中老缅边境蚊虫标本中Nam Dinh病毒的分离和鉴定

2012年在云南省南部中老缅边境地区采集的库蚊中分离到3株病毒（YN12039、YN12040、YN12060）,该病毒只引起C6/36细胞发生病变。负染电镜观察病毒颗粒呈球形,直径60-80nm,有囊膜,表面有刺突。采用RTPCR方法对分离株的RNA依赖的RNA聚合酶（RNA-dependent RNA-polymerase,RdRp）、HEL1（superfamily 1helicase）、S蛋白（spike protein）基因进行扩增,同源性分析显示3株云南新分离株与Nam Dinh病毒（NDiV）RdRp、HEL1、S蛋白氨基酸序列相似度最高,均为98%以上。系统进化分析结果表明,3株云南新分离株与NDiV的亲缘关系最近,处于同一进化分支。该研究结果丰富了NDiV病毒的信息,对NDiV病毒分子特征、分布区域和物种嗜性等特征提供了数据参考。

四川省Nam Dinh病毒的首次分离鉴定

目的对2015年从四川省西部的甘孜藏族自治州蚊虫中分离到的病毒株SC1502、SC1510进行鉴定并分析其基因特征。方法通过细胞培养的方法对蚊虫标本进行病毒分离,利用Nam Dinh病毒(Nam Dinh virus,NDiV)特异性引物进行逆转录聚合酶链反应(reverse transcription PCR,RT-PCR)鉴定,同时扩增分离株的开放阅读框、RNA依赖的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA-polymerase,RdRp)、解旋酶超家族1(superfamily 1 helicase,HEL1)、刺突蛋白(spike protein,S蛋白)基因序列并测序,然后利用Mega Align软件对核苷酸序列和推测的氨基酸序列进行比对分析,利用Mega 7软件绘制系统进化树。结果SC1502、SC1510病毒株能够引起C6/36细胞发生病变,但不能引起BHK-21细胞的病变。同源性分析结果显示,2株四川新分离株与NDiV的RdRp、HEL1、S蛋白的核苷酸和氨基酸同源性最高,分别超过99.4%和97.5%。系统进化分析结果表明,2株四川新分离株与NDiV亲缘关系最近,处于同一进化分支。结论SC1502与SC1510为NDiV,该研究结果丰富了四川省的虫媒病毒病原谱数据库,对相关地区的不明原因疫情分析和调查提供了参考依据。