SIRNA表达载体与阳离子脂质体复合物转染HEPG-2细胞的实验研究

目的观察针对HIF1α的SRNA表达载体GenesiI-HIF1α与阳离子脂质体复合物对HEPQ-2细胞增值及其对HIF1α表达的影响。方法以poenesil表达载体分别设计阳性对照（pG—shPJqkHif-1α），阴性对照（pG—shPNA—HK），未处理细胞为空白对照（KB）。用3μg：15μl配比的pGenesil—SlaNA-1α阳离子脂质体的复合物转染HEPG-2细胞，G418400mg／ml培养转染后的细胞10天，拍荧光照片。37℃、5％CO2S、5％C2、90％N2培养36小时，用RT—PcR测定HIF-1α mENA的表达，用cck-8测细胞增殖。结果培养36小时的阳性对照组Hif-1αmENA表达明显减低（P〈0.05），对Hepg一2细胞增殖抑制作用明显（P〈005）；结论3μ：15μl计量配比组pGenesil—hif—1α与阳离子脂质体复合物可以有效转染Hepg-2细胞，能有效抑制HEPG-2细胞Hif-1α的表达，并抑制其增殖。

构树叶总黄酮对人肝癌HepG-2细胞增殖及其细胞周期的影响

目的:研究构树叶总黄酮(total flavonoids of Broussonetia papyrifera,TFBP)对人肝癌细胞HepG-2的生长抑制和诱导凋亡的作用及其机制。方法:取对数生长期人肝癌HepG-2细胞,随机分为药物组和对照组,药物组用3,6,9,12 g·L-1不同质量浓度TFBP作用人肝癌HepG-2细胞24,48,72 h后,采用MTT法检测细胞生长抑制率;Hoechst 33342荧光染色法荧光显微镜观察细胞的形态变化并用流式细胞仪检测细胞的周期及细胞凋亡率。结果:MTT结果显示,各质量浓度3,6,9,12 g·L-1的TFBP对HepG-2有增殖抑制作用,并存在浓度和时间依赖关系,3,6,9,12 g·L-1不同质量浓度TFBP作用人肝癌HepG-2细48 h后,细胞增殖抑制率分别为20.2%,29.44%,39.21%,43.96%;9 g·L-1的TFBP作用HepG-2细胞72 h后,细胞增殖抑制率可达52.46%,与对照组具有显著性差异(P<0.05);Hoechst 33342荧光染色可观察到核浓缩及核碎裂等典型细胞凋亡特征及凋亡小体;流式细胞仪结果显示,随着TFBP作用浓度的增加,加药组细胞凋亡率加药组凋亡率与对照组相,有显著差异(P<0.01),G0/G1期细胞逐渐减少,G2/M期细胞数逐渐增多,与对照组比较差异有显著性(P<0.05),细胞周期被阻滞在G2/M期。结论:TFBP在体外对肝癌细胞HepG-2有明显的增殖抑制和诱导细胞凋亡的作用,其抑制机制可能和诱导细胞凋亡与阻滞细胞周期有关。