稳定表达水通道蛋白-4细胞株的建立及应用价值

目的构建水通道蛋白-4(AQP4)真核表达载体,转染HEK293细胞建立稳定表达AQP4的HEK293细胞株,并将其应用价值与现有的酶联免疫吸附(ELISA)法进行比较,为视神经脊髓炎(NMO)的诊断提供新的方法。方法用RT-PCR法从小鼠小脑皮质中克隆AQP4基因,将其连入质粒pcDNA3.1,构建AQP4真核表达载体pcDNA3.1-AQP4;用脂质体转染法将重组质粒转染HEK293细胞,G418筛选稳定表达细胞株;RT-PCR和间接免疫荧光法(IFA)检测AQP4基因的表达情况;以稳定细胞株为底物用IFA法检测81例患者血清抗AQP4抗体,并与ELISA检测方法进行比较。结果琼脂糖电泳显示RT-PCR扩增出993 bp的条带;与载体连接后得到酶切正确的重组质粒;RT-PCR扩增出一条与目的基因一致的条带;IFA法检测转基因HEK293细胞,呈抗AQP4阳性。IFA法检测患者血清中AQP4抗体的敏感性为93.3%,特异性为97.4%,正确指数为90.7%,与ELISA法一致性为96.3%。结论成功克隆并构建小鼠AQP4基因真核表达载体,成功建立稳定表达AQP4的HEK293细胞株,该细胞株对NMO具有良好的检测效果,有望在NMO的临床诊断中发挥重要作用。

新型NK1受体拮抗剂的合成及生物活性研究

目的制备一类新型N-甲基-N-(4-(2-苯甲基)-6-(4-甲基-1-哌嗪基)-3-吡啶基)苯甲酰胺衍生物,并评价其对NK1受体的体外拮抗活性。方法以6-(4-甲基-1-哌嗪基)-4-(2-甲基苯基)烟酰胺为起始原料,经过霍夫曼降解、酰胺还原和N-酰化等化学反应得到目标化合物;采用钙流实验,在HEK293/NK1R细胞株上进行体外对NK1受体拮抗活性的测定。结果制备了13个新型化合物(Ⅰ1~Ⅰ13),并经1HNMR确证结构。化合物Ⅰ12对HEK293/NK1R细胞有较好的NK1受体拮抗活性。结论化合物Ⅰ12作为一类新型NK1受体拮抗剂,具有深入研究的价值。