HepaCAM基因对人膀胱癌细胞增殖的抑制作用研究

目的:研究hepaCAM基因对人膀胱癌T24细胞增殖的影响。方法:运用脂质体转染方法,将pEGFP-N2-hepaCAM质粒转入T24细胞株,经G418筛选获得稳定表达的细胞株;RT-PCR及Westernblot方法检测目的基因和蛋白表达;MTT法及克隆形成实验研究hepaCAM基因对T24细胞体外生长的作用;流式细胞仪检测细胞周期分布;RT-PCR技术测定周期调控蛋白CyclinD1的mRNA表达变化。结果:RT-PCR和Westernblot方法分别检测到hepaCAM的基因表达和蛋白表达,MTT检测转染hepaCAM基因的细胞生长速度较对照组和空载体组明显减慢(P<0.01),克隆形成率明显小于对照组和空载体组(P<0.01)。细胞周期中G0/G1期比例明显增高(P<0.05),而S期比例减少;CyclinD1 mRNA表达明显下调(P<0.05)。结论:HepaCAM基因通过阻滞细胞于G0/G1期,减少CyclinD1 mRNA表达,抑制T24细胞的增殖。

hepaCAM基因转染对肾癌786-0细胞增殖和侵袭活性的影响

目的:肝细胞粘附分子(Hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)是近年来发现的一类免疫球蛋白超家族细胞黏附分子,具有抑癌基因特性。本文研究hepaCAM基因转染对肾癌(Renal cell carcinoma,RCC)细胞786-0增殖和侵袭能力的影响。方法:将携有hepaCAM基因的重组质粒hepaCAM-pEGFPN2转染786-0细胞(实验组)后用G418筛选形成阳性克隆并扩增培养,以转染了pEGFPN2(空载组)和未转染的786-0细胞(空白组)为对照,采用逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测hepaCAMmRNA的表达,四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)检测786-0细胞增殖活性,Transwell小室法检测细胞体外侵袭能力。结果:稳定转染hepaCAM后786-0细胞的hepaCAMmRNA表达水平明显上调(P<0.01),MTT显示实验组与空载组相比hep-aCAM基因抑制细胞成活率在4、5、6d分别为26.5%、38.1%、35.7%(P<0.01);侵袭实验显示细胞穿透ECM膜的数目为24.6±5.3(实验组)、35.5±6.23(空载组)和37.1±7.0(空白组),实验组细胞明显少于2对照组(P<0.01)。结论:抑癌基因hepaCAM转染能降低肾癌细胞786-0的增殖和侵袭活性。

新基因hepaCAM对膀胱癌细胞体外生物学影响

目的:研究肝细胞粘附分子(Hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)对人类膀胱癌T24细胞体外生物学影响。方法:脂质体法转染pEGFP-N2-hepaCAM质粒入T24细胞,激光共聚焦显微镜检测其蛋白定位;筛选稳定表达细胞株;Western blot检测蛋白表达。细胞粘附、基质胶侵袭实验及MTT实验研究该基因对细胞粘附力、活动力及增殖力的影响。结果:hepaCAM在单个细胞中分布在细胞核周边区域;相互连接细胞中主要分布于细胞间相互接触区域。获得稳定表达hepaCAM基因的T24细胞。体外粘附实验、基质胶侵袭实验证明实验组细胞粘附力及活动力明显高于空白组及阴性对照组。MTT法检测转染hepaCAM基因细胞增殖力明显低于空白组及阴性对照组。结论:hepaCAM基因可显著抑制人类膀胱癌T24细胞恶性行为,可能是通过增强细胞-基质间粘附及抑制细胞增殖力从而影响肿瘤细胞的浸润和转移。

一例HEPACAM基因变异致伴皮层下囊肿的巨脑性脑白质病2B型患儿的分析

目的探讨1例伴皮层下囊肿的巨脑性脑白质病(megalencephalic leukoencephalopathy with subcortical cyst,MLC)2B型患儿及其家系的临床特征与HEPACAM基因的变异情况。方法回顾分析1例HEPACAM基因变异导致的MLC2B型患儿的临床、影像资料及患儿母亲、舅舅的生长发育情况并复习相关文献。结果患儿,女,1岁7个月,因抽搐就诊,智力运动发育落后,头围异常增大,头颅磁共振成像提示两侧大脑半球脑白质呈广泛性长T1长T2信号、右前颞囊肿、脑回增宽、脑沟浅平。基因测序提示HEPACAM基因第3外显子存在c.437C>T错义变异,其母携带相同变异,父亲未发现异常。母亲及舅舅幼时有头围增大史,成年后母亲头围正常、舅舅头围仍大于正常成年人。结论该患儿携带HEPACAM基因一个杂合变异,诊断为MLC2B型。上述变异来源于母亲,MLC2B可能存在外显不全。

γ-干扰素对膀胱癌T24细胞增殖影响及分子机制研究

探讨γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)对膀胱癌细胞株T24增殖影响及其分子机制.5种不同终浓度(125、250、500、1 000、2 000 U/mL)重组人细胞因子IFN-γ处理人膀胱癌T24细胞,分别在24、48、72 h采用MTT(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)法检测T24增殖抑制率;以作用浓度为500 U/mL IFN-γ作用T24细胞,并设为实验组,未经IFN-γ处理设为对照组.流式细胞仪检测T24细胞周期各阶段变化;RT-PCR检测hepaCAM(hepatocyte cell adhesion molecule)基因表达;Western blot检测p21WAF1蛋白表达.结果表明:IFN-γ抑制T24增殖呈时间剂量依赖性(P<0.05);与对照组相比,实验组经流式细胞仪检测提示细胞G0/G1期比例增高(n=5,P<0.01);RT-PCR结果提示hepaCAM基因表达水平升高(P<0.05);Western blot结果提示p21WAF1蛋白表达水平增高,有统计学意义(P<0.01).新基因hepaCAM在IFN-γ对膀胱癌细胞株T24增殖调节中可能起作用,并可能通过上调p21WAF1蛋白表达阻滞T24细胞于G0/G1期,而抑制T24增殖.