银杏酸、阿奇霉素和大蒜素抗弓形虫增殖效果研究

目的评价银杏酸、阿奇霉素和大蒜素体外和体内抗弓形虫增殖的效果。方法体外试验,培养HFF细胞做为弓形虫宿主细胞,采用MTT法检测3种药物的安全浓度和体外抗弓形虫增殖的效果。体内试验,以腹腔注射的方式给药,观察感染弓形虫小鼠的存活时间,比较3种药物的体内抗弓形虫增殖效果。结果银杏酸和阿奇霉素可显著抑制细胞内弓形虫的增殖,两者效果相近。银杏酸和阿奇霉素均可延长小鼠存活时间。大蒜素抗弓形虫效果微弱。结论银杏酸具有抗弓形虫作用。

人包皮成纤维细胞和人子宫颈癌细胞体外培养弓形虫速殖子

目的比较弓形虫RH株速殖子在人包皮成纤维细胞(humanforeskinfibroblast,HFF)和人子宫颈癌(HeLa)细胞的感染和细胞内增殖情况。方法分别于含一盖玻片的细胞培养皿(35mm)内培养HFF细胞和HeLa细胞。待形成单细胞层后各加入经3μm滤膜纯化的弓形虫RH株速殖子共培养,分别于0.5、1、2、4、8、12、24、36、48、72和96h取出盖玻片,经吉氏染色镜下观察速殖子在两种细胞内的增殖情况。结果与HFF细胞共培养4h后,速殖子即可侵入HFF细胞,1个细胞内可见数十个速殖子;24h可见明显的假包囊,72h细胞被胀破。而与HeLa细胞共培养8h后速殖子才侵入细胞,每个细胞内可见3～5个速殖子,48h形成假包囊,96h大部分细胞被胀破。结论弓形虫RH株速殖子可在HFF细胞和HeLa细胞内增殖,在HFF细胞内的增殖速度快于HeLa细胞。

几种药物抗弓形虫活性的检测

目的筛选出有效的抗弓形虫病药物。方法利用HFF细胞和表达绿色荧光蛋白的弓形虫RH株作为评价系统,选择中药(姜黄素和蒿甲醚)、除草剂(阿特拉津)、其它抗寄生虫药(妥曲珠利、泊那珠利、三氮脒和吡喹酮)及抗癌药(环磷酰胺),初步评价其体外抗弓形虫活性。并通过小鼠急性弓形虫感染治疗试验对姜黄素的体内抗弓形虫效果进行检测。结果姜黄素、蒿甲醚、妥曲珠利、泊那珠利均可显著抑制弓形虫的增殖(P<0.05),姜黄素还可显著抑制弓形虫的入侵(P<0.05);阿特拉津可抑制弓形虫增殖,但差异无统计学意义(P>0.05);姜黄素、蒿甲醚、妥曲珠利、泊那珠利和阿特拉津对弓形虫生长的半数抑制浓度分别是(0.7±0.2)μg/mL,(0.86±0.2)μg/mL,(14.2±2.8)μg/mL,(16.7±4.0)μg/mL,(59.4±4.1)μg/mL,5种药物均是通过直接作用于虫体而影响弓形虫生长;三氮脒、吡喹酮和环磷酰胺在对细胞最高安全浓度(0.2μg/mL,100μg/mL,50μg/mL)时均无抑制弓形虫的增殖或入侵的作用。姜黄素在50~150 mg/(kg·d)时均无延长急性弓形虫病小鼠生存时间的作用。结论姜黄素、蒿甲醚、妥曲珠利、泊那珠利体外均有抗弓形虫活性,为进一步研究有效的抗弓形虫药物提供重要的信息。

牛体外受精胚胎培养技术研究

在COCs体外培养过程中添加共培养物质和采用不同体积的液滴进行培养,以探讨牛卵母细胞的体外培养效果。结果表明,卵丘细胞、卵丘细胞+bFF共培养系统对胚胎发育均有促进作用,其中以卵丘细胞+bFF共培养系统对桑椹胚和囊胚的发育最好,其囊胚率为10.63%,显著高于对照组的7.23%(P<0.05),高于卵丘细胞组的8.50%(P>0.05)。用培养皿微滴培养(50μL)和用4孔板大体积培养(500μL)的试验表明,大体积培养比微滴培养有优势,桑椹胚和囊胚率均较高,其中囊胚率为10.23%,显著高于培养皿微滴培养的9.07%(P<0.01)。

间充质干细胞和淋巴细胞分泌细胞因子的抗衰老功效研究

目的探索体外扩增培养的间充质干细胞和淋巴细胞分泌的天然细胞因子对皮肤的抗衰老功效。方法从健康产妇羊膜和新生儿脐带血单个核细胞分别提取扩增间充质干细胞和淋巴细胞,分别制备含人天然细胞因子的细胞提取物。检测提取物中碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)、转化生长因子(TGF-β1)、干细胞因子(SCF)、γ干扰素(IFN-γ)含量和这两种提取物对人皮肤成纤维细胞(HFF-1)的促增殖活性以及促胶原蛋白合成能力。结果两种细胞提取物中b FGF含量在20pg/mL左右,淋巴细胞提取物中TGF-β1及SCF含量在20pg/mL以上、IFN-γ含量在80pg/mL以上;间充质干细胞提取物中TGF-β1含量在10pg/mL左右,SCF含量在40pg/mL左右、IFN-γ含量在60pg/mL左右。两种细胞提取物均对体外培养的HFF-1细胞有明显促增殖作用,并能促进胶原蛋白的合成。结论羊膜间充质干细胞提取物和淋巴细胞提取物均对皮肤细胞有抗衰老功效,b FGF、TGF-β1等细胞因子的含量检测及对体外培养的HFF-1促增殖实验可作为细胞提取物中细胞因子的活性评估指标。

三七不同部位提取物体外抗氧化功效研究

目的:研究三七不同部位提取物的抗氧化功效,为三七化妆品原料的开发提供实验依据。方法:采用超氧阴离子自由基清除活性实验及羟自由基清除活性实验检测三七根、茎、叶、花提取物对超氧阴离子自由基及羟自由基的清除活性,依据自由基清除率计算半抑制浓度(inhibitory concentration 50,IC50)。采用H;O;诱导人皮肤成纤维细胞(human foreskin fibroblasts, HFF-1)氧化损伤模型,以50 mg·L;的三七根、茎、叶、花提取物分别作用HFF-1细胞,培养24 h后观察细胞形态;MTT法测定细胞活力;微板法检测细胞中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)的活力及还原型谷胱甘肽(reduced glutathione, GSH)和丙二醛(malondialdehyde, MDA)的含量;酶联免疫吸附测定实验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测细胞中Ⅰ型胶原蛋白(type I collagen, ColⅠ)和ColⅢ的含量。结果:三七根、茎、叶、花提取物对超氧阴离子自由基及羟自由基均具有清除作用;与模型组比较,三七根、茎、叶、花提取物均能不同程度的提升细胞活力及SOD活力(P<0.01),提高GSH及ColⅠ、ColⅢ的水平(P<0.05),降低细胞内MDA的含量(P<0.05),改善氧化损伤模型细胞的形态学变化,且三七根提取物组作用效果最为显著。结论:三七根、茎、叶、花提取物均具有明显的抗氧化作用,其中三七根提取物的抗氧化功效最好。