皮细胞损伤的影响

目的探讨低氧应激下HECT结构域E3泛素连接酶1(HECTD1)对脑微血管内皮细胞(BMECs)的影响及其功能机制。方法BMECs细胞在1%O_(2)的条件下培养以诱导低氧刺激。使用多种细胞生物学功能实验测定来评估BMECs中低氧诱导的损伤。乳酸脱氢酶(LDH)、总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(T-SOD)水平的检测以评估低氧诱导的氧化应激水平。Western blot检测PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达。结果在常氧条件下,过表达HECTD1可以提高BMECs的细胞活力。在低氧条件下,过表达HECTD1显著减轻了低氧诱导的细胞活力抑制作用。此外过表达HECTD1降低了低氧诱导的BMECs细胞凋亡和氧化应激。结论HECTD1通过阻断PI3K/AKT信号通路来保护BMECs免受低氧应激诱导的损伤,这表明HECTD1在低氧相关的脑疾病中具有治疗价值。

HECT类泛素连接酶对p53家族的调控作用

p53家族成员在细胞生长、组织发育及肿瘤形成等方面都具有十分重要的生物学功能,其自身受到严格调控,泛素化修饰就是其中非常重要的方式之一,作为泛素化过程中决定底物特异性的泛素连接酶E3作用则更加突出.泛素连接酶E3可以分为两类:RING(really interesting new gene)类和HECT(homologous to E6AP C-terminus)类E3.近年来,HECT类E3对p53家族的调控效应不断得到揭示.本文综述了HECT类E3在调控p53家族转录活性、稳定性方面的重要作用、分子机制以及其作用对生物体肿瘤形成和生长发育等产生的影响,为进一步完善p53家族调控网络,揭示HECT类E3在肿瘤发生发展及防治中的作用提供参考.

Circ_HECTD1调节miR-135a-5p/TP53INP1轴对OGD/R诱导的海马神经元损伤的影响

目的通过进行体外氧葡萄糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导海马神经元损伤,观察环状RNA含HECT结构域的E3泛素连接酶1(Circ_HECTD1)对HT22细胞增殖、凋亡的影响以及对微小RNA-135a-5p(miR-135a-5p)/肿瘤蛋白53诱导型核蛋白1(TP53INP1)轴的调控机制。方法常规培养HT22细胞,将细胞分为Con组、OGD/R组、si-NC组、si-Circ_HECTD1组、miR-NC组、miR-135a-5p组、si-Circ_HECTD1+anti-miR-NC组、si-Circ_HECTD1+anti-miR-135a-5p组。qRT-PCR法检测Circ_HECTD1、miR-135a-5p、TP53INP1 mRNA表达;MTT检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因实验验证Circ_HECTD1与miR-135a-5p、miR-135a-5p与TP53INP1的靶向关系;Western blot法检测Bax、Bcl-2、TP53INP1蛋白表达。结果OGD/R诱导后HT22细胞中Circ_HECTD1与TP53INP1表达上调,miR-135a-5p表达下调,细胞存活率和Bcl-2蛋白表达显著下降,凋亡率和Bax蛋白表达显著升高(均P<0.05)。沉默Circ_HECTD1表达能够显著上调OGD/R诱导的HT22细胞中miR-135a-5p表达,下调TP53INP1表达,提高细胞存活率和Bcl-2蛋白表达,降低细胞凋亡率和Bax蛋白表达(均P<0.05)。Circ_HECTD1与miR-135a-5p、miR-135a-5p与TP53INP1之间均存在靶向关系。过表达miR-135a-5p能够显著下调TP53INP1表达,提高细胞存活率、Bcl-2蛋白表达,降低细胞凋亡率、Bax蛋白表达(均P<0.05)。而抑制miR-135a-5p表达能够部分逆转沉默Circ_HECTD1对HT22细胞损伤的保护作用。结论沉默Circ_HECTD1可通过调节miR-135a-5p/TP53INP1轴,促进细胞存活,抑制细胞凋亡,保护OGD/R诱导的海马神经元损伤。

拟南芥HECTE3s家族基因表达模式和功能的初步研究

利用GUS组织化学染色法,研究由拟南芥泛素蛋白连接酶HECT家族基因(UPLs)启动子起始的β-葡萄糖苷酸酶报告基因(GUS)的表达模式。结果表明:UPLs家族中6个成员的启动子在拟南芥植株的不同组织和不同时期均有所表达,且在莲座叶发育的早期和衰老期表现出较高活性。进一步观察upl3和upl4突变体发现,upl3和upl4突变体除了upl3有较明显的叶型变化,两者均表现为延迟衰老现象;且突变体中衰老相关基因的表达水平不同于野生型。研究推测UPL3和UPL4可能参与了叶片生长发育过程的调控,同时还参与调控植株衰老进程。

含HECT和锚蛋白结构域的E3泛素化连接酶-1在肝癌中表达的意义及其对肝癌细胞增殖、侵袭能力的影响

目的 观察含HECT和锚蛋白结构域的E3泛素化连接酶-1（HACE1）在肝癌中的表达水平与预后的关系及其对肝癌细胞增殖、侵袭能力的影响.方法 免疫组织化学检测100例肝癌和癌旁组织HACE1的表达,Kaplan-Meier和Log-rank分析HACE1表达水平与患者预后的关系;利用脂质体质粒转染建立Huh7-HACE1细胞株,通过细胞计数试剂盒（CCK-8）观察HACE1过表达对Huh7细胞增殖的影响,应用Transwell检测HACE1过表达对Huh7细胞侵袭能力的影响.结果 肝癌组织中HACE1表达低于和高于癌旁组织的患者分别为68和32例,两者5年生存率对比（70.8％比90.3％）和5年复发率对比（59.7％比30.6％）差异有统计学意义（P＜0.01）.细胞增殖实验结果显示4d后Huh7-HACE1组吸光度（A）值显著低于对照组（P＜0.05）;Transwell结果显示Huh7-HACE1组侵袭能力显著低于对照组（P＜0.05）.结论 HACE1基因在肝癌组织表达水平显著低于癌旁组织,其表达水平与肝癌预后相关;过表达HACE1可抑制肝癌Huh7细胞的增殖和侵袭能力.该基因可能在肝细胞肝癌的发生发展中起重要作用.

旋流条件下螺旋弹性铜管振动强化传热性能分析

为了充分利用流体诱导螺旋弹性铜管(helical elastic copper tube,HECT)振动增强传热,以获得更高综合传热性能的HECT换热器装置,基于安装正向螺旋引流板的螺旋弹性铜管(helical elastic copper tube-forward spiral baffle,HECT-FSB)换热器和逆向螺旋引流板的螺旋弹性铜管(helical elastic copper tube-reverse spiral baffle,HECT-RSB)换热器,采用双向-流固耦合法,研究了旋流条件下入口流速(U_(in))对HECT振动强化传热性能的影响。研究表明:U_(in)在计算范围内增加,HECT的振幅增大、传热系数提高,HECT换热器的进出口压降增大、PEC(performance evaluation criteria)值减小;HECT-RSB换热器的HECT振幅和传热系数、进出口压降明显高于HECT-FSB换热器。HECT-FSB换热器的PEC值高于HECT-RSB换热器,振动强化传热性能更佳,当U_(in)=0.3 m/s时,PEC值高出了9.00%。HECT-RSB换热器的综合传热性能因子JF值最大,综合传热性能最佳,与已发表文献中的换热器相比,U_(in)在计算范围内综合传热性能因子JF值平均提升了2.7%。该研究可为HECT换热器装置综合性能的提升提供技术支撑。

HECW2基因与肿瘤的研究进展

含HECT,C2和WW域E3泛素蛋白连接酶2(HECW2)基因通过调节蛋白质的泛素化和降解过程参与细胞周期调控、信号转导以及细胞死亡等关键的生物学过程。既往有关HECW2基因的研究多聚焦于神经发育障碍与智力障碍等非肿瘤方面,而关于其在肿瘤发生发展中的作用机制的报道较少。近年研究认为HECW2基因在多种肿瘤类型中异常表达,并在肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭过程中发挥重要功能,可影响肿瘤的生物学行为,这为后续探索肿瘤的分子机制提供了新的视角,为肿瘤的个性化靶向治疗奠定了前期基础。

HECT E3泛素连接酶的分类、功能和进化分析

泛素连接酶(E3s)在真核生物生命活动重要的调控过程,即泛素化降解过程中起着关键作用,具有HECT结构域的E3酶(HECT E3 ubiquitin ligase)根据其N端结构域的不同可分为三类:HERC E3酶,Nedd4/Nedd4-like E3酶和SI(ngle)-HECT E3酶。本文总结了至今有关这三类E3酶的结构域、生物学功能以及与人类疾病关系的研究进展,其中一些E3酶的生物学功能还不是很清楚,特别是HERC E3s和SI-HECT E3s。还阐述了近年来国际上对HECT E3酶进化分析的研究结果,进化分析有助于进一步研究HECT泛素连接酶的生物学功能。最后对作用于泛素-蛋白酶体通路的疾病治疗策略和HECT E3酶底物的识别研究做了展望,底物数据的缺乏限制了HECT E3的研究,因此高通量识别底物将是今后研究的主要方向。

HECT型E3泛素连接酶在肿瘤中作用的研究现状和进展

肿瘤的发生和发展是多因素、多步骤的复杂过程。而泛素化是多步级联的蛋白质修饰过程,是维持真核细胞内稳态的重要机制。其中E3泛素连接酶家族是泛素-蛋白酶体系统的重要成分,可催化多种蛋白底物的泛素化,促进其被蛋白酶体系统降解。迄今为止,E3泛素连接酶在多种肿瘤细胞生物学过程中发挥着重要作用,包括细胞增殖、凋亡及周期调控。而HECT型E3泛素连接酶作为E3泛素连接酶最早被研究的一种,其主要参与蛋白质翻译后转录调控的泛素化修饰过程。本文就HECT型E3泛素连接酶及其在肿瘤中作用的现状和最新研究进展进行综述。

HECT类泛素连接酶Smurf1自身调控机制的研究

目的泛素连接酶Smurf1在胚胎发育、骨形成调控和细胞极性控制中具有重要的生理功能,但是其自身的泛素化降解机制尚不清楚。本论文拟研究Smurf1分子间自我调控的机制,以期揭示一种新的泛素连接酶调控方式。方法通过免疫共沉淀实验确证了Smurf1分子间存在相互作用,体内泛素化、半衰期及降解实验研究了Smurf1的自身泛素化降解。结果 Smurf1存在分子间相互作用和泛素化降解,这种分子间的相互调控是由C2和WW结构域介导。结论 Smurf1分子间存在自我泛素化修饰及蛋白酶体依赖的降解,是一种新的HECT类泛素连接酶的调控机制。

HACE1在恶性肿瘤中的研究进展

含HECT域和瞄蛋白重复序列的E3泛素蛋白连接酶1(HACE1)蛋白属于HECT家族的重要成员之一,其不仅具有保护心脏、抗氧化应激及调节细胞动力学等生物学功能,而且在多种恶性肿瘤(乳腺癌、肝癌、胃癌等)中发挥肿瘤抑制因子的作用。其作用机制是通过靶向活化形式的Rac家族进行蛋白酶体降解及泛素化视神经蛋白,激活细胞自噬,进而发挥抗肿瘤作用。HACE1与多种肿瘤的发生、进展、侵袭及预后密切相关,其有望成为恶性肿瘤诊断和预后的预测标志物及肿瘤治疗的新靶点。

泛素连接酶的结构与功能研究进展

泛素化是体内蛋白质翻译后重要修饰之一,是蛋白质降解的信号.泛素连接酶E3是泛素化过程中的关键酶之一,介导活化的泛素从结合酶E2转移到底物,不同的泛素连接酶作用于不同的底物蛋白,决定了泛素化修饰的特异性.根据结构与功能机制的不同,可将泛素连接酶E3分为HECT(homologous to E6AP C terminus)家族和RING-finger家族,前者含有HECT结构域,可直接与泛素连接再将其传递给底物.RING-finger家族的E3发现较晚,庞大且功能复杂,是近年来研究的热点,此家族均包含相似的E2结合结构域和特异的底物结合部分,作为桥梁将活化的泛素从E2直接转移到靶蛋白,其本身并不与泛素发生作用.总结了这2种E3连接酶家族成员的三维结构及功能机制研究的最新进展.

筛选调控Sonic Hedgehog信号转导的泛素连接酶

目的 :发现调控Sonic Hedgehog(Shh)信号转导的泛素连接酶。方法 :第一轮筛选,利用荧光素酶报告基因(8×GliBS-Luc)检测系统,检测相应HECT家族E3泛素连接酶的siRNA对Shh信号通路活性的影响;第二轮筛选,利用细胞免疫荧光激光共聚焦检测系统,检测上述siRNA对Shh的受体Ptch1蛋白原纤毛定位的影响。综合2轮筛选结果,初步发现影响Shh信号通路活性的HECT家族E3泛素连接酶。结果:通过2轮筛选,发现Smurf1、Smurf2、Ube3c、Wwp1、Wwp2共5个泛素连接酶,不仅能调节Ptch1蛋白的原纤毛定位,也可以增加通路下游转录因子Gli的活性。结论:建立了筛选调控Shh信号通路的泛素连接酶的平台。在初步筛选的27个HECT E3泛素连接酶中,有5个成员参与调控Shh信号通路。

miR-3129通过抑制hace1促进口腔肿瘤发生的研究

目的探讨miRNA-3129与hace1是否可作为口腔肿瘤标志物,在口腔肿瘤的治疗过程中发挥作用。方法收集15组口腔肿瘤组织与瘤旁组织,应用QRT-PCR法检测组织中hace1 mRNA的表达,通过MTT实验、细胞划痕实验观察hace1对细胞增殖、迁移的变化影响。生物信息学预测hace1的miRNA,通过luciferase和QRT-PCR验证miRNA-3129与hace1的关系,QRT-PCR法检测组织中miRNA-3129的表达。结果 hace1在口腔肿瘤中低表达,并抑制口腔肿瘤的迁移与增殖;且miRNA-3129可靶向hace1 3’UTR,并调节hace1表达水平。结论 miRNA-3129在口腔肿瘤中高表达,与hace1表达呈负相关性,可能通过靶向hace1促进口腔肿瘤生长。

泛素连接酶E3

蛋白质的泛素化修饰具有高度的特异性,它参与调节细胞内许多的生理活动。蛋白质的泛素化修饰涉及一系列的酶参与反应,包括泛素激活酶E1、结合酶E2以及连接酶E3。而其中泛素连接酶E3对靶蛋白的特异性识别起关键作用。泛素连接酶E3主要由HECT结构域家族、RING结构域家族和U-box结构域家族组成。现对泛素连接酶E3的分类、结构及其对靶蛋白的识别机制等进行综述。

清肺健脾法治疗肺心病急性发作期临床研究

目的观察清肺健脾法治疗肺心病急性发作期的疗效。方法将患者93例随机分为两组,均予西医常规处理,治疗组加用清肺健脾中药,对照组加用清肺化痰中药。结果两组总有效率相近,但治疗组显效率高于对照组;两组症状均有改善,但治疗组喘促、痰液粘稠、纳差、气短、乏力等改善优于对照组;治疗后两组血气分析改善相近。结论清肺健脾法可明显改善肺心病急性发作期患者的症状,并提高临床疗效。

慢病毒介导长链非编码RNA BACE2-IT1过表达抑制胃癌细胞的增殖和侵袭

目的观察长链非编码RNA(long-chain non-coding RNA,lncRNA)BACE2-IT1在胃癌组织和细胞株中的表达,分析慢病毒介导BACE2-IT1过表达对胃癌细胞增殖和侵袭影响的作用机制。方法实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测26例胃癌组织和5种胃癌细胞株中BACE2-IT1的表达。以BACE2-IT1表达最低的胃癌细胞株感染载有BACE2-IT1的慢病毒(实验组)和空载慢病毒(对照组)。通过CCK-8实验和Transwell侵袭实验分析慢病毒介导BACE2-IT1过表达对胃癌细胞株增殖能力和侵袭能力的影响。qPCR和蛋白质印迹法(Western blot法)检测过表达BACE2-IT1后HECT家族E3泛素连接酶1(HACE1)的表达水平及Wnt/β-catenin信号通路的活化程度。结果与癌旁组织比较,BACE2-IT1在胃癌组织中呈低表达(P<0.01)。与永生化胃黏膜上皮细胞比较,BACE2-IT1在5种胃癌细胞株中呈低表达(P<0.05),在BGC-823细胞中的表达量最低(P<0.01)。与对照组比较,实验组过表达BACE2-IT1在体外可抑制BGC-823细胞的增殖能力(P<0.05)。对照组和实验组侵袭细胞数分别为87.82±9.57和36.65±5.78,BACE2-IT1在体外可抑制BGC-823细胞的侵袭能力(P<0.01)。与对照组比较,BACE2-IT1过表达导致BGC-823细胞中HACE1在mRNA和蛋白水平的表达上调(P<0.01)。Wnt/β-catenin信号通路的活化被抑制。结论BACE2-IT1在胃癌组织和细胞株中均呈低表达,BACE2-IT1过表达能抑制胃癌BGC-823细胞的增殖能力和侵袭能力,其分子机制可能是促进HACE1蛋白的表达,抑制Wnt/β-catenin信号通路的活化。

人泛素连接酶AREL1催化结构域的晶体结构

泛素化是一种重要的翻译后修饰,几乎调控着生命活动的所有方面.泛素连接酶是泛素化过程中唯一对底物蛋白质有特异性识别能力的一类酶,它们在泛素化过程中是不可或缺的,起到非常关键的作用.人抗凋亡E3泛素连接酶(AREL1)是HECT泛素连接酶家族成员之一,它能够泛素化促凋亡蛋白SMAC、HtrA2和ARTS,并通过蛋白酶体将它们降解,从而发挥抵抗细胞凋亡的作用.本文解析了3.2?分辨率的人AREL1蛋白催化结构域(AREL1HECT)的晶体结构,并将其与HECT家族中其他成员的结构进行了比对.尺寸排阻色谱和X射线小角散射的结果表明,AREL1HECT在溶液中是以多种聚集状态形式存在的,小角散射的3D模型进一步表明AREL1HECT在溶液中会发生二聚化.这些结果将为AREL1HECT与泛素复合物结构的解析及功能的分析提供坚实的结构基础,为揭示AREL1泛素化底物蛋白质的分子机制提供重要的依据.