抑制gankyrin的表达对肝癌细胞系HepG2增殖的影响

目的:探索通过RNA干涉技术抑制gankyrin的表达对肝癌细胞系HepG2增殖及细胞周期的影响.方法:建立稳定表达靶向gankyrin的shRNA的HepG2细胞系.通过Westernblotting验证基因表达的抑制效果.采用细胞计数及MTT法检测细胞的增殖能力.流式细胞仪分析细胞周期.结果:抑制gankyrin基因的表达显著抑制了HepG2细胞的生长,与转染阴性对照shRNA质粒细胞相比,细胞计数示细胞数目明显减低(d6:24.4×103±5.2×103vs123.3×103±2.8×103,P<0.05),MTT分析显示细胞增殖率明显下降(144h:7.53±0.50vs16.30±0.38,P<0.05),流式细胞分析示细胞周期阻滞在G1期(G1:71.63±3.60%vs52.57±2.82%,P<0.05).结论:在HepG2细胞中抑制gankyrin的表达可有效抑制细胞生长并导致细胞周期的阻滞.利用RNA干涉技术抑制gankyrin的表达可能会成为一种有效的肝癌基因治疗手段.

维生素E同系化合物抑制人肝癌细胞HepG2增殖的作用

通过探讨α 生育酚 (α T)、γ 生育酚 (γ T)、δ 生育酚 (δ T)及维生素E琥珀酸酯 (VES)抑制肝癌细胞生长的生物学效应 ,为维生素E(VE)防治肝癌提供理论依据 ,在体外培养的人肝癌细胞 (HepG2 )培养液中分别加入 1 2 5、2 5 0、50 0、1 0 0 0和 2 0 0mg L的VE同系化合物 ,采用细胞计数法和噻唑蓝比色法 (MTT)比较VE同系化合物抑制HepG2细胞增殖的效应 ;采用流式细胞仪检测四种VE同系化合物对HepG2细胞周期的影响。结果显示在 1 2 5和 2 5 0mg L浓度下 ,4种VE同系化合物均未显示出对HepG2细胞生长的抑制效应 ;在50、1 0 0和 2 0 0mg L浓度下 ,δ 生育酚、VES处理的HepG2生长速度明显减缓、细胞存活率显著降低 ,δ 生育酚处理的HepG2细胞生长轻度减缓 ,而γ 生育酚处理的HepG2细胞未见明显改变。VE同系化合物抑制HepG2细胞增殖的效应为δ 生育酚 >VES >γ 生育酚 >α 生育酚 ;细胞周期结果显示HepG2细胞增殖阻断于G1 期。提示VE同系化合物抑制肝癌细胞生长作用不同 ,δ

熊果酸对HepG2增殖和凋亡的影响及部分机制研究

目的:观察熊果酸对人肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响及其部分机制的研究。方法:将不同浓度熊果酸体外培养人肝癌HepG2细胞,通过MTT法检测熊果酸对细胞增殖抑制的情况,利用流式细胞检测术观察熊果酸对细胞凋亡及细胞周期的影响。同时利用Western blot法检测不同浓度熊果酸干预后人肝癌HepG2细胞pERK1/2蛋白、Cyclin D1蛋白的表达情况。结果:不同浓度熊果酸对人肝癌HepG2细胞的增殖均有抑制效应,并呈剂量、时间依赖性(P<0.05);60μmol/L熊果酸作用于人肝癌细胞株HepG2 72 h后达到最大细胞凋亡率(78.723±3.623)%。熊果酸可明显增加G_0/G_1期的细胞含量,诱导人肝癌细胞株HepG2的凋亡。熊果酸可抑制pERK1/2蛋白、Cyclin D1蛋白的表达,并随着浓度、时间逐渐上调抑制作用更加明显。结论:熊果酸可抑制人肝癌细胞株HepG2增殖,阻滞细胞期于G0/G1期,促进癌细胞凋亡,这一过程可能与下调细胞pERK1/2蛋白、Cyclin D1蛋白的表达有关。

野鸦椿果实总三萜提取工艺考察及抑制HepG2细胞增殖活性研究

目的:明确野鸦椿果实总三萜的最佳提取工艺,并探究野鸦椿果实总三萜对HepG2细胞增殖的抑制作用。方法:以超声提取的方式,总三萜得率为指标,采用单因素试验结合响应面优化法考察野鸦椿果实总三萜最佳提取工艺。采用CCK-8法检测野鸦椿果实总三萜对HepG2细胞增殖抑制作用。结果:影响野鸦椿果实总三萜超声提取的因素顺序为溶剂浓度>提取时间>液料比,最优提取工艺条件为液料比为51∶1(mL·g^(-1)),甲醇浓度69%,提取时间58 min,提取率为(8.49±0.15)%。通过乙酸乙酯萃取和MCI柱色谱纯化后,野鸦椿总三萜纯度可达66.4%。野鸦椿总三萜对HepG2细胞增殖的抑制较好,呈剂量依赖性;IC_(50)为20.302±1.65μg·mL^(-1)。结论:野鸦椿果实总三萜超声提取最优工艺为液料比51∶1(mL·g^(-1)),甲醇浓度69%,超声提取58 min,该方法较为稳定,操作方便快捷。总三萜体外抑制HepG2细胞增殖效果良好。

中药复方搏癌丸对人肝癌HepG_2细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究中药复方搏癌丸对人肝癌HepG_2细胞增殖及凋亡的诱导作用。方法:采用细胞药理学和血清药理学方法,对比观察(阴性无药血清对照、阳性药5-氟尿嘧啶血清对照)搏癌丸诱导HepG_2细胞的增殖及凋亡。(1)MTT法观察4个搏癌丸药物血清浓度对HepG_2细胞增殖的抑制作用,从中筛选出搏癌丸的有效药物浓度。(2)电镜及流式细胞仪观察HepG_2细胞凋亡。结果:(1)10%、5%、2.5％搏癌丸药物血清3个有效浓度均对HepG_2细胞增殖有显著抑制作用(P<0.01),增殖抑制作用随药物浓度增高而有加强趋势,3个有效浓度组间差异均有显著性(P<0.01)。(2)10％搏癌丸药物血清作用HepG_2细胞48小时后,HepG_2细胞核明显缩小,浆比减少,核仁减少、浓缩甚至消失,核内异染色质明显增多,核膜完整,可见早、中、晚期细胞凋亡,出现凋亡小体。(3)10％搏癌丸药物血清作用HepG_2细胞48小时后,流式细胞仪检测的细胞凋亡率为25.34％,均显著高于相应无药血清对照组的3.54％(P<0.05)。结论:搏癌丸能在一定程度上抑制HepG_2细胞的增殖和诱导HepG_2细胞凋亡。

过氧化氢对人肝癌细胞株HepG_2增殖的促进作用

目的 :探讨低剂量过氧化氢 (H2 O2 )对人肝癌细胞株HepG2 的促增殖作用及该作用与NF κB和细胞周期的关系 .方法 :不同剂量H2 O2 直接作用于培养的HepG2 细胞 ;2 0 μmol/LNF κB抑制剂 (PDTC)预处理细胞 2h ,5 0 μmol/L的H2 O2 作用HepG2 细胞 ;5 0 μmol/LH2 O2 分别作用于G1,G2 /M ,S期细胞 ,MTT法测定细胞增殖活性 .结果 :5 0 μmol/L的H2 O2 具有明显的促进HepG2 细胞生长的作用 ,此作用可以被PDTC抑制 ;5 0 μmol/L的H2 O2 可以明显的促进G1期HepG2 细胞生长 .结论 :低剂量H2 O2 可诱导HepG2 细胞增殖 ,该过程可能包含依赖NF κB的信号途径的参与 ;H2 O2 诱导HepG2 细胞增殖在细胞周期的不同时相效应敏感性不同 ,主要诱导G1期细胞增殖 .

覆盆子提取物在HepG2细胞增殖和凋亡中的作用

目的：在美国，新鲜覆盆子属于普通水果，在中国则为“药食两用”植物的果实。覆盆子中含有大量植物化学物质，其中许多植物化学物质有抗氧化和抗肿瘤作用。该文报告了新鲜覆盆子提取物抑制HepG2 cell(人肝癌细胞系)增殖并诱导细胞凋亡的作用。方法：采用细胞增殖测定、Westem blot分析、免疫细胞化学、和TUNEL分析等方法。

脂氧合酶抑制剂抑制HepG2细胞增殖的研究

目的探讨脂氧合酶抑制刑对HepG2细胞增殖的影响及其相关机制。方法体外培养HepG2肝癌细胞，应用不同浓度脂氧合酶抑制剂去甲二氢愈创木酸(NDGA)处理HepG2细胞，利用MTT比色法、生长曲线、细胞克隆形成试验观察NDGA对HepG2细胞增殖的影响。结果NDGA对HepG2细胞具有明显的生长抑制作用，不同浓度的NDGA(50、100、150、200μmol/L)处理HepG2细胞72h的抑制率分别为27．34％、41．76％、57．08％和69．17％，其IC50值为109．13μmol／L。细胞克隆形成率分别为21．63％。17．33％，12．53％，7．97％，明显低于对照组的31．70％。结论NDGA对HepG2细胞有较强的细胞毒作用且以剂量、时间依赖方式抑制细胞增殖。

文冠果壳提取物体外抑制HepG_2细胞增殖活性部位筛选研究

目的:筛选文冠果壳体外抑制肝癌Hep G2细胞增殖活性部位。方法:分别用水、10%、30%、50%、70%、95%的乙醇水溶液,从文冠果壳中提取得到A、B、C、D、E和F 6个提取部位(XSHE),采用MTT法来筛选抑制肝癌细胞HepG2增殖的活性部位。结果:显示6个提取部位均有抑制HepG2细胞增殖作用,其中提取部位F(95%乙醇水溶液提取物)抑制HepG2细胞增殖作用最强,当95%XSHE给药质量浓度为75. 00μg·mL^(-1)时,其对HepG2细胞增殖的抑制率高达(80. 44±2. 33)%,高于等浓度的阳性对照丝裂霉素C(MMc),且Hep G2细胞在95%XSHE干预下形态发生变化,具体表现为细胞皱缩,细胞间隙变大,从培养板脱落等作用。结论:文冠果壳提取物在体外具有良好的抑制Hep G2增殖的生物活性,为我们进一步探索文冠果壳提取物抗肿瘤作用机制奠定了基础。

Midkine accumulated in nucleolus of HepG2 cells involved in rRNA transcription

AIM： To invesgate the ultrastructural location of midkine （MK） in nucleolus and function corresponding to its location. METHODS： To investigate the ultrastructural location of MK in nucleolus with immunoelectronic microscopy. To study the role that MK plays in ribosomal biogenesis by real-time PCR. The effect of MK on anti-apoptotic activity of HepG2 cells was studied with FITC- conjugated annexin V and propidium iodide PI double staining through FACS assay. RESULTS： MK mainly localized in the granular component （GC）, dense fibrillar component （DFC） and the border between the DFC and fibrillar center （FC）. The production of 45S precursor rRNA level was decreased significantly in the presence of MK antisense oligonucleotide in the HepG2 cells. Furthermore, it was found that exogenous MK could protect HepG2 from apoptosis significantly. CONCLUSION： MK was constitutively translocated to the nucleolus of HepG2 cells, where it accumulated and mostly distributed at DFC, GC components and at the region between FC and DFC, MK played an important role in rRNA transcription, ribosome biogenesis, and cell proliferation in HepG2 cells. MK might serve as a molecular target for therapeutic intervention of human carcinomas.

Inhibitory effect of metformin on the proliferation of human hepatoma HepG2 cells and its potential mechanism

Objective： This work aimed to study the inhibitory effect and the related mechanism of metformin （MET） on the proliferation of human hepatoma HepG2 cells. Methods： Human hepatoma HepG2 cells were treated with MET （0, 2, 10, and 50 mM）. The inhibitory effect of MET on the proliferation of HepG2 cells was determined by MTT method. The apoptosis of HepG2 cells was detected by flow cytornetry. The expression of cyclin D1 in HepG2 cells was examined by Western blot. ROS-DHE fluorescence probe was used to stain the reactive oxygen species （ROS） generated by HepG2 cells after treat- ment. Results： MET could inhibit the proliferation of HepG2 cells in a dose and time dependent manner. MET promoted the apoptosis of HepG2 cells. In addition, MET suppressed the expression of cell cycle protein cyclin D1 and induced the produc- tion of ROS in HepG2 cells. Conclusion： MET can inhibit the proliferation of human hepatoma HepG2 cells and induce cell apoptosis. Meanwhile, MET has the ability to decrease the expression of cyclin D1 and induce ROS generation, which may be involved in the mechanism of inhibiting hepatoma cells proliferation.

^(60)Co γ射线对肝癌细胞株HepG_2增殖和细胞周期的影响

目的 观察6 0 Coγ射线对肝癌细胞株HepG2 增殖、凋亡和细胞周期的影响 ,并探讨γ射线对细胞周期改变与p2 7kip1 蛋白表达和分布之间的关系。方法 以不同剂量的γ射线照射培养的HepG2 细胞 ,观察细胞形态和生长曲线变化 ,同时应用流式细胞计数仪观察细胞周期和凋亡的改变 ,并应用免疫荧光方法观察p2 7kip1 蛋白的表达和分布改变。结果 6 0 Coγ射线照射细胞引起He pG2 细胞株剂量依赖性的生长抑制和凋亡增加。6 0 Coγ射线可引起细胞G2 M期阻滞 ,同时p2 7kip1 表达明显抑制 ,并主要分布于细胞浆。结论 6 0 Coγ射线所导致的肝癌细胞株HepG2 细胞的G2 M阻滞可能与细胞内p2 7kip1 的表达抑制和细胞浆的分布比例增加有关。

脉冲磁场对肝癌细胞株HepG2细胞增殖和分化的影响

目的 研究低频脉冲磁场对肝癌细胞株HepG2细胞增殖和分化的影响。方法 2种频率不同场强相同的低频脉冲磁场处理HepG2细胞 ,以 2 对磺酸基苯基 3 ( 4 ,5 二甲基噻唑 ) 5 ( 3 羧甲氧基苯基 ) 二氢四唑嗡盐 (MTS)方法检测细胞的增殖情况 ,酶联免疫法测定HepG2细胞甲胎蛋白的分泌量。结果 80Hz、1.5 5mT磁场分别处理HepG2细胞 1、4、8、12和 2 4h ,对HepG2细胞的增殖均无明显影响 ,差异无显著性 (P >0 .0 5 )。 16Hz脉冲磁场分别处理HepG2细胞 1、4、8和 2 4h ,对HepG2细胞的增殖和甲胎蛋白 (AFP)的分泌量均无明显影响 ,差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 本研究没有观察到 16、80Hz脉冲磁场对肝癌细胞株HepG2的增殖和特征蛋白 (AFP)分泌存在“窗口”

Ciglitazone抑制人肝癌HepG2细胞增殖活性的实验研究

目的 研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂Ciglitazone对人肝癌细胞株HepG2体内、外生长的影响。并探讨其可能机制。方法 培养HepG2细胞,加入不同浓度的Ciglitazone,用生长曲线检测HepG2细胞体外生长情况,用流式细胞仪进行细胞周期分析;Western blot检测Ciglitazone对PPARγ蛋白表达的影响。建立裸鼠肝癌动物模型,随机将其分为两组:对照组(A组,10只),Ciglitazone注射组(B组,10只),B组隔天注射Ciglitazone 100 μl(100μmol/L)连续15次,对照组注射100μl生理盐水,1个月后,切除瘤灶、称瘤重、计算抑瘤率。标本用Western blot检测细胞周期素D1(CyclinD1)、细胞周期素依赖性激酶抑制子p21蛋白的表达。结果 (1)Ciglitazone体外抑制HepG2细胞生长,并呈现明显时间和剂量依赖性。(2)经Ciglitazone处理后PPARγ蛋白表达增加。(3)经Ciglitazone治疗后,A组、B组的瘤重分别为(3.73±0.22)g、(2.60±0.35)g,抑瘤率达30％,A组的CyclinD1较B组明显增高,A组的p21蛋白表达水平较B组明显降低。结论 Ciglitazone能抑制肝癌HepG2细胞的恶性增殖(呈明显的时间及剂量依赖性),并诱导其分化,其机制与PPARγ干预细胞周期的调控有关。

甲磺酸加贝脂抑制人肝癌HepG2细胞增殖及相关机制

甲磺酸加贝脂（gabexate mesilate，GM）是一种人工合成的丝氨酸蛋白酶抑制剂，近年来有文献报道将GM用于直肠癌、胰腺癌等肿瘤治疗的探索性研究，初步显示GM可能是一种新型的基质金属蛋白酶抑制剂。我们探索GM在体外对肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响，探讨其可能的作用机制。

甲基丙烯酸化淫羊藿苷的制备及对HepG2肝癌细胞增殖的影响

目的:制备甲基丙烯酸化淫羊藿苷,考察甲基丙烯酸化淫羊藿苷对肝癌HepG2细胞增殖的影响。方法:通过淫羊藿苷和甲基丙烯酸酐的亲核加成反应,获得甲基丙烯酸化淫羊藿苷;采用核磁共振氢谱、扫描电镜以及纳米粒度分布仪对其进行表征。以不同浓度(0、10、20、30、40 mol/l)的甲基丙烯酸化淫羊藿苷作用于HepG29肝癌细胞,不同时间(24,48 h)后用共聚焦显微镜和MTT法检测甲基丙烯酸化淫羊藿苷对HepG2细胞增殖的影响。结果:淫羊藿苷可通过亲核加成反应获得甲基丙烯酸化淫羊藿苷,其甲基丙烯酸酐基团的个数可以通过改变反应条件来改变,甲基丙烯酸化淫羊藿苷在水中能发生分子的自组装形成带负电荷的球形纳米粒子,且随溶液p H的不同,纳米粒子的zeta电位不同。各浓度的甲基丙烯酸化淫羊藿苷均明显抑制HepG2细胞的增殖,并呈明显的时间与浓度依赖性;20 mol/l的甲基丙烯酸化淫羊藿苷与40 mol/l的淫羊藿苷抑制HepG2细胞增殖的作用相当;作用48 h后,20、30和40 mol/l甲基丙烯酸化淫羊藿苷对HepG2细胞增殖的抑制率分别达42.40%、77.06%和95.31%,而40 mol/l淫羊藿苷的抑制率则为39.25%。结论:淫羊藿苷结构修饰产物甲基丙烯酸化淫羊藿苷可显著抑制HepG2细胞增殖,且作用强度高于淫羊藿苷,是一种潜在的抗肿瘤候选药物。

人纤维蛋白溶酶原kringle5(K5)抑制小鼠肝癌的血管生成和肿瘤生长

【目的】体内、体外实验观察人纤维蛋白溶酶原kringle5(K5)对肝癌血管生成和肿瘤生长的影响。【方法】大肠杆菌中表达,组氨酸结合柱亲和层析、纯化获得K5蛋白,SDS-PAGE和Westernblot方法鉴定K5蛋白的表达;MTT法分析K5对牛视网膜毛细血管内皮细胞(BRCEC)和肝癌细胞株Bel-7402、HepG2增殖的影响;建立皮下种植肝癌鼠模型,瘤内注射K5,检测抑瘤率及肝癌组织微血管密度(MVD)。【结果】SDS-PAGE及Westernblot鉴定获得K5纯化蛋白;K5特异性地抑制BRCEC的增殖,IC50=160nmol/L,而对肝癌细胞株Bel-7402、HepG2的增殖无抑制作用;K5显著抑制小鼠肝癌生长,治疗组肝癌组织MVD明显低于对照组。【结论】K5抑制移植性小鼠肝癌血管生成和肿瘤生长,特异性抑制血管内皮细胞的增殖可能是K5抑制肝癌血管生成的主要机制。K5具有治疗肝癌的潜在临床价值。

丹参酮ⅡA脂质体制备及对HepG2/ADR细胞增殖的抑制

目的对丹参酮ⅡA的脂质体进行研制,并且在对HepG2/ADR细胞增殖进行抑制时对其进行应用,并对其在临床中应用的效果进行观察与分析.方法：采用薄膜分散的方法对丹参酮ⅡA的脂质体进行研制与储备,并且采用改良的MTT法表现其在对肿瘤细胞的增殖中能够起到的抑制作用.结果：经过研制制造出了平均的粒径能够达到68mm的脂质体,其电位体现为-23.4mV,其包封率与载药量分别体现为97.4% ±1.2%、138.9±8.7μg·mL-1.同游离的药物相比较而言,丹参酮ⅡA的脂质体对于HepG2/ADR细胞的增殖所体现出来的抑制效果更为理想,并且能够呈现出对剂量与时间的依赖性.结论：在对HepG2/ADR细胞的增殖进行抑制中,应用丹参酮ⅡA的脂质体能够获得更加理想的临床治疗效果,值得对其进行大力的推广与应用.

基础核医学

电离辐射诱导细胞周期解偶联的实验研究；P糖蛋白抑制X射线诱导调亡及对线粒体膜电位的影响；辐射诱发肿瘤细胞旁效应的免疫学实验研究；腺病毒介导p53基因转染增加人胃癌细胞的放射敏感性；^60Co y射线对肝癌细胞株HepG2增殖和细胞周期的影响；人非小细胞肺癌细胞受照射后肿瘤坏死因子水平的变化；X射线照射诱导小鼠junB基因的表达；氟伐他汀防治放射性肺损伤的病理形态学研究；^32P胶体局部给药防治H22移植瘤淋巴道转移的实验研究；电离辐射调控脂质体介导的p16基因在HeLa细胞中的表达；低剂量y射线全身照射对猴免疫功能的影响；^45Ca标记复合钙化合物示踪钙生物动力学观察；电离辐射致中国仓鼠卵巢（CHO）细胞凋亡的研究；用核素法探测宫颈癌前哨淋巴结；杆状病毒介导NIS基因放射治疗甲状腺癌的实验研究；全反式维甲酸对甲状腺癌细胞NIS基因表达及摄碘水平的影响；电子射线照射大鼠胶原及自由基改变的研究；全脑照射后海马组织内氨基酸类神经递质含量的变化；y射线诱发小鼠皮肤汗腺癌中p53、MDM2基因的表达；富勒醇对^60Co y射线致小鼠损伤的防护作用。

In vitro and in vivo suppression of hepatocellular carcinoma growth by midkine-antisense oligonucleotide-loaded nanoparticles

AIM:To synthesize antisense oligonucleotides (ASODNs) of midkine (MK), package the ASODNs with nanoparticles, and to inhibit hepatocellular carcinoma (HCC) growth using these nanoparticles.METHODS: HepG2 cell proliferation was analyzed in vitro using the 3-(4,5-dimethythiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2Htetrazolium, inner salt assay. The in vivo activity of nanoparticles delivering the MK-ASODNs was analyzed by histopathological and immunohistochemical staining and quantitative real time polymerase chain reaction (PCR). RESULTS: The in vitro proliferation of HepG2 cells was signif icantly inhibited by the nanoparticles packaged with MK-ASODNs (NANO-ASODNs). Furthermore, the NANO- ASODNs signif icantly inhibited the growth of HCC in the mouse model. CONCLUSION: NANO-ASODNs can significantly suppress the growth of HCC in vitro and in vivo.