Notch信号途径效应分子HES1的原核表达及其多克隆抗体的制备与鉴定

目的 原核表达HES1分子 ,并制备其特异性多克隆抗体 ,以研究该分子在肿瘤细胞中的表达情况。方法 诱导表达GST HES1融合蛋白和GST ,经谷胱甘肽 Sepharose 4B亲和纯化后 ,用GST偶联预激活的Sepharose 4B ,以GST HES1为免疫原制备兔抗血清。得到的抗血清经GST Sepharose 4B吸收抗GST成分 ,以间接ELISA和Westernblot鉴定抗体特异性 ,以Westernblot分析胃癌、结肠癌及其相应非癌变组织中HES1的表达水平。结果 成功地表达并纯化了GST HES1融合蛋白。制备的抗HES1多克隆抗体具有很高的特异性 ,与GST或大肠杆菌成分无交叉反应 ,用于进行天然HES1分子的Westernblot检测时效果良好。初步检测发现 ,胃癌和结肠癌中HES1的表达水平明显高于相应的正常组织。结论 通过原核表达并纯化HES1,成功地制备了该分子的特异性多克隆抗体 。