脂质体槲皮素抑制热休克后人肝癌HEPG-2和肾癌ORSC-2细胞系HSP70表达

目的比较不同浓度脂质体槲皮素(LQ)对人肝癌HEPG-2细胞和肾癌ORSC-2细胞热疗后热休克蛋白70的表达变化及其作用机制。方法用旋转蒸发法制备LQ。将细胞分为37℃培养组、42℃培养组和槲皮素干预组。MTT法检测细胞抑制率,优选出合适浓度。用10、15和30 mg/L的LQ处理上述两种肿瘤细胞,于热休克后2、4、6、8和10 h取出细胞。流式细胞计量术检测细胞凋亡,RT-qPCR检测HSP70mRNA的表达,Western blot检测细胞HSP70的表达水平。结果42℃热疗后人肝癌HEPG-2细胞和肾癌ORSC-2细胞的HSP70在基因和蛋白水平上均明显升高(P<0.05)。随着脂质体槲皮素浓度的增加,HSP70表达逐渐降低。结论脂质体槲皮素能通过抑制热休克状态肿瘤细胞HSP70的表达诱导肝癌和肾癌肿瘤细胞凋亡。

CpG ODN增强人外周血单个核细胞对肝癌细胞系HepG-2杀伤活性的实验研究

目的探讨CpG ODN在体外对人外周血单个核细胞的活性和肿瘤杀伤作用的影响。方法用CpG ODN刺激在体外分离培养的人外周血单个核细胞,检测其活性和对肝癌细胞系HepG-2杀伤作用。结果CpG ODN组PBMC培养上清IFN-γ显著高于对照组(P<0.05)。经CpG ODN刺激72小时后与HepG2细胞作用,48小时后乳酸脱氢酶在培养液中活力较对照组增强,差别具有显著性(P<0.05)。结论CpG ODN可明显提高人外周血淋单个核细胞对肿瘤的杀伤活性。

HSP70-肿瘤肽复合物的纯化及其对肝癌细胞株HepG-2增殖的作用

目的:应用快速蛋白液相色谱(FPLC)系统从肝癌组织中分离和纯4EHSP70-肽复合物,并研究其对肝癌细胞系HepG-2增殖的影响．方法:将组织进行匀浆、高速离心提取总蛋白后依次进行ConA-Sepharose亲和层析和 DEAE-Sephacel子交换层析分离纯化,所得蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot进行蛋白分子质量及性质鉴定,Bradford 法测定蛋白浓度;利用MTT方法检测HSP70- 肽复合物对HepG-2细胞增长的情况．结果:分离、纯化得到的蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、考马斯量蓝鉴定为单一带, 分子质量为70 kDa;Western blot结果证实为 HSP70,每10 g组织最终获得1．5 mg的HSP70; HSP70刺激组12,48,72 h与对照组的A值之间有显著差异(0．1 mg／L:t=-0．2500,P=0．00; t=-0．1777,P=0．001:t=-0．3094,P=0．001; 0．5 mg／L:t=-0．2878,P=0．00;t=-0．2044,P= 0．00;t=-0．3285,P=0．00;1 mg／L:t=-0．3118, P=0．00;t=-0．2592,P=0．00;t=-0．1994, P=0．025;5 mg／L:t=-0．4007,P=0．00;t= -0．1302,P=0．016;t=-0．2537,P=0．005),细胞存活率明显高于对照组(P<0．01)．结论:使用本分离纯化方法可获得高纯度 HSP70肽复合物;HSP70肽复合物可以促进 HepG-2细胞的生长．