花青素调节JAK2/STAT3信号通路对自身免疫性心肌炎大鼠Th17/Treg平衡的影响

目的:探讨花青素对自身免疫性心肌炎(AE)大鼠T细胞17/调节性T细胞(Th17/Treg)平衡及Janus激酶2/信号转导和转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路的影响。方法:将60只SD大鼠分为对照(NC)组、模型(Model)组、花青素组(50 mg/kg花青素)、STAT3激活剂Colivelin组(1 mg/kg Colivelin)、花青素+Colivelin组(50 mg/kg花青素+1 mg/kg Colivelin),每组12只。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清炎性因子水平;苏木素-伊红(HE)染色检测心肌病理变化;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)染色检测心肌细胞凋亡;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测脾脏维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)、叉头蛋白p3(Foxp3)mRNA表达情况;蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测心肌JAK2/STAT3通路相关蛋白表达。结果:Model组心肌明显坏死和水肿,大量炎性细胞浸润;花青素组心肌无明显的坏死和细胞肿胀;Colivelin组心肌损伤加重;与花青素组相比,花青素+Colivelin组大鼠炎性细胞浸润现象增加。与NC组相比,Model组白细胞介素(IL)-17、IL-23水平、RORγt mRNA水平、Th17细胞水平、Th17/Treg比例、心肌细胞凋亡率及磷酸化STAT3(p-STAT3)/STAT3、磷酸化JAK2(p-JAK2)/JAK2比例明显升高(P<0.05),IL-10、IL-4水平、Treg细胞水平、Foxp3 mRNA水平明显下降(P<0.05);与Model组比较,花青素组IL-17、IL-23水平、RORγt mRNA水平、Th17细胞水平、Th17/Treg比例、心肌细胞凋亡率以及p-STAT3/STAT3、p-JAK2/JAK2比例明显下降(P<0.05),IL-10、IL-4水平、Treg细胞水平、Foxp3 mRNA水平明显升高(P<0.05);Colivelin组对应指标呈相反趋势(P<0.05);与花青素组相比,花青素+Colivelin组IL-17、IL-23水平、RORγt mRNA水平、Th17细胞水平、Th17/Treg比例、心肌细胞凋亡率及p-STAT3/STAT3、p-JAK2/JAK2比例明显升高(P<0.05),IL-10、IL-4水平、Treg细胞水平、脾脏Foxp3 mRNA水平明显下降(P<0.05)。结论:花青素可能通过抑制JAK2/STAT3通路,恢复Th17/Treg平衡,实现对AE大鼠心肌的保护作用。

JAK2/STAT3信号通路调控急性肺损伤过程中Th17/Treg失衡机制的研究

目的探讨JAK2/STAT3信号通路在急性肺损伤(acute lung injury,ALI)过程中对Th17/Treg失衡的影响及其机制。方法将24只C57BL/6小鼠随机分为4组:对照组、模型组、JAK2抑制剂组和STAT3抑制剂组,每组6只。对照组气道内滴注生理盐水,8 h后腹腔注射等量生理盐水,模型组、JAK2抑制剂组和STAT3抑制剂组气道滴注脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)构建ALI模型,8 h后分别腹腔注射等量生理盐水、Fedratinib和NSC74859。LPS滴注24 h后测定小鼠肺湿重/干重(W/D),HE染色观察肺组织病理变化,流式检测肺组织中Treg细胞和Thl7细胞的比例,ELISA检测肺组织匀浆中IL-6、lL-10、IL-17A和TGF-β1水平,Western blot检测肺组织中JAK2、STAT3、p-JAK2和p-STAT3蛋白的表达。结果与对照组相比,模型组W/D升高(P<0.01),肺组织损伤严重,有大量炎性细胞浸润,肺组织中Th17/Treg比值、炎症因子IL-6、IL-17A、TGF-β1水平、p-JAK2和p-STAT3蛋白表达水平均显著升高(P<0.01),IL-10水平显著降低(P<0.01);与模型组相比,JAK2抑制剂组和STAT3抑制剂组W/D降低(P<0.05),肺组织损伤有所减轻,炎性细胞浸润减少,肺组织中Th17/Treg比值、炎症因子IL-6、IL-17A、TGF-β1水平、p-JAK2和p-STAT3蛋白表达水平均显著降低(P<0.01),IL-10水平显著升高(P<0.01)。结论抑制JAK2/STAT3信号通路的激活能够调节LPS诱导的ALI小鼠肺组织中Th17/Treg细胞的失衡,抑制炎症反应,减轻肺损伤。

HER-2/CEP17信号比与乳腺癌新辅助化疗后病理完全缓解的相关性研究

目的:评价HER-2/CEP17信号比与乳腺癌新辅助化疗后病理完全缓解的相关性及其预测作用。方法:收集中山大学孙逸仙纪念医院2013年1月至2017年12月635例临床分期为ⅡB~Ⅲ期浸润性乳腺癌行新辅助化疗患者的临床资料。根据患者新辅助化疗后手术病理标本,分为病理完全缓解组117例和非病理完全缓解组518例。统计分析HER-2/CEP17信号比是否为全体患者以及联合和非联合靶向治疗亚组病理完全缓解的独立预测因子,并且分析HER-2/CEP17信号比是否与病理完全缓解率具有相关性。结果:635例乳腺癌患者中,总体病理完全缓解率为18.4%(117/635),多因素Logistic回归分析结果显示T分期(OR为0.500,95%CI为0.350~0.712,P<0.001)、Ki-67表达(OR为3.461,95%CI为1.891~6.333,P<0.001)、分子分型(OR为1.458,95%CI为1.188~1.791,P<0.001)、HER-2基因拷贝数(OR为6.173,95%CI为2.110~17.857,P=0.001)及HER-2/CEP17信号比(OR为9.076,95%CI为3.142~26.215,P<0.001)为乳腺癌新辅助化疗获得病理完全缓解的独立预测因子。分析显示HER-2/CEP17信号比也是新辅助化疗联合靶向治疗和非联合靶向治疗亚组的独立预测因子。Spearman秩相关性分析显示HER-2/CEP17信号比与乳腺癌新辅助化疗病理完全缓解率具有相关性(r=0.235,P<0.001)。结论:HER-2/CEP17信号比与乳腺癌新辅助化疗后病理完全缓解具有相关性,是其独立预测因子。

17β-雌二醇对子宫内膜异位症患者在位子宫内膜间质细胞ERK1/2信号转导通路活化的影响

目的研究17β-雌二醇（17β-E2）对子宫内膜异位症（内异症）患者在位子宫内膜间质细胞胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）信号转导通路活化的影响,探讨ERK1/2信号转导通路在介导雌激素促进内异症发生发展中的作用。方法体外分离培养内异症患者在位子宫内膜间质细胞。用1×10^-6mol/L 17β-E2处理子宫内膜间质细胞不同时间（0~120 min）,然后用MTT法和免疫印迹法（Western blot）检测子宫内膜间质细胞的活性和ERK1/2的活化情况,检测出子宫内膜间质细胞活性最强的时间点。用Western blot和MTT法分别检测不同浓度ERK1/2抑制剂PD98059对1×10^-6mol/L 17β-E2作用20 min后子宫内膜间质细胞活性及ERK1/2活性的变化。结果 1×10^-6mol/L的17β-E2作用20 min时,子宫内膜间质细胞的活性最强,ERK1/2活化在17-βE2作用10 min后出现,在20 min时达高峰;随着PD98059作用浓度的增加,ERK1/2活化水平逐渐下降,浓度为50μmol/L时已被完全阻断;随着PD98059作用浓度的增加,子宫内膜间质细胞活性逐渐下降,在50μmol/L和100μmol/L时,活性最低,但此时仍高于空白对照组。结论 17β-E2增强子宫内膜间质细胞的活性可能与17β-E2通过非转录机制,迅速激活子宫内膜间质细胞的ERK1/2信号转导通路有关。

2型糖尿病KKAy小鼠海马神经元存活信号转导途径的异常及APP17肽对其的改善作用

目的 观察APP17肽对 2型糖尿病KKAy小鼠大脑海马神经元一些信号转导蛋白表达的影响。方法 将KKAy小鼠分为正常对照组 (C组 )、糖尿病组 (DM组 )和APP17肽治疗组 (DM +APP17P组 )。APP17肽皮下注射 ,每周 3次 ,每次 8μg·kg-1。 12wk后将 3组小鼠颈部离断 ,处死 ,冰浴中快速分离海马组织 ,匀浆后 ,用于免疫沉淀并蛋白印迹检测 ,部分快速灌注固定做免疫组化染色和Tunel细胞染色。结果 DM组 pMAPK的表达低于C组和DM +APP17P ;CREB、pCREB、Bax、Bcl 2的表达 3组之间差异无显著性。结论 2型糖尿病KKAy小鼠存在海马胰岛素信号转导通路的异常 ,主要表现为Ras途径和PI3 K两条途径的异常。这种信号转导途径的异常可通过神经元一定程度上的自我调节而改善 ,不出现凋亡状态 ;App17肽作为神经营养因子能激活海马神经元存活信号转导通路上游成分 。

基于JAK/STAT信号通路探究重组人干扰素α-2b联合乙酰半胱氨酸治疗毛细支气管炎患儿喘息反复发作效果及机制

目的 基于Janus激酶(JAK)/信号转导与转录活性因子(STAT)信号通路探究重组人干扰素α-2b联合乙酰半胱氨酸治疗毛细支气管炎患儿喘息反复发作效果及机制。方法 选取2020年3月—2022年2月收治的毛细支气管炎患儿156例,依据治疗方案不同分为观察组和对照组2组各78例。观察组予重组人干扰素α-2b联合乙酰半胱氨酸治疗,对照组予乙酰半胱氨酸治疗。比较2组治疗7 d后临床效果及症状和体征消失时间、住院时间,治疗前及治疗7 d后JAK/STAT信号通路关键蛋白[干扰素调节因子9(IRF9)、信号转导与转录活性因子1(STAT1)和信号转导与转录活性因子2(STAT2)]表达及相关细胞因子[白细胞介素-6(IL-6)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和组织型金属蛋白酶抑制物-1(TIMP-1)]、辅助性T细胞17(Th17)、调节性T细胞(Treg)水平,以及治疗期间不良反应发生率、治疗后6个月喘息复发率。结果 治疗7 d后,观察组总有效率、IRF9、STAT1、STAT2表达和Treg水平高于对照组;IL-6、MMP-9、TIMP-1和Th17水平低于对照组(P<0.01)。观察组咳嗽、喘憋、喘息、湿啰音消失时间及住院时间均短于对照组(P<0.01)。治疗期间,2组不良反应总发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后6个月,观察组喘息复发率低于对照组(P<0.01)。结论 重组人干扰素α-2b联合乙酰半胱氨酸治疗毛细支气管炎患儿喘息反复发作效果显著,可促进症状、体征消失,加速康复进程,降低喘息反复发作风险;机制可能为其抑制IL-6释放,激活JAK/STAT信号通路,促使Th17向Treg转化,增强机体免疫应答,且调控MMP-9、TIMP-1表达,减轻支气管及肺损伤。

IL-17调控PI3K/AKT/FAS/FASL信号通路抑制Hep-2细胞凋亡

目的研究白介素-17(IL-17)对Hep-2细胞凋亡的影响,阐明IL-17通过PI3K/AKT信号通路在抑制Fas/Fas L信号通路从而抑制Hep-2细胞凋亡的部分机制。方法以正常Hep-2细胞为对照组,50 ng/ml 200-17(IL-17刺激剂)为实验组,流式细胞仪检测200-17对Hep-2细胞凋亡率的影响。以Hep-2细胞为对照组,不同浓度200-17(1、50、100ng/ml)为实验组,Western blot法检测200-17作用6 h后各组Hep-2细胞中PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、Fas、Fas L蛋白的表达。结果 Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测结果显示,对照组和实验组凋亡率逐渐增高,与对照组比较,加50 ng/ml 200-17作用6、12、24 h后,Hep-2凋亡率均降低,200-17作用6 h后与对照组比,实验组Hep-2细胞凋亡率降低最明显。Western blot结果显示不同浓度(0、1、50、100 ng/ml)的200-17刺激Hep-2细胞后,随着200-17浓度的升高,Hep-2细胞中p-PI3K、p-AKT蛋白的表达逐渐增加,差异有统计学意义(P <0. 01); PI3K、AKT蛋白表达差异无统计学意义。与对照组比较,1、50、100 ng/ml组200-17刺激6 h后Hep-2细胞内Fas、Fas L蛋白表达降低,差异有统计学意义(P <0. 01)。结论 IL-17可能通过PI3K/AKT/Fas/Fas L信号通路抑制Hep-2细胞凋亡。

17β-雌二醇上调绵羊输卵管上皮细胞β-防御素-2(SBD-2)表达的可能信号通路研究

【目的】探讨17β-雌二醇(E2)上调绵羊输卵管上皮细胞SBD-2表达的可能信号通路。【方法】分离培养绵羊输卵管上皮细胞,将第2代输卵管上皮细胞分为E2(10-8 mol/L)组、雌激素受体拮抗剂ICI182780(10-7mol/L)组、PKA阻断剂KT-5720(1μmol/L)组、PKC阻断剂H-7(50μmol/L)组、NF-κB阻断剂PDTC(50μmol/L)组及空白对照(Control)组,在不同阻断剂组加入各自阻断剂干预绵羊输卵管上皮细胞1h后,在各阻断剂组和E2组中再加入10-8 mol/L 17β-雌二醇培养6h,然后采用实时荧光定量RT-PCR方法检测各组SBD-2mRNA表达水平的变化。【结果】10-8 mol/L 17β-雌二醇可显著上调绵羊输卵管上皮细胞SBD-2mRNA的表达(P<0.05);雌激素受体拮抗剂ICI182780、NF-κΒ阻断剂PDTC、PKC阻断剂H-7均可阻断17β-雌二醇对SBD-2的上调作用,PKA阻断剂KT-5720对17β-雌二醇介导的SBD-2上调无明显影响。【结论】17β-雌二醇上调绵羊输卵管上皮细胞SBD-2的表达由雌激素核受体、NF-κΒ、PKC信号转导通路所介导,而PKA不参与17β-雌二醇对SBD-2的上调作用。

CEP17异常对评判乳腺癌HER-2基因扩增状态的影响

目的探讨使用乳腺癌双色荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测CEP17(17p11.1-q11.1)探针拷贝数与HER-2基因扩增间的关系,分析CEP17异常对乳腺癌HER-2基因扩增状态评判的影响。方法收集742例乳腺癌HER-2基因扩增标本,采用双色FISH技术及免疫组化法检测并进行回顾性分析。结果 742例乳腺癌HER-2 FISH检测结果显示,11例(1.48%)HER-2探针信号数>6个,但由于CEP17探针信号数异常而被判定为基因扩增阴性。结论乳腺癌组织中真正17号染色体多倍体的比例极其稀少;FISH检测的CEP17信号数不等同于真正17号染色体的数目,临床有一定比例的HER-2 FISH结果阴性的患者错失最佳治疗机会。

iNOS及ERK1/2信号转导通路在17β-雌二醇抑制血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的:观察诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)及细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号转导通路在17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)抑制血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖中的作用。方法:采用MTT比色法和Western blot技术,检测E2预处理前后胎牛血清(fetal calf serum,FCS)对VSMCs中DNA合成、iNOS表达及磷酸化的ERK1/2蛋白表达的影响。结果:E2作用24 h,可明显抑制FCS诱导的VSMCs增殖。Western blot的结果显示,FCS孵育VSMCs后,iNOS蛋白的表达下降,磷酸化的ERK1/2蛋白表达增加。E2预处理后,可增加iNOS蛋白的表达,抑制磷酸化ERK1/2蛋白表达。若提前应用iNOS阻断剂L-精氨酸甲酯(L-NAME)孵育VSMCs,可部分逆转E2诱导的磷酸化的ERK1/2蛋白表达下降的效应。结论:E2可抑制FCS诱导的VSMCs增殖,其作用可能与增加iNOS蛋白的表达,抑制磷酸化的ERK1/2表达有关。

IL-17A通过p38 MAPK/ERK1/2信号通路上调慢性鼻窦炎患者MMP-9的表达

目的:探讨白细胞介素17A(IL-17A)在介导慢性鼻窦炎伴鼻息肉(CRSwNP)中基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的作用及机制,为临床治疗CRSwNP组织重塑寻找新靶点。方法:收集以CRSwNP为诊断的患者15名,鼻中隔偏曲患者15名。采用ELISA、RT-qPCR和免疫组织化学染色方法检测患者相关组织中IL-17A和MMP-9的表达水平;HE染色法观察患者钩突及鼻息肉组织黏膜的病变;Western blot检测鼻息肉原代细胞和人鼻黏膜上皮细胞(HNEpCs)中MMP-9和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路蛋白的表达;细胞免疫荧光观察HNEpCs中MMP-9的表达变化。结果:CRSwNP患者IL-17A和MMP-9的表达明显增加,其鼻部组织黏膜炎症浸润明显。鼻息肉及IL-17A刺激的HNEpCs中细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和p38磷酸化表达明显增加,而鼻息肉成纤维细胞或HNEpCs予以ERK1/2或p38抑制剂预处理可降低以上蛋白的表达水平。结论:IL-17A可能在CRSwNP的组织重塑中对MMP-9的调控发挥至关重要的作用,其机制可能与p38 MAPK/ERK1/2信号通路有关。

IL-17-JAK2/STAT3信号通路通过调控p53降低肝癌细胞化疗凋亡敏感性的研究

目的:通过研究肝癌细胞激活白介素-17-蛋白酪氨酸激酶2/信号转导及转录激活因子3(IL-17-janus protein tyrosine kinase 2/signal transducers and activators 3 of transcription,IL-17-JAK2/STAT3)信号通路调控p53表达并下调化疗的凋亡敏感性,以此探讨肝癌细胞化疗耐药的机制。方法:选取我院2012年5月至2015年1月收治的肝癌患者(病理学确诊)及健康体检者各30例,ELISA检测肝癌患者化疗前后及正常对照组血清中白介素-17(interlrukin-17,IL-17)浓度;培养肝癌HepG2细胞,分别加入anti-IL-17R及IL-17后与奥沙利铂共培养,24 h后提取细胞蛋白,Western blot检测肝癌细胞凋亡相关蛋白BAX,Bcl-2表达情况及JAK2/STAT3信号通路活化情况及p53的表达情况;AG490特异性阻断JAK2/STAT3信号通路后检测p53的表达情况。结果:经奥沙利铂化疗后肝癌患者血清中IL-17的浓度[(143.96±33.20)pg/m L]明显高于化疗前[(77.36±15.66)pg/m L]及正常对照组[(26.61±4.95)pg/m L](P<0.05);肝癌细胞加入anti-IL-17R与奥沙利铂共培养24 h后,BAX表达量明显升高、Bcl-2表达量降低,磷酸化蛋白酪氨酸激酶(p-JAK2)、磷酸化信号转导及转录激活因子(p-STAT3)表达量均明显降低,p53表达量升高;而加入IL-17的肝癌细胞,BAX表达量明显降低、Bcl-2表达量明显升高,p-JAK2、p-STAT3表达量均明显升高,p53表达量明显降低。AG490阻断JAK/STAT通路后,肝癌细胞p53的表达水平明显升高。结论:肝癌细胞化疗过程中通过IL-17激活JAK2/STAT3信号通路调控p53的表达进而下调肝癌细胞凋亡敏感性,由此导致肝癌的化疗抵抗。

BMSCs调控JAK2/STAT3途径对肝硬化动物模型Th17/Treg失衡的影响及其机制

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)对肝硬化大鼠Janus激活激酶2(JAK2)/信号转导和转录激活因子3(sSTAT3)信号通路以及T辅助细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)平衡的影响。方法建立大鼠肝硬化模型并进行BMSCs干预。ELISA法检测血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST),HE染色观察肝组织病理损伤,Masson染色观察肝组织纤维化程度并计算胶原蛋白的体积分数(collagen volume fraction,CVF),RT-PCR检测肝组织p-JAK2、p-STAT3、TGF-β1、IL-6 mRNA表达,Western blot检测肝组织p-JAK2、p-STAT3、TGF-β1、IL-6蛋白表达,流式细胞仪检测Th17、Treg百分比并计算比值。结果肝硬化大鼠ALT、AST显著升高,染色可见明显肝坏死和纤维化,p-JAK2、p-STAT3、TGF-β1、IL-6 mRNA和蛋白表达升高,Th17、Th17/Treg显著下降(P<0.05)。BMSCs干预可以显著降低ALT、AST,减轻肝损伤和纤维化程度,下调p-JAK2、p-STAT3、TGF-β1、IL-6 mRNA和蛋白表达,上调Th17、Th17/Treg(P<0.05)。结论BMSCs可以减轻肝硬化大鼠的炎症反应和纤维化程度,下调JAK2/STAT3信号通路磷酸化和Th17/Treg平衡。

APP17肽对2型糖尿病KK小鼠海马神经元超微结构和InsR、IRS-1的影响

为观察APP1 7肽对糖尿病KKAy小鼠 (以下简称KK小鼠 )脑海马神经元部分信号转导蛋白表达的影响 ,并探讨APP1 7肽对神经元的营养作用 ,将KK小鼠分为正常对照组 (C组 )、糖尿病组 (DM组 )和APP1 7肽治疗组(DM +APP1 7P组 ,给予APP1 7肽皮下注射 )。 1 2周后将 3组小鼠处死 ,心脏取血测血糖和血浆胰岛素 ;灌注固定后 ,取海马送电镜检查并作免疫组织化学染色。结果显示 :①DM组与DM +APP1 7P组的血糖、胰岛素水平比C组显著升高 (P <0 .0 5 ) ,但是DM组与DM +APP1 7P组之间无显著差异 ;②DM组海马神经元胰岛素受体 (InsR)、胰岛素受体底物 1 (IRS 1 )的表达低于C组和DM +APP1 7P组 (P <0 .0 5 ) ;③海马超微结构显示DM组海马神经元线粒体肿胀 ,未见凋亡的神经元 ,DM +APP1 7P组和C组神经元基本正常。提示 :APP1 7肽作为神经营养因子能激活信息转导通路 ,从而对神经元凋亡有改善作用。

APP17肽对糖尿病KK小鼠海马神经元胰岛素信号转导途径的影响

目的观察APP17肽对2型糖尿病KKAy小鼠(以下简称KK小鼠)大脑海马神经元胰岛素信号转导蛋白表达的影响。方法根据血糖水平将KK小鼠分为正常对照组(C组)、糖尿病组(DM组)和APP17肽治疗组(DM+APP17P组)。治疗组给予皮下注射APP17肽,每周3次,每次8μg/kg,共12周。处死前尾静脉取血测定糖化血红蛋白、血糖含量;将3组小鼠处死,心脏取血测血浆胰岛素;冰浴中快速分离海马组织,匀浆后,用于免疫沉淀并蛋白印迹检测,部分快速灌注固定做免疫组化染色和Tunel细胞染色。结果与C组相比,DM组与DM+APP17P组的血糖、糖化血红蛋白、胰岛素水平显著升高(P<0.05),但是DM组与DM+APP17P组之间无显著差异;DM组海马神经元胰岛素受体(InsR),胰岛素受体底物-1(IRS-1)的表达低于C组和DM+APP17 P(P<0.05);CREB、pCREB、Bc l-2的表达3组之间差异无统计学意义。Tunel细胞染色3组小鼠海马均未发现Tunel染色阳性细胞。结论2型糖尿病KK小鼠存在海马胰岛素信号转导通路的异常,主要表现为P13-K上游起始途径的异常。这种异常可通过神经元一定程度上的自我调节而改善,并不导致细胞凋亡状态;APP17肽作为神经营养因子能激活海马神经元存活信号转导通路上游成分,从而使存活信号转导通路恢复正常。

ERK1/2蛋白在17β-雌二醇抑制睾酮诱导的心肌细胞肥大反应中的作用

目的观察17β-雌二醇对睾酮诱导的心肌肥大反应的影响,探讨细胞外信号调节激酶(ERK1/2蛋白)在性激素对心肌肥大影响中的作用。方法采用差速贴壁法分离、纯化培养新生SD大鼠心肌细胞,以Bradford法测定心肌细胞蛋白质含量,同位素法分析3H-亮氨酸(3H-Leu)掺入,以免疫印迹法检测心肌细胞ERK1/2蛋白表达水平的变化。结果 10-10～10-6mol/L 17β-雌二醇可明显对抗睾酮诱导的心肌细胞蛋白质含量和3H-Leu掺入的增加,其中以10-8mol/L 17β-雌二醇作用最为明显;预先给予10-6mol/L雌激素受体拮抗剂他莫昔芬作用2 h,可部分取消17β-雌二醇对睾酮诱导的心肌细胞蛋白质含量增加的抑制效应。用50μmol/L ERK1/2上游激酶MEK1/2的特异性抑制剂PD98059预处理2 h不能增强17β-雌二醇对睾酮诱导的心肌细胞3H-Leu掺入的抑制作用;10-8mol/L 17β-雌二醇可以对抗睾酮诱导的心肌细胞ERK1/2蛋白表达增加;10-6mol/L他莫昔芬预处理2 h可部分取消17β-雌二醇对睾酮诱导的心肌细胞ERK1/2蛋白表达增加的抑制作用。结论 17β-雌二醇经雌激素受体介导下调睾酮诱导的心肌细胞ERK1/2蛋白表达,从而抑制由睾酮诱导的心肌细胞肥大反应。

FSH和17β-雌二醇联合作用对仔猪睾丸支持细胞Skp2表达的调节

【目的】确定FSH和雌激素联合作用是否可通过ERK1/2级联调节培养条件下未成熟仔猪睾丸支持细胞中Skp2的表达。【方法】以培养的仔猪睾丸支持细胞为试验材料,通过添加各种信号通路的抑制剂,应用Western blotting和实时荧光定量PCR检测Skp2蛋白、mRNA的表达。【结果】FSH(50 ng.mL-1)和17β-雌二醇(10-9 mol.L-1)联合作用时以时间依赖的方式促进了Skp2蛋白和mRNA的表达(P<0.05),这一作用在30 min时到达高峰;FSH(50 ng.mL-1)、17β-雌二醇(10-9 mol.L-1)和forskolin单独作用均促进了Skp2蛋白和mRNA的表达(P<0.05),FSH(50 ng.mL-1)和17β-雌二醇(10-9 mol.L-1)联合作用对Skp2表达的影响与FSH或17β-雌二醇(10-9 mol.L-1)单独作用无显著差异(P≥0.05),而环磷酸腺苷抑制剂(Rp-cAMP)、蛋白激酶A(PKA)抑制剂(H-89)、L-Ca2+离子通道抑制剂(verapamil)和ERK1/2抑制剂(U0126)单独作用时对Skp2蛋白和mRNA的表达与空白对照相比无显著影响(P>0.05),但都抑制了FSH(50 ng.mL-1)与17β-雌二醇(10-9 mol.L-1)联合作用对Skp2蛋白和mRNA表达的影响(P<0.05)。H-89、verapamil单独作用对ERK1/2(细胞外信号调节的蛋白激酶1/2)活性没有影响,但降低了FSH(50 ng.mL-1)和17β-雌二醇(10-9 mol.L-1)联合作用对ERK1/2活性的影响。【结论】FSH与17β-雌二醇联合作用激活了cAMP-PKA级联和Ca2+内流,而PKA和Ca2+内流又通过影响ERK1/2的活性进而影响Skp2的表达。

17beta-雌二醇通过beta受体和cAMP-ERK1/2级联调节仔猪睾丸支持细胞cyclinA2 mRNA的表达

【目的】确定雌激素是否通过雌激素受体以及在cAMP-细胞外调节的蛋白激酶(ERK1/2)调节培养条件下,未成熟仔猪睾丸支持细胞中cyclinA2 mRNA的表达。【方法】以培养的仔猪睾丸支持细胞为试验材料,通过添加雌激素受体抑制剂以及各种信号通路的抑制剂,应用实时荧光定量PCR检测cyclinA2 mRNA的相对表达量。【结果】17beta-雌二醇(10-9 mol.L-1)以时间依赖的方式促进了cyclinA2 mRNA的表达(P<0.05),这一作用在30 min时到达到高峰。雌激素非特异性受体抑制剂ICI182780、雌激素受体beta抑制剂(ERbetaAnt)和雌激素受体alpha抑制剂(ERalphaAnt)单独作用对cyclinA2 mRNA的表达与空白对照相比没有显著影响(P>0.05),但ICI 182780与ERbetaAnt,而不是ERalphaAnt抑制了17beta-雌二醇诱导的cyclinA2 mRNA的表达(P<0.05)。17beta-雌二醇(10-9mol.L-1)和forskolin均促进了cyclinA2 mRNA的表达(P<0.05),而Rp-cAMP、H-89和U0126都抑制了17beta-雌二醇(10-9mol.L-1)的活性(P<0.05),但3种抑制剂单独作用时对cyclinA2 mRNA的表达与空白相比没有显著影响(P>0.05)。【结论】17beta-雌二醇主要通过ERbeta受体、影响cAMP的产生和ERK1/2激活,进而调节cyclinA2 mRNA的表达。

孕早期双酚A暴露对仔鼠Th1/Th2、Treg/Th17及AhR/TLR4/NF-κB的影响

目的探讨孕早期双酚A(BPA)暴露对仔鼠Th1/Th2和Treg/Th17及AhR/TLR4/NF-κB的影响。方法购置C57BL/6小鼠,雌鼠和雄鼠按照2:1比例合笼交配后,将确认怀孕雌鼠随机分为对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组,实验组自妊娠第0天至第18天分别以8、40和200 mg/kg的BPA溶液(以壬基酚进行标记)灌胃,对照组以等量玉米油灌胃。子代出生21 d后断乳,每窝随机选取1只仔鼠进行下一步研究。比较4组仔鼠体质量、脾质量和脾脏指数,脾脏Th1、Th2、Treg及Th17细胞水平,脾脏AhR/TLR4/NF-κB信号通路蛋白表达水平。结果断乳时,与对照组比较,低剂量组仔鼠脾质量和脾脏指数显著增加(P<0.05);中剂量组仔鼠脾脏指数显著增加(P<0.05);高剂量组仔鼠体质量和脾质量显著降低(P<0.05);低剂量组、中剂量组仔鼠脾脏Th1细胞比例显著降低,Th2细胞比例显著升高(P<0.05);各BPA剂量组仔鼠脾脏Th1/Th2比值显著降低(P<0.05)。中剂量组和高剂量组仔鼠Th17细胞比例显著升高(P<0.05),Treg/Th17比值显著降低(P<0.05);各BPA剂量组仔鼠脾脏AhR、TLR4和NF-κB蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论孕早期BPA暴露可通过激活AhR/TLR4/NF-κB信号通路造成仔鼠Th1/Th2失衡及Treg和Th17细胞分化异常。

IL-21/IL-21R信号在TNBS诱导小鼠炎症性肠病病变形成中的作用研究

探讨IL-21/IL21R信号在炎症性肠病病变形成中对肠固有层辅助T细胞应答的调控机制。利用IL-21R基因敲除小鼠(IL-21R KO),建立TNBS诱导的炎症性肠病动物模型。监测小鼠体重及生存率;HE染色观察小鼠肠组织形态结构及炎症反应情况;分离和提取肠固有层淋巴细胞(lamina propria lymphocyte,LPL),应用流式细胞仪检测Th1、Th2、Th17、Treg细胞比例和绝对数;ELISA法检测LPL培养上清中的细胞因子(IFN-γ、IL-4、IL-17A、IL-10)的分泌。结果显示:与WT小鼠相比,IL-21R KO小鼠体重下降更快,生存率明显降低;HE染色显示IL-21R KO小鼠肠管上皮损伤严重、隐窝大面积消失、大量炎性细胞浸润,并侵犯到黏膜肌层;IL-21R KO小鼠肠固有层Th1细胞应答显著增强,相反Th2、Th17和Treg应答明显抑制。因此,IL-21/IL-21R信号通过调节小鼠肠固有层Th细胞应答,在TNBS诱导的肠炎病变形成中发挥重要的保护性作用。